孕婦外周血胎兒有核紅細胞檢測與優生優育

王志宏（綜述），李陳莉（審校）

（1.承德醫學院附屬醫院產科，河北承德 067000；2.河北醫科大學基礎醫學院組織胚胎學教研室，河北石家莊 050017）

·綜 述·

孕婦外周血胎兒有核紅細胞檢測與優生優育

王志宏1（綜述），李陳莉2*（審校）

（1.承德醫學院附屬醫院產科，河北承德 067000；2.河北醫科大學基礎醫學院組織胚胎學教研室，河北石家莊 050017）

孕婦；紅細胞；優生學；綜述文獻

目前國內外常用的產前診斷胎兒遺傳性疾病的技術是羊水穿刺，其常見的并發癥是流產和絨毛膜羊膜炎［1］。有創產前診斷的并發癥成為醫療糾紛的潛在因素。因此，無創產前診斷成為廣大優生遺傳學者們一直在積極探索的課題。經過幾十年的大量的研究，利用孕婦外周血胎兒細胞或游離遺傳物質診斷胎兒遺傳性疾病成為目前比較有發展前景的無創產前診斷方法［2］，其中，孕婦外周血胎兒有核紅細胞（fetal nucleated red blood cell，FNRBC）被認為是較理想的無創產前診斷的靶細胞［3］。在不斷的臨床試驗研究過程中，學者們發現有些高危妊娠如妊娠高血壓疾病子癇前期［4-5］、妊娠期糖尿病［6］、慢性胎兒宮內窘迫［7］發生時母血中胎兒有核紅細胞數量增加。因此，母血中FNRBC數目增加在產前預測病理妊娠的發生及發病機制方面的研究引起廣大產科臨床醫師的關注。

1 FNRBC的特點

FNRBC是胎兒造血系統建立和發育過程中胎兒血液循環中出現的特征性細胞，FNRBC含有胎兒基因的全部遺傳信息，可直接進行遺傳學分析，其平均壽命較短，適合用于第1次及多次妊娠婦女的產前診斷，而且能表達多種相對穩定特異性抗原，如轉鐵蛋白受體、Glycophorin A受體、多種胎兒血紅蛋白肽鏈（γεζ），這些都有利于對細胞進行分類、鑒別和富集。

2 孕婦外周血FNRBC的檢測方法

孕早期胎兒血液中有核紅細胞含量豐富，但透過胎盤進入到孕婦外周血中的FNRBC數量很少，需特殊的方法才能檢測得到。目前已知主要的檢測方法有熒光激活細胞分選法、磁激活細胞分選法、免疫磁珠分離法、密度梯度離心法、流動分離、選擇性紅細胞裂解、凝集素和其他方法。目前沒有確定一種簡便經濟、準確度較高的用于分離純化孕婦外周血FNRBC的方法。

2.1 熒光激活細胞分選法（即流式細胞計數法）：原理是用熒光染料標記FNRBC特異性的單克隆抗體，與相應的抗原識別，然后通過細胞分選器將FNRBC從整個細胞群體中分離出來。常用的FNRBC表面抗原有轉鐵蛋白受體、血型糖蛋白A、血栓敏感素受體及CD35、CD47。由于至今尚未發現任何一種FNRBC特有的表面抗原，故常運用多種表面抗原進行綜合篩選。這種方法分離出的FNRBC純度高，但價格昂貴，操作復雜，臨床不宜推廣。

2.2 磁激活細胞分選法：原理是用FNRBC特異性的單克隆抗體與抗原識別，將抗體用磁珠標記，在外加磁場的作用下，磁激活細胞分選器可將樣品中帶磁與不帶磁的細胞分開，以達到分離純化的目的。此種方法簡便、省時，而且可在短時間內分離大量及多個樣品，但分離效率不及熒光激活細胞分選法。

2.3 密度梯度離心法：該方法是根據胎兒細胞與母體細胞在體積、密度、沉降系數、滲透壓等方面不同，通過離心分離出胎兒細胞。這種方法經濟簡便，獲取細胞比例高，容易在臨床推廣，但精確度稍差，可作為實驗前的篩選方法，然后結合其他方法如熒光激活細胞分選法、磁激活細胞分選法或顯微操作，才能較好地獲得胎兒有核紅細胞。當前應用較成熟的密度梯度離心法主要有一倍密度梯度離心法、二倍密度梯度離心法及不連續三倍密度梯度離心法。文獻［8］表明，二倍密度梯度離心法優于其他密度梯度離心法，配以適宜的濃度可大幅度提高FNRBC分離率。

3 檢測孕婦外周血FNRBC在優生優育中的應用

3.1 胎兒染色體異常的篩選和診斷：Krabchi等［9］報道16例懷21-三體綜合征胎兒的孕婦外周血中FNRBC數量為6～32個/mL，比正常孕婦明顯增多，提示如果把母血中FNRBC計數增加作為21-三體胎兒篩查的一項指標，結合唐氏篩查三聯生化檢查及B超檢查，可能會減少21-三體產前篩查結果的假陽性率。相文佩等［10］研究提示血清三聯篩查、超聲檢查結合病史篩選出高危孕婦，然后利用母血中FNRBC進行多重引物原位雜交監測細胞染色體，可作為快速、無創性產前診斷唐氏綜合征的有效模式。

3.2 孕婦外周血FNRBC計數與高危妊娠：嚴重的妊娠并發癥可引起胎盤病理改變間接引起胎兒血供減少而缺氧。李芹等［11］研究表明孕婦外周血FNRBC數量變化與胎盤損傷程度相關，孕婦外周血FNRBC數量變化可作為間接反映胎盤損傷程度的指標之一，胎盤受損后致胎盤功能下降，胎兒缺氧，缺氧刺激胎兒促紅細胞生成素增加以增加攜氧能力，因此血液中不成熟紅細胞增加，通過胎盤屏障進入母血中的FNRBC計數增加。Boskabadi等［12］研究顯示新生兒有核紅細胞百分數和有核紅細胞的絕對值可作為評估圍產期胎兒（或新生兒）缺氧早期發病及嚴重程度的一項指標。胎兒臍血收縮期蜂值流速/舒張期流速（sytolic/diastolic，S/D）比值，是目前較常用的反映臍動脈血流阻力的指標。嚴重的妊娠并發癥引起胎盤-胎兒血供減少，胎兒臍動脈舒張末期血流速度減小，S/D比值增高，提示胎兒缺氧。杜曉紅等［13］報道多種產科并發癥及胎兒畸形可致臍動脈血流S/D比值增高，存在高危因素時，臍動脈血流監測對預測不良妊娠結局有較高的實用價值。妊娠高血壓組胎兒臍動脈血S/D比值較正常組增高，且胎兒臍動脈血S/D比值與胎兒體質量呈負相關［14］。

3.3 孕婦外周血FNRBC計數與妊娠高血壓疾病：妊娠高血壓疾病基本的病理變化是全身小動脈痙攣，全身各系統各臟器灌流減少，因為子宮胎盤血流灌注減少引起胎兒缺氧，因此孕婦外周血FNRBC計數較正常增加。Aali等［5］研究顯示子癇前期孕婦外周血FNRBC和胎兒臍血有核紅細胞數量比對照組顯著增加，而且孕婦外周血FNRBC和臍血有核紅細胞數量有相關性。Bayram等［15］測定子癇前期胎兒臍血FNRBC計數比對照組明顯增加。楊曉菊等［4］報道33例重度子癇前期孕婦外周血FNRBC計數（17.42±4.11個）/6mL，子癇前期可能存在著某種胎-母細胞傳輸紊亂機制，從而導致胎兒細胞漏入母體。

3.4 孕婦外周血FNRBC計數與妊娠期糖尿病：Daskalakis等［16］報道妊娠期糖尿病孕婦外周血FNRBC計數及胎兒缺氧情況比正常孕婦明顯增加。臨床資料顯示妊娠期糖尿病未治療組的孕婦妊娠期高血壓疾病、胎兒宮內窘迫發生率明顯高于規范治療組［17］。妊娠期糖尿病合并胎兒生長受限患者的胎盤超微結構改變表現為微絨毛稀疏細小、細胞核不規則、細胞質內有較多的空泡、細胞器數量減少、毛細血管減少。其結構改變直接影響胎盤的供血和供氧功能，導致了不良妊娠結局［18］。Namavar Jahromi等［19］研究顯示，需用胰島素治療的妊娠期糖尿病孕婦分娩后胎兒臍血有核紅細胞數較正常孕婦明顯增加，而且存在胎兒宮內酸中毒。

3.5 孕婦外周血FNRBC計數與妊娠合并血小板減少：妊娠合并血小板減少最常見的原因是妊娠合并特發性血小板減少性紫癜（idiopathicthrombocytopenic purpura，ITP）和妊娠期血小板減少癥（gestational thrombocytopenia，GT），妊娠后發病的ITP與GT因臨床癥狀不明顯而不易鑒別，常表現單純血小板減少，患者孕期一般無臨床癥狀，如無其他并發癥，胎兒一般無缺氧表現。晁爽等［20］報道ITP與GT患者新生兒早產率差異無統計學意義，而其他嚴重疾病繼發血小板減少患者新生兒早產率明顯增加。孕婦外周血FNRBC計數與妊娠合并血小板減少的關系目前尚不明確。

4 問題與展望

利用分子技術檢測孕婦外周血胎兒有核紅細胞的基因及染色體，有望成為無創產前診斷胎兒基因及染色體異常的新的方法之一，但由于孕婦外周血胎兒細胞含量很少，其分離和純化技術復雜，價格昂貴，這些檢測技術目前只處于實驗室研究階段，尚不能在臨床推廣普及。因此，尋找一種經濟、簡便、準確的外周血胎兒有核紅細胞分離及純化方法是學者們仍在積極探索的問題。

孕婦外周血中FNRBC數量增加與臍動脈血流阻力增加有關，當孕婦并發其他可能影響胎兒胎盤血液供應的疾病時，其外周血中FNRBC數量增加。動態監測一些病理妊娠母血中FNRBC計數可以評估預測疾病發展程度，指導臨床治療。同時其數量的明顯增加又可以更容易地獲取，為孕婦外周血FNRBC在產前診斷中作用的研究提供更方便的實驗條件。

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（本文編輯：趙麗潔）

R714.5

A

1007-3205（2013）02-0244-03

2012-06-04；

2012-06-25

王志宏（1967-），女，河北景縣人，承德醫學院附屬醫院副主任醫師，醫學碩士，從事婦產科優生優育研究。

*通訊作者

10.3969/j.issn.1007-3205.2013.02.045