射頻消融術對原發性肝癌患者甲胎蛋白和外周血CD4 + CD25 + Foxp3 + Treg 細胞的影響

崇楊，江濤，張冬華，王兵濟，王軒*

(1.南京中醫藥大學第一臨床醫學院，江蘇 南京210023;2.解放軍第81 醫院腫瘤外科，江蘇 南京210002)

射頻消融術(radiofrequency ablation，RFA)是近年發展起來的一種治療肝癌的新興手段，具有微創、痛苦少、治療確切、耗時短、并發癥少、可重復治療等優點，日益受到臨床的重視［1]。RFA 為位置深在的較小病灶或肝功能差無法耐受手術的患者提供了可靠的治療手段。眾所周知，在肝癌的治療中，機體免疫功能尤其是細胞免疫功能對預后起到重要的作用。Forkhead 家族叉頭翼狀螺旋轉錄因子(Foxp3)組成性表達CD4+CD25+調節性T 細胞，是真正意義上的調節性T 淋巴細胞，對機體免疫起著決定性的作用［2]。研究表明Treg 細胞在腫瘤患者外周血和腫瘤組織中升高［3]，而且比例越高，腫瘤患者的預后越差［4]。本文擬觀察RFA 治療前后原發性肝癌患者CD4+CD25+Foxp3+Treg 細胞的變化，探討其用于判斷肝癌預后的臨床價值。

1 對象與方法

1.1 病例

選擇2011年6月至2012年6月期間在我科行經皮肝穿刺RFA 治療的58例原發性肝癌患者，其中男40例，女18例。年齡38 ～79 歲，中位年齡(57.5 ± 6.5)歲。肝癌病灶1 ～3 枚，病灶直徑2 ～5 cm，平均3.2 cm。所有患者均按2011年版原發性肝癌診斷標準［5]臨床診斷為原發性肝癌或行肝穿活檢病理學明確診斷。

1.2 治療設備

多電極射頻消融系統(S-1500 射頻治療儀，上海邁德醫療科技公司)，主頻460 kHz，輸出功率1 ～90 W 連續可調，術中阻抗變化和組織凝固性壞死程度由主機自動測試完成。配套使用該公司的VITA(10-161361)型多電極射頻針，穿刺后可呈傘狀均勻張開10 枚電極，展開最大直徑為4.0 cm。若病灶較大者按重疊消融原理多次反復穿刺消融以最大限度滅活病灶。

1.3 檢測方法

于術前、術后1月分別抽血送檢，采用流式細胞計數儀(XL/XL-MCL，美國貝克曼公司)檢測CD4+CD25+Foxp3+/CD4+比值及CD4+/CD8+比值。采用全自動化學發光免疫分析儀(ACCESS，美國貝克曼公司)檢測甲胎蛋白含量。術后1月隨訪，行彩超、超聲造影、CT、MRI 等檢查明確有無肝內、肝外復發、轉移。

1.4 療效標準

均按衛生部辦公廳公布的《腫瘤射頻消融治療技術管理規范》療效標準評價:射頻消融后1 個月左右，采用對比增強CT/MRI 或超聲造影判定腫瘤是否被完全消融。獲得完全消融的病灶表現為完全無血供即影像學表現為無增強。

1.5 統計學方法

所有檢測結果以均數±標準差(±s)表示，應用SPSS 13.0 統計軟件包進行統計學分析。兩個獨立樣本間采用Wilcoxon 檢驗，術前術后兩樣本間采用配對t檢驗，以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 療效

本組所有患者經過射頻消融治療后無死亡病例，無射頻消融相關手術并發癥，均于術后1月正常隨訪和完成檢查、檢驗，無失訪。這58例患者中術前甲胎蛋白正常者4例，甲胎蛋白值10 ～400μg/L者30例，甲胎蛋白值＞400 μg/L 者24例。術后復查所有病灶完全消融者39例，不完全消融者5例，發現新病灶者8例。術后1月甲胎蛋白恢復正常者38例，甲胎蛋白部分降低但未達到正常范圍者16例，未降低反而增高者4例。

2.2 術前甲胎蛋白與CD4+CD25+Foxp3+Treg 細胞的關系

如果將術前甲胎蛋白值按800 μg/L 進行分組來觀察CD4+CD25+Foxp3+/CD4+比值及CD4+/CD8+比值兩項細胞免疫指標，我們發現 甲胎蛋白明顯升高組的患者CD4+/CD8+比值顯著降低，CD4+CD25+Foxp3+Treg 明顯增高，兩指標在兩組間差異均有統計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 術前甲胎蛋白與CD4 +CD25 +Foxp3 + /CD4 +變化

2.3 RFA 后甲胎蛋白恢復正常患者CD4+CD25+Foxp3+ /CD4+的變化

術后1月甲胎蛋白恢復正常的38例外周血中CD4+/CD8+比值未見明顯變化，但射頻消融后CD4+CD25+Foxp3+/CD4+比值明顯下降，差異有統計學意義(P＜0.01)。見表2。

表2 甲胎蛋白恢復正常患者中CD4 +CD25 +Foxp3 + /CD4 +的變化

2.4 甲胎蛋白部分降低但未達到正常范圍患者CD4+CD25+Foxp3+ /CD4+的變化

本組射頻消融術后有16例患者甲胎蛋白有所下降，但未達正常水平。這部分病例CD4+/CD8+比值在射頻前后變化不明顯，但CD4+CD25+Foxp3+/CD4+在射頻消融后明顯降低，差異有統計學意義(P＜0.05)。見表3。

2.5 術后甲胎蛋白增高患者CD4+CD25+Foxp3+ /CD4+的變化

有4例患者術后甲胎蛋白不降反增，其CD4+CD25+Foxp3+/CD4+及CD4+/CD8+均變化不明顯。見表4。

表3 甲胎蛋白部分降低但未達到正常范圍患者CD4 +CD25 +Foxp3 + /CD4 +在射頻前后的變化

3 討論

目前常規治療原發性肝癌的方法如手術切除、肝動脈插管化療栓塞術對機體的免疫功能干擾大，手術后早期出現明顯的免疫抑制，可促進腫瘤細胞的生長，增加了腫瘤的轉移和復發率［6]，對肝癌患者不利。射頻消融治療原發性肝癌的療效已得到臨床上的肯定，有文獻認為有增強細胞免疫功能的作用［7]。

CD4+細胞為輔助性T 細胞，幫助完成抗腫瘤免疫，在協同清除、消滅腫瘤細胞方面有重要作用，CD4+細胞減少可使腫瘤發生免疫逃逸，CD8+細胞增多往往引起細胞免疫功能損害，我們常通過CD4+/CD8+比值來反映細胞免疫功能［8]。腫瘤患者的細胞免疫缺陷與腫瘤的發生、發展及預后密切相關［9]，本研究結果中我們發現甲胎蛋白顯著升高組的患者CD4+/CD8+比值異常增高，也同樣反映了這個問題。但我們發現CD4+/CD8+比值在消融術后短期內未見明顯變化，因此無法作為即時反映免疫功能變化的參考指標。

Sakaguchi 等［10]首次定義CD4+CD25+Foxp3+Treg 細胞的概念后，越來越多證據表明CD4+CD25+Foxp3+Treg 細胞是具有免疫抑制作用的真正意義上的Treg 細胞，Foxp3 在Treg 細胞發育和發揮功能的過程中起決定作用。于榮等［11]的研究表明CD4+CD25+Foxp3+Treg 可在有效治療后明顯下降，并建議將其作為評估療效的重要預測指標之一。本研究檢測了射頻消融術前術后CD4+CD25+Foxp3+/CD4+比值的變化，結果顯示RFA 治療后外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg 細胞出現顯著變化，在術后甲胎蛋白恢復正常的患者中CD4+CD25+Foxp3+Treg 在射頻治療后1月迅速下降，提示RFA后細胞免疫功能得以恢復或者是抗腫瘤免疫的增強，因此我們認為射頻消融可通過免疫途徑對機體產生積極影響。

綜上所述，本研究提示CD4+CD25+Foxp3+Treg細胞在射頻消融治療前后的變化與甲胎蛋白存在相關性，對肝癌患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg 細胞水平的監測，不但有利于了解患者的免疫狀態，對肝癌的預后評估也具有重要的意義。因本研究例數較少，CD4+CD25+Foxp3+Treg 細胞的水平變化能否成為一種預后預測指標，需要今后作進一步的研究。

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