湖州地區(qū)蟬花中小極性組分的氣質(zhì)聯(lián)用分析

歐曉陽(yáng)，許閃閃，袁 強(qiáng)

(1.浙江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，杭州 310053；2.浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院，杭州 310005)

蟬花[1]為麥角菌科大蟬草(CordycepscicadaeShing)的無(wú)性型蟬擬青霉(PaecilamycescicadaeMiqueSamson)寄生在蟬科昆蟲山蟬(CicadaflammataDist)若蟲上的子座及若蟲尸體形成的蟲菌復(fù)合體，主產(chǎn)于浙江、四川、安徽、福建、廣東、云南、江蘇等地。蟬花是菌蟲復(fù)合體藥材，主要藥用部位為子座及寄主昆蟲的尸體(菌核)。宋代唐慎微所著的《經(jīng)史證類備急本草》中記述：“蟬花，味甘，寒，無(wú)毒。主小兒天吊，驚癇螈，夜啼心悸。”現(xiàn)代研究證明蟬花具有免疫調(diào)節(jié)[2]，滋補(bǔ)強(qiáng)壯[3]，抑制腫瘤[4-5]等作用。本文對(duì)采集自浙江湖州地區(qū)的蟬花進(jìn)行化學(xué)成分研究，根據(jù)相似相容原理，選定石油醚為其小極性溶劑，乙酸乙酯為其中等極性溶劑，報(bào)道其中石油醚部位和乙酸乙酯部位17個(gè)化合物的定性分析結(jié)果。

1 儀器與材料

1.1 儀器 SHIMADZU GC/MS-QP 2010氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，配備電子轟擊源(EI)、SIL-10Advp自動(dòng)進(jìn)樣器；Sartorius-BS110S型分析天平(北京賽多利斯天平有限公司)；FA2004AN型電子分析天平(上海恒平科學(xué)儀器有限公司)；KQ5200超聲波清洗器(昆山市超聲波儀器有限公司);R-204型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海申生科技有限公司)；HH-S型水浴鍋(鞏義市英峪予華儀器廠)。

1.2 藥材與試劑 蟬花藥材收購(gòu)自湖州地區(qū)，經(jīng)浙江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院宋捷民教授鑒定，蟬花為麥角菌科真菌蟬擬青霉(Paecilomycescicadae(Miq.)Samson)寄生于蟬蛹體上的干燥復(fù)合體。乙醇、石油醚、乙酸乙酯均為分析純。

2 樣品的提取分離與分析方法

2.1 蟬花樣品的制備[6-7]取蟬花粉末(過(guò)三號(hào)篩)50 g,加10倍量95%乙醇加熱回流提取3次，每次3 h，合并提取液，減壓回收乙醇至無(wú)醇味，得干浸膏。將此浸膏分散于1 000 mL去離子水中，超聲制成水混懸液。依次用石油醚、乙酸乙酯進(jìn)行萃取，分別得到石油醚萃取部位(A)和乙酸乙酯萃取部位(B)。

A：回收溶劑，得到石油醚部位浸膏，浸膏用適量丙酮溶解后，作為供試品溶液。

B：回收溶劑，得到乙酸乙酯部位浸膏，浸膏用適量丙酮溶解后，作為供試品溶液。

2.2 GC-MS色譜條件[8-9]GC分析條件：Rtx-5MS毛細(xì)管色譜柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm，安捷倫公司)；載氣：He(純度99.999%)；柱流速控制；恒壓：67.2 Mpa；載氣總流速:30 mL/min；柱流速：1.19 mL/min。不分流進(jìn)樣：1 μL；柱溫箱程序升溫：初溫50 ℃，以10 ℃/min數(shù)率升至100 ℃,然后從100 ℃以6 ℃/min數(shù)率升至280 ℃(保持15 min)。

EI/MS分析條件:氣相色譜-質(zhì)譜接口溫度：230 ℃；離子源真空度：0.1 MPa；離子源溫度:200 ℃；電子能量：70 eV；燈絲電流：60 μA；檢測(cè)器電壓：0.78 kV；四極桿溫度：150 ℃；溶劑延遲時(shí)間4.0 min；調(diào)諧方式：自動(dòng)調(diào)諧；質(zhì)量掃描范圍：60-450 amu；SIM掃描方式間隔：0.2 s。

3 結(jié)果

吸取各供試品溶液1 μL,進(jìn)樣，按照2.2項(xiàng)下的實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行GC-MS分析，得到GC-MS總離子流圖。通過(guò)氣相質(zhì)譜分析工作站NIST質(zhì)譜標(biāo)準(zhǔn)圖庫(kù)進(jìn)行檢索，按各色譜峰的質(zhì)譜裂解碎片圖與文獻(xiàn)核對(duì)，對(duì)基峰質(zhì)荷比和相對(duì)峰度等進(jìn)行比較，并參照有關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行鑒定確認(rèn)，從而鑒定出蟬花醇提物石油醚部位和乙酸乙酯部位化合物，共17種。

蟬花石油醚部位的化合物經(jīng)定性分析，主要成分為正十三烷、甘菊藍(lán)、正十六烷、肉豆蔻酸、肉豆蔻酸乙酯、十五酸乙酯、二十五烷酸、棕櫚酸乙酯、硬脂酸、反式角鯊烯、麥角甾醇，見(jiàn)表1，總離子流圖見(jiàn)圖1。

表1 蟬花石油醚部位的化合物定性分析結(jié)果

蟬花乙酸乙酯部位的化合物經(jīng)定性分析，主要成分為肉豆蔻酸乙酯、吡咯烷乙酸乙酯、鄰苯二甲酸二異丁酯、酚酞二丁酯、十八酸乙酯、膽甾醇、月桂酸，見(jiàn)表2，總離子流圖見(jiàn)圖2。

表2 蟬花乙酸乙酯部位的化合物定性分析結(jié)果

圖1 蟬花石油醚部位總離子流圖(TIC)色譜圖

圖2 蟬花乙酸乙酯部位總離子流圖(TIC)色譜圖

4 討論

蟬花為浙江省特色中藥資源，長(zhǎng)期以來(lái)的臨床應(yīng)用及科學(xué)研究表明蟬花具有類似冬蟲夏草的功效，而價(jià)格只占到冬蟲夏草的百分之一，是理想的冬蟲夏草的代用品。

本實(shí)驗(yàn)對(duì)蟬花進(jìn)行乙醇提取，對(duì)石油醚萃取部位和乙酸乙酯萃取部位的化學(xué)成分進(jìn)行了研究，將分離得到的成分統(tǒng)一進(jìn)行了定性鑒別。采用氣質(zhì)聯(lián)用共鑒定出17種化學(xué)成分，其中麥角甾醇、膽甾醇、甘菊藍(lán)、硬脂酸、月桂酸、肉豆蔻酸等為蟬花、冬蟲夏草共有成分[10-12]。

此外，王琪等[13]指出麥角甾醇為蟬花的活性成分之一，具有抗氧化能力，其作用部分等同于維生素D2[14]，能維持及調(diào)節(jié)血漿鈣、磷正常濃，對(duì)防治兒童佝僂病、老年骨質(zhì)疏松有重要作用[15]。有研究[16]初步表明麥角甾醇可以抑制對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2增殖。甘菊藍(lán)對(duì)傷口具有抗菌消炎作用。角鯊烯對(duì)人體和動(dòng)物體有解毒作用，能治療皮炎和潰瘍等，并且具有較好的抗腫瘤作用[17]。以上均是對(duì)人體有益的生理活性物質(zhì)。揮發(fā)油成分如肉豆蔻酸、十五酸乙酯、十八酸乙酯、月桂酸等，是蟬花的致香成分，應(yīng)用于多種食用香精配方，使蟬花蟲體具有香味。

本研究能更全面、真實(shí)地反映出蟬花藥材中的化學(xué)組分，為蟬花替代冬蟲夏草提供了實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，并為蟬花的進(jìn)一步開發(fā)提供了物質(zhì)基礎(chǔ)，也對(duì)浙江湖州產(chǎn)地的蟬花鑒別提供了一定的依據(jù)。

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