高效液相色譜法測定香砂養胃丸中橙皮苷的含量

劉曉麗 周 清

遼寧省朝陽市藥品檢驗所，遼寧朝陽 122000

香砂養胃丸主要由木香、砂仁、白術、陳皮、茯苓、半夏（制）、醋香附、枳實（炒）、豆蔻（去殼）、姜厚樸、廣藿香、甘草十二味中藥組成，具有溫中和胃的功效。現行質量標準收載于《中華人民共和國藥典》（2010年版）一部中[1]，標準中僅有關于厚樸中厚樸酚的測定項目，無主藥陳皮中橙皮苷的含量測定。本文建立了高效液相色譜方法測定香砂養胃丸中主藥陳皮中橙皮苷的含量測定，方法靈敏度高，重現性好、簡單、準確，獲得了較好的分離效果，能夠更好地控制該藥品的質量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀 （島津LC-20AT，SIL-20A自動進樣器，DGU-20A3脫氣機，CTO-20A柱溫箱、SPD-20A紫外-可見檢測器）。

1.2 試藥

橙皮苷對照品（批號：110721-200512，供含量測定用，中國藥品生物制品檢驗所），磷酸酸為分析純，水為重蒸餾水，乙腈為色譜純，樣品為江蘇平光信誼（焦作）中藥有限公司提供（批號：090526、090714、091025）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適應性試驗

色譜注：Thermo C18（4.6 mm×250 mm，5μm）；流動相：乙腈-0.5%磷酸（20︰80）；檢測波長：283 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：室溫，進樣量：10 μL。在此色譜條件下，峰形良好，理論板數不低于2 000，分離度大于1.5。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液 精密稱取橙皮苷對照品10 mg，甲醇溶解并稀釋至50 mL量瓶中，搖勻，制成對照品儲備液。精密吸取對照品儲備液5.0 mL，甲醇溶解并稀至25 mL量瓶中，搖勻，作為對照品溶液[2]。

2.2.2 供試品溶液 取香砂養胃丸樣品適量磨碎，稱取1.0 g細粉，精密稱定，精密加入甲醇25 mL，置具塞錐形瓶中，密塞，稱定重量，超聲30 min，放冷，再稱定重量，減失重量用甲醇補足，搖勻，濾過，即得供試品溶液[3-4]。

2.2.3 陰性樣品溶液 按香砂養胃丸中處方的組成比例及制備工藝，制備缺少陳皮的陰性樣品，按照“2.2.2”項下方法操作，即得陰性樣品溶液。

2.3 陰性干擾試驗

按照“2.1”項下的色譜條件，分別取對陰性樣品溶液、照品溶液和供試品溶液各10 μL，注入色譜儀，樣品色譜圖中，橙皮苷與其他峰分離較好，而陰性樣品在橙皮苷出峰處無干擾峰出現，證明該方法可行，見圖1。

2.4 線性關系考察

精密量取上述對照品儲備液 1.0、2.0、3.0、5.0、7.0、10.0 mL，用甲醇分別稀釋至25 mL量瓶中，搖勻，進樣量10 μL，按“2.1”項下色譜條件測定，以濃度X（μg/mL）為橫坐標，峰面積Y為縱坐標作進行線性回歸，得回歸方程：Y=6 870.34－5 765.45X，r=0.999 8（n=6），在 8～80 μg/mL 范圍內顯示有良好的線性關系。

2.5 精密度試驗

取批號為090526的供試品溶液10 μL，連續進樣6次，測定峰面積，平均峰面積為692 545，RSD=1.12%，表明精密度良好。

2.6 穩定性試驗

取批號為 090526 的供試品溶液 10μL，在 0、3、6、12、24 h分別測定峰面積，平均峰面積為691 247，RSD=1.05%，表明本溶液24 h內穩定性良好。

圖1 陰性干擾試驗色譜圖

2.7 重復性試驗

取批號為090714的供試品研細，稱取約1.0g，精密稱定，共取 6 份，按“2.2.2”項下方法制備、按“2.1”項下方法測定，測定結果為：平均每1 g含橙皮苷11.345 mg，RSD=1.24%（n=6），表明本方法重復性良好。

2.8 回收率試驗

稱取已知含量的樣品1.0 g，批號091025，并精密稱定，分別精密加入橙皮苷對照品適量按“2.2.2”項下方法制備成不同波度的溶液，按樣品測定方法進行測定，計算回收率，平均回收率為 100.75%，RSD=1.10%（n=6）。見表1。

表1 回收率試驗（n=6）

2.9 樣品測定

取三批樣品研細，稱取約1.0 g細粉，精密稱定，精密加入甲醇25 mL，置具塞錐形瓶中，密塞，稱定重量，超聲30 min，放冷，再稱定重量，減失重量用甲醇補足，搖勻，濾過，濾液做為供試夜，分別精密吸取“2.2.1”項下對照品溶液和供試品溶液10 μL注入色譜儀，計算含量。結果三批樣品中橙皮苷的含量分別為 12.46、11.71、13.65 mg/g；RSD值分別為0.84%、0.68%、0.62%。

3 討論

3.1 超聲時間的選擇

本試驗分別考察了超聲15、30、45 min的效果，結果表明，超聲30 min提取含量較高，故確定甲醇超聲30 min為提取條件。

3.2 流動相的選擇

通過參考文獻，選擇甲醇-醋酸-水[1]，乙腈-水[3]，甲醇-水[5-6]，乙腈-0.5%磷酸分別進行實驗，最后確定乙腈-0.5%磷酸（20∶80）為流動相，因其能獲得較好的峰形、分離效果和較高的柱效。

3.3 色譜柱的選擇

選擇了三種類型色譜柱進行測試[7-8]，CenturySIL C18（4.6 mm×250 mm，5μm），Thermo C18（4.6 mm×250 mm，5μm），Kromasil C18（4.6 mm ×250 mm，5 μm）， 確 定 了Thermo C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱即能達到較高的柱效和很好的分離效果。

本文建立的HPLC法測定香砂養胃丸中橙皮苷的方法重現性、穩定性好，處理較簡單，回收率較好，能夠較好的控制藥品質量。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].一部.北京：中國醫藥科技出版社，2010：176-177，899.

[2]鄒浪，胡壽榮.反相高效液相色譜法測定復方陳香胃膠囊中橙皮苷含量[J].江西中醫藥，2010，41（7）：73-74.

[3]汪金玉，陳康，徐小飛，等.高效液相色譜法測定橘核中橙皮苷的含量[J].廣東藥學院學報，2010，26（5）：501-503.

[4]劉思曼，邊清泉，唐英，等.HPLC法測定香砂養胃丸中橙皮苷和柚皮苷含量[J].化學研究與應用，2008，20（9）：1196-1198.

[5]白麗杰，謝丹，陳曉艷.高效液相色譜法測定四季感冒片中橙皮苷含量[J].中國藥業，2008，17（24）：25.

[6]張旭君.半夏糖漿含量測定研究[J].現代醫院，2012，12（2）：69-72.

[7]周天紅.HPLC法測定香砂養胃丸（濃縮丸）中橙皮苷、厚樸酚及和厚樸酚含量[J].中國藥師，2011，14（1）：67-68.

[8]王海英，趙建澤.HPLC測定香砂養胃丸中橙皮苷的含量[J].中成藥，2005，27（9）：1115-1116.