中醫藥治療白癜風國內動物實驗研究概述

歐柏生，魏 飛，馮 杲，覃芳芳

白癜風（Vitiligo）是一種常見的獲得性色素脫失性皮膚病，屬中醫學“白癜”、“白駁風”、“白駁”或“白處”等范疇，是臨床上難治性皮膚病之一。有關白癜風的病因及發病機制至今尚未完全闡明，隨著近年來細胞生物學、生物化學、分子生物學、醫學免疫學等的發展，中醫藥對于白癜風的實驗研究也越來越深入，并取得了較大進展。現將近年與白癜風相關的中醫藥實驗研究概述如下。

1 實驗性白癜風模型豚鼠的研究概況

彭英等[1]觀察驅白巴布期膠囊對豚鼠實驗性白癜風的療效，采用氫醌化學脫色法制造豚鼠實驗性白癜風模型，將模型豚鼠給予不同劑量的驅白巴布期膠囊，治療結束后，采用多巴和鐵染色觀察黑素細胞及黑色顆粒的變化，免疫組織化學切片法觀察Tyr含量變化，結果表明實驗后各劑量驅白巴布期膠囊給藥組及預防組黑素細胞計數較模型組比較明顯升高，基底含黑素顆粒細胞計數較模型組比較也顯著提高;酪氨酸酶（Tyr）表達較模型組也顯著升高。江濤等[2]觀察白癜風凝膠對豚鼠實驗性白癜風的療效，應用化學脫色法制備實驗性白癜風動物模型，用白癜風凝膠進行治療，并與白癜風酊的療效進行比較，以表皮毛囊黑素生成、膽堿酯酶（CHE）和Tyr活性為考察指標，結果白癜風凝膠比白癜風酊對白癜風豚鼠的黑素生成、膽堿酯酶和Tyr的活性影響更顯著。梁毅等[3]研究加味愈白丸對實驗性白癜風模型豚鼠的治療作用，采用氫醌脫色法制備實驗性白癜風豚鼠模型，觀察加味愈白丸低、中、高劑量組及陽性對照組對實驗性白癜風模型豚鼠血液中 Tyr、單胺氧化酶（MA0）、CHE 和丙二醛（MDA）、免疫器官臟器系數、血液流變學各項指標以及皮膚黑素的影響，結果表明加味愈白丸能夠使模型豚鼠血漿中Tyr含量明顯增多，MA0值降低，CHE活力降低，MDA含量減少，免疫功能增強，血液粘稠度降低以及皮膚黑素的生成增加。

2 中藥的作用機制

2.1 中藥對黑素細胞的影響

2.1.1 直接干預黑素細胞 崔玲等[4]通過測定中藥白凈沖劑（當歸、桃仁、生地黃、川芎、赤芍藥、女貞子、黃芩、郁金、刺蒺藜、旱蓮草、菟絲子等）含藥血清對黑素細胞增殖和合成黑素量有明顯促進作用。馬慧群等[5]用包被纖維粘連蛋白的48孔培養板檢測黑素細胞黏附，用微孔膜研究黑素細胞遷移，結果表明補骨脂、白芷可同時促進黑素細胞黏附和遷移，提示兩者的促黑素細胞黏附作用無顯著性差異，而促黑素細胞遷移作用有顯著性差異，補骨脂、白芷均可通過增加黑素細胞黏附和/或遷移對白癜風產生治療作用。馬景昕等[6]選擇在離體實驗中對Tyr有激活作用的旱蓮草等7種中藥，以棕色豚鼠為動物模型，采用mRNA原位雜交觀察中藥外涂對豚鼠皮膚TyrmRNA水平的影響，并schmorl法染色和多巴—氧化酶染色觀察中藥促色素生成及黑素細胞增殖的作用，結果表明原位雜交顯示中藥處理組的Tyr陽性細胞數和雜交信號明顯高于對照組，尤其以旱蓮草、夏枯草、刺蒺藜等顯著。schmorl法染色和多巴—氧化酶染色示7種中藥能使豚鼠表皮基底層內含有黑素顆粒的細胞數和多巴陽性細胞的數量增多，但7種中藥的兩種作用并不完全平行，旱蓮草等7種中藥均具有上調豚鼠皮膚Tyr的基因表達、促進黑素生成和黑素細胞增殖的作用，提示中藥的作用不僅限于轉錄水平，有可能影響黑素細胞的增殖和黑素顆粒的生成。薛文輝等[7]用MTT法測定中藥消白靈湯（當歸、赤芍藥、川芎、補骨脂、白芷、防風、熟地黃、菟絲子、刺蒺藜）及其主要成分不同濃度對體外培養的鼠B16FIO黑素瘤細胞系黑素細胞生長增殖的情況；用NaOH裂解法測定中藥消白靈湯及其主要成分不同濃度對黑素細胞黑素合成的影響，結果表明中藥消白靈湯能促進黑素細胞增殖和黑素合成，并提示補腎陽藥和養血活血藥在治療白癜風的組方用藥中的重要作用。譚城等[8]選取7種中藥單體，采用蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法體外測定Tyr活性。結果表明柚皮素、愈創木酚、濱蒿內酯、7-甲氧基香豆素對Tyr具有輕度的激活作用，而山柰素對Tyr有明顯的激活作用。

2.1.2 影響內皮素（ET-1） 張煥梅等[9]研究表明ET-1在白癜風的發病中起著較為重要的作用，能促進黑素細胞增殖，還能誘導毛囊處毛根鞘黑素細胞向表皮移動。馬慧軍等[10]體外研究ET-1對毛囊外根鞘無色素黑素細胞（AMMC）黏附和移行的作用，采用免疫熒光雙重染色法對AMMC分別進行羅丹明（紅色）和異硫氰酸（綠色）標記纖維型-肌動蛋白（F-actin）、β微管蛋白，激光共聚焦顯微鏡觀察3種濃度ET-1處理前后AMMC纖維型-肌動蛋白、β微管蛋白形態的變化。結果表明ET-1在體外可以促進AMMC的黏附和移行,其作用可能與誘導束狀應力纖維形成和促進其向細胞膜內側分布有關。管曉春等[11]采用角質形成細胞體外培養的方法，將白芷、補骨脂等15味單方和其復方中藥處理后，放射免疫方法測定培養的上清液中ET-1的含量，結果表明白芷和補骨脂有顯著的上調角質形成細胞分泌ET-1的作用，因此增加ET-1的分泌是其治療白癜風的機制之一。

2.2 中藥與Tyr Tyr是皮膚黑素合成的關鍵酶，已經證實8-甲氧補骨脂素（8-MOP）對Tyr有激活作用，一些體外實驗表明某些中藥的作用強度與8-MOP基本相同甚至更強，為臨床篩選治療白癜風的中藥提供了實驗依據。李曉捷等[12]觀察中藥菟絲子水提取物對AMMC分化的誘導作用，以8-MOP為陽性對照，菟絲子水提取物以濃度依賴方式促進黑素的生成，50.0 mg/ml的作用與8-MOP作用相當。而且發現AMMC細胞內線粒體明顯增多，并且線粒體擴張，說明其功能活躍，進一步研究AMMC分化的機制發現菟絲子的提取物可以直接增強Tyr的活性，且有很強的促進作用，因此推斷菟絲子促進AMMC的分化作用與其激活Tyr活性有關。李洪武等[13]采用蘑菇Tyr多巴速率氧化法體外測定白癜風丸（補骨脂、當歸、地膚子、刺蒺藜）及其組方中中藥對Tyr的活性的影響，白癜風丸和各組方中藥的乙醇提取液對Tyr的活性有顯著性提高，說明白癜風丸能夠通過提高Tyr的活性達到治療白癜風的目的。劉利平等[14]通過實驗比較白癜風系列丸劑與白癜風顆粒劑對Tyr活性影響，結果表明這些制劑中均含有激活Tyr促進黑素合成的成分。劉之力等[15]通過六種中藥復方乙醇提取物對Tyr激活作用及動物致色素作用的研究，結果表明6種中藥復方均使豚鼠表皮基底層中含黑素顆粒細胞增多，對Tyr具有激活作用的中藥組成復方后并不一定對Tyr有激活作用，中藥復方在離體和活體上的作用并不完全平行，提示中藥對黑素生成的機理，不僅限于對Tyr的激活作用，提示對白癜風病的治療應該遵循辨證論治的原則。涂彩霞等[16]通過體外實驗觀察47種中藥乙醇提取物對Tyr的激活作用及對酶動力學的影響，結果表明19種中藥的乙醇提取物能顯著激活Tyr的活性，其中雞血藤、夏枯草、女貞子、薄荷、潼蒺藜、申姜、旱蓮草、黃芩、澤蘭、甘草和山（毛）慈姑對Tyr的激活作用均明顯高于補骨脂素；中藥對Tyr的激活作用表現為競爭性、非競爭性和混合性激活作用，說明部分中藥治療白癜風有效與其激活Tyr有關，具有混合性激活作用的中藥對Tyr活性影響較大。

2.3 對免疫功能的影響 吳蓓玲等[17]觀察白癜風顆粒劑、白癜風搽劑聯合UVA光療治療前后白癜風患者外周血T細胞亞群及Fas/FasL表達量的改變，探討其與白癜風發生的關系及臨床意義，采用流式細胞儀進行T細胞亞群檢測及外周血淋巴細胞及Fas/FasL定量檢測，結果白癜風的發病與T淋巴細胞介導的自身免疫功能紊亂有關，白癜風顆粒荊、白癜風搽劑聯合合UVA光療可通過有效逆轉外周血淋巴細胞的Fas/FasL表達異常，誘導淋巴細胞的正常凋亡，調整機體的免疫功能發揮療效。李振魯等[18]報道白癜丸對免疫抑制小鼠的免疫器官胸腺有明顯的增重作用，可顯著提高地塞米松致免疫低下小鼠溶血素含量。提示白癜丸是通過免疫力、調節免疫功能紊亂而達到臨床治療的目的。成愛華等[19]研究黑素再生中藥對白癜風患者免疫功能的影響，結果發現白癜風患者治療后的免疫球蛋白IgA、IgG水平較治療前有非常顯著的改善（P<0.01），表明黑素再生中藥能提高機體免疫水平,具有降低體液免疫及增強細胞免疫等功能。

綜上所述，中醫藥治療白癜風的實驗研究主要體現在對中藥單體、單味中藥、復方中藥對黑素細胞增殖、Tyr含量及活性、內皮素和機體免疫力的影響的研究，從動物模型、細胞分子水平層面來闡明中藥治療白癜風的作用靶點和機理。研究證明,養血活血、滋補肝腎、含光敏感物質中藥可能對白癜風治療有效。但以上實驗研究也有不足之處：①缺乏對中藥治療白癜風的藥動學研究；②缺乏中醫理法方藥理論的指導，多采用西醫的觀點指導實驗；③多為低水平重復實驗,有效藥物間的橫向比較實驗較少；④現行的動物實驗造模方式并不完全符合白癜風的病理變化，實驗結果往往并不完全符合臨床。今后中藥治療白癜風的實驗室研究應該充分考慮中醫藥的辨證論治和個體化治療思想，結合現代皮膚病學的研究成果，應用臨床療效可靠的中藥復方研究對黑素細胞增殖、內皮素、Tyr和免疫學等指標的影響，以及加強實驗動物模型科學化的構建應該是中醫藥治療白癜風實驗室研究的方向之一。另外，白癜風對患者的心理造成較大的傷害，越來越多的臨床證據表明白癜風發病與神經免疫因素相關，神經肽（NPY）作為一種重要的神經遞質在各型白癜風尤其是與神經關系更為密切的節段型白癜風的發病中可能起到重要的作用[20，21]。目前人們對于該領域的認識尚未完全明確，主要的研究也只停留在細胞水平，還有許多分子生物學的機制需要科學工作者不斷地深入研究。這也符合現代醫學發展模式，即生物一心理一社會醫學模式對疾病治療的認識，值得醫家從神經免疫學的角度進一步探討。

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