液質聯用法同時測定兒寶顆粒中8種化學成分的含量

王 昕，靳怡然，王川平，杜英峰

（1.河北醫科大學第二醫院藥劑科，河北石家莊 050000；2.河北醫科大學藥學院藥物分析學教研室，河北石家莊 050017）

·論 著·

液質聯用法同時測定兒寶顆粒中8種化學成分的含量

王 昕1，靳怡然1，王川平1，杜英峰2*

（1.河北醫科大學第二醫院藥劑科，河北石家莊 050000；2.河北醫科大學藥學院藥物分析學教研室，河北石家莊 050017）

目的建立一種液質聯用法同時測定兒寶顆粒中8種化學成分的含量。方法色譜柱為Dikma Diamonsil C18（150mm×4.6mm，5μm）；流動相為甲醇-水（0.1‰甲酸），梯度洗脫；正負離子同時監測，源噴射電壓分別為5 500V和-4 500 V，離子源溫度為650℃。8種被測成分的監測離子對分別為525.3/449.1（芍藥苷）、479.1/121.1（芍藥內酯苷）、193.1/133.1（東莨菪內酯）、217.1/202.0（花椒毒素）、247.1/217.2（異茴芹內酯）、217.1/174.0（佛手柑內酯）、187.2/131.1（補骨脂素）和271.2/203.1（歐前胡素）。采用多反應離子監測模式進行定量。結果兒寶顆粒中待測8個化學成分在9min內完全分離，方法的線性關系、線性范圍、精密度及穩定性較好，回收率分別為101.3％、98.5％、99.4％、100.3％、100.4％、100.1％、98.1％和99.4％。結論該方法簡便、快速、準確、專屬性高，可用于兒寶顆粒的質量控制。

色譜法，液相；串聯質譜法；兒寶顆粒

兒寶顆粒是由北沙參、炒白芍、太子參、陳皮、茯苓及山藥等十一味中藥加工而成的一種中藥復方制劑，收載于2010年版《中國藥典》一部［1］，本品具有健脾益氣、生津開胃的功效，主要用于治療小兒脾氣虛弱、胃陰不足所致的納呆厭食、口干燥渴、大便久瀉、面黃體弱、精神不振、盜汗等癥，為臨床常用藥物［2］。北沙參和白芍均為方中主要藥味，白芍中的芍藥苷和芍藥內酯苷為其主要活性成分［3-5］，北沙參的主要活性成分為多種香豆素化合物［6］，因此有必要對上述活性成分進行同時測定。目前有關兒寶顆粒的質量控制方法僅限于采用高效液相色譜法來測定白芍中的芍藥苷［1］、陳皮中的橙皮苷［7］。液質聯用技術相比以往的檢測器（例如紫外檢測器等）具有更加靈敏和專屬的特點，已成為中藥質量控制和分析的常用技術手段［8-9］。為了更好地控制兒寶顆粒的質量，并參考已有文獻［10-11］，本研究利用高效液相-質譜聯用法技術，同一周期正負離子同時監測，并使用多反應離子監測（multiple-reaction monitoring，MRM）為定量方法，同時測定該制劑中白芍的2種苷類有效成分即芍藥苷（paeoniforin，1）和芍藥內酯苷（albiflorin，2）；北沙參中6個香豆素類成分即東莨菪內酯（scopoletin，3）、花椒毒素（xanthotoxin，4）、異茴芹內酯（isoimpinellin，5）、佛手柑內酯（bergapten，6）、補骨脂素（psoralen，7）和歐前胡素（imperatorin，8）。結果表明該法快速、準確、可靠，可為兒寶顆粒的質量控制提供依據。

1 材料與方法

1.1 儀器：Agilent-1200高效液相色譜儀（美國安捷倫公司），3200QTRAPTM質譜儀（美國Applied Biosystems SCIEX公司），配有電噴霧離子源（eletrospray ionization，ESI）以及儀器操作軟件versions1.4.2。超聲波清洗器（上海聲譜超聲波設備廠）。BP211D型電子分析天平（北京賽多利斯儀器系統有限公司）。

1.2 試藥：對照品1（批號110736-200629），3（批號110768-200504），7（批號110739-200613）和8（批號110826-200511）均購自中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用；4、5和6均購自上海同田生物技術有限公司；2購自南京澤郎醫藥科技有限公司。上述對照品經HPLC采用峰面積歸一化法檢測含量均＞98％。兒寶顆粒（批號2 0110201，20110406，20110805），規格為10g/包，均購于江西藥都樟樹制藥有限公司。甲醇（色譜純，美國Tedia公司）；水為重蒸水。

2 結 果

2.1 色譜和質譜條件：色譜條件，色譜柱為DikmaDiamonsil C18（150mm×4.6mm，5μm）；流動相為甲醇（A）-0.1‰甲酸水（B），采用0～4 min，40％～95％A；4～7min，保持95％A不變；7～10min，95％～40％A程序進行梯度洗脫；流速1.0mL/min；進樣量10μL。質譜條件，離子源，正負離子同時檢測；噴霧電壓，-4 500 V/5 500 V；離子源溫度650℃。霧化氣，60psi，輔助氣，65psi，氣簾氣，25psi。多反應離子監測模式定量；化合物1和2采用負離子監測模式，化合物3～8采用正離子監測模式；監測離子對，解簇電壓及碰撞能量見表1，二級質譜圖見圖1。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備：分別取化合物1～8對照品適量，精密稱定，置10mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，即得對照品儲備液。取各對照品儲備液適量，置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，混勻，即制成適當濃度的混合對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備：取兒寶顆粒10包，混勻，研細，稱取粉末2.0g，精密稱定，置具塞三角瓶中，精密加入80％甲醇10mL，稱定質量，超聲（功率500W，頻率50kHz）處理30min，放冷，再稱定質量，用80％甲醇補足所減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液，用0.45μm微孔濾膜濾過，即得。

表1 8個化合物的質譜數據

圖1 8種化合物的二級離子掃描質譜圖

2.3 方法學考察

2.3.1 線性范圍、檢測限和定量限：取“2.2.1”項下的混合對照品溶液，分別精密量取1.0、2.0、4.0、6.0、8.0mL置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，按已確定的色譜和質譜條件進行測定并記錄峰面積，8個有效成分回歸方程，線性范圍及相關系數見表2。以峰面積（Y）對濃度（X，mg/L）進行線性回歸，將混合對照品溶液逐步稀釋，分別以信噪比S/N=10和S/N=3時對照品的濃度作為定量限和檢測限，結果見表2。供試品溶液和對照品溶液的色譜圖見圖2。

圖2 液體的提取離子色譜圖A.對照品；B.兒寶顆粒

表2 8種有效成分的回歸方程、相關系數和線性范圍

2.3.2 精密度試驗：精密吸取批號為20110406的同一供試品溶液，按上述色譜和質譜條件重復進樣6次，記錄色譜峰的峰面積。結果化合物1～8的相對標準差值分別為0.8％、1.2％、2.9％、1.9％、1.9％、2.1％、1.8％和2.6％，表明精密度良好。

2.3.3 穩定性試驗：取批號為20110406的同一供試品溶液，按上述色譜與質譜條件分別于0、4、8、12、18和24h進樣分析，記錄峰面積。結果表明供試品溶液在室溫條件下放置24h穩定。

2.3.4 重復性試驗：精密稱取批號為20110406兒寶顆粒粉末6份，按“2.3.2”項方法分別制備供試品溶液，進樣測定，計算含量。結果化合物1～8含量的相對標準差值分別為1.1％、1.3％、1.9％、1.6％、2.7％、1.6％、2.8％和1.9％，表明本方法重復性良好。

2.3.5 回收率試驗：精密稱取批號為20110406兒寶顆粒1.0g，共6份，分別精密加入1～8對照品儲備液適量，按“2.3.2”項下方法制備供試品溶液，按上述色譜和質譜條件進樣分析。計算得待測化合物1～8的平均回收率分別為101.3％、98.5％、99.4％、100.3％、100.4％、100.1％、98.1％和99.4％，相對標準差分別為2.5％、1.8％、2.8％、3.1％、2.7％、1.3％、3.7％和1.9％。

2.3.6 樣品測定：取各批號的兒寶顆粒供試品，按已經建立的方法分別測定化合物1～8的含量。結果見表3。

3 討 論

3.1 流動相系統的選擇：本實驗過程中曾比較了甲醇-水和乙腈-水流動相系統，2種系統對待測化合物分離的影響不大，但考慮到乙腈毒性較大，且經濟成本較高，故最后選擇甲醇-水流動相系統。另外，還考察了添加甲酸和乙酸銨濃度對待測化合物響應值的影響，結果發現加入甲酸后響應值和峰形優于乙酸銨，并進一步考察了甲酸的比例，發現0.1‰甲酸能夠改善8種待測化合物的分離效果，峰型得到明顯改善，故確定以甲醇和0.1‰甲酸水為流動相。

3.2 提取溶劑的選擇與確定：本實驗為了提高待測物的提取效率，減少干擾，在制備供試品溶液時，分別考察了30％、50％、80％甲醇作為提取溶劑，結果表明采用80％甲醇為提取溶劑時，測定的干擾最少，待測物的提取效率最高，故最終選用80％甲醇作為最終提取溶劑。

3.3 檢測條件的選擇：本實驗為獲得較高的靈敏度和準確度，對檢測條件進行了優化。首先對所檢待測化合物對照品利用針泵進樣方式進行全質譜掃描，結果顯示化合物1和2易在負離子模式下產生［M-H］-，而化合物3～8易在正離子模式下產生準分子離子峰［M+H］+。另外，采用同一周期正負離子同時監測模式，可以同時保證方法具有較高的靈敏度，又能節省分析時間［12］。

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（本文編輯：劉斯靜）

R917

B

1007-3205（2013）02-0227-04

2012-05-15；

2012-06-27

河北省中醫藥管理局科研計劃項目（2009130）

王昕（1973-），女，河北石家莊人，河北醫科大學第二醫院主管藥師，理學學士，從事中藥質量控制研究。

*通訊作者。E-mail：yingfengdu@163.com

10.3969/j.issn.1007-3205.2013.02.039