激素治療對原發性腎病綜合征患兒淋巴細胞影響的研究

曾令麗

（四川省德陽市人民醫院兒科 618000）

原發性腎病綜合征（primary nephrotic syndrome，PNS）是由于腎小球基底膜通透性增加，導致大量蛋白尿、低清蛋白血癥以及一系列病理、生理改變的臨床綜合征，學齡前兒童為該病的高發人群。研究報道，兒童PNS發病率和患病率分別為（2～4）／10萬和16／10萬，兒科住院泌尿系統疾病患兒中PNS約占20%～30%，且具有增多趨勢［1-2］。目前，兒童PNS的病因和發病機制尚不清楚，多數研究認為與其免疫功能紊亂有關［3-4］。因此，本研究通過檢測激素治療前、后兒童PNS患者外周血淋巴細胞亞群的變化，探討其在兒童PNS發病機制中的作用，現將研究結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2009年11月至2012年8月在本院兒科診斷和治療的PNS患兒47例，根據中華醫學會兒科學分會2009年腎臟病學組修訂的PNS診斷標準［5］分為單純型腎病（SNS）和腎炎型腎病（NNS），同時選擇在本院兒童保健科體檢的22例健康兒童作為正常對照組。研究對象一般情況比較見表1。

1.2 試劑與儀器 FITC／PE標記的單克隆抗體：CD3-FITC／CD16＋56-PE、CD4-FITC／CD8-PE、CD3-FITC／HLADR-PE、CD4-FITC／CD25-PE和CD19-PE（Immunotech公司，法國）；美國Beckman coulter XL型流式細胞分析儀。

1.3 方法

1.3.1 治療方法 兩組患者給予相同的治療即誘導緩解階段給予潑尼松每天2mg／kg，分2次口服；待尿蛋白轉陰后，每晨頓服，持續6周。鞏固維持階段隔日晨頓服每天1.5mg／kg，持續6周；當尿蛋白持續陰性時，逐漸減量。潑尼松足量每天2mg／kg，治療小于4周，尿蛋白轉陰者判定為緩解即激素敏感型PNS；以潑尼松足量治療大于4周，尿蛋白仍陽性者判定為未緩解即激素耐受型PNS。

1.3.2 標本采集 所有研究對象在入院時首次采空腹靜脈血2mL，檢測淋巴細胞各亞群比例；待激素治療后尿蛋白連續3次檢查陰性，血清蛋白恢復正常水平后再次采血復查。

1.3.3 檢測指標 各取100μL待測血樣分別加入CD3-FITC／CD16＋56-PE、CD4-FITC／CD8-PE、CD4-FITC／CD25-PE、CD19-PE標記的單克隆抗體，然后嚴格按照試劑盒說明書處理樣本后，采用流式細胞儀檢測CD3＋（總T細胞）、CD3＋CD4＋（輔助性T細胞）、CD3＋CD8＋（細胞毒性T細胞）、CD4＋CD25＋（調節性T細胞）、CD19＋（B細胞）和CD3＋CD56＋（NK細胞）百分率。

1.4 統計學處理 采用SPSS13.0軟件對數據進行分析處理，計量資料多組間比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用SNK法，組內前后比較采用配對t檢驗；計數資料比較采用χ2檢驗，檢驗水準α＝0.05。

2 結 果

2.1 研究對象治療前活動期各淋巴細胞亞群比較 與正常對照組比較，SNS組和NNS組患兒外周血CD3＋CD4＋、CD4＋CD25＋和NK細胞比例均降低，差異有統計學意義（P＜0.05或P＜0.01）；CD3＋CD8＋和B細胞比例升高，差異有統計學意義（P＜0.01）。SNS組和NNS組患兒外周血各淋巴細胞亞群間比較差異無統計學意義（P＞0.05），見表2。

2.2 激素治療前、后各淋巴細胞比例變化情況 經激素治療后，PNS患兒有39例得到緩解，未緩解8例，激素敏感率為82.98%；SNS組有28例（90.32%）患兒得到緩解；NNS組有11例（68.75%）患兒得到緩解。與治療前比較，治療后SNS組和NNS組緩解患兒外周血CD3＋CD8＋和B細胞比例均明顯下降（P＜0.05），CD3＋CD4＋、CD4＋CD25＋和 NK細胞比例顯著升高，而未緩解患兒各淋巴細胞亞群變化比較差異無統計學意義。治療后SNS組和NNS組緩解患兒外周血CD3＋、CD3＋CD4＋、CD4＋CD25＋和 NK細胞比例低于正常對照組（P＞0.05），CD3＋CD8＋和B細胞比例高于正常對照組（P＞0.05），而未緩解患兒各淋巴細胞亞群變化與正常對照組比較差異有統計意義（P＜0.05或P＜0.01），見表3。

表1 研究對象一般情況比較（±s）

表1 研究對象一般情況比較（±s）

＊：P＜0.01，與正常對照組比較；-：此項無數據。

組別 n性別男 女年齡（歲）尿蛋白（n）＋＋＋ ＋＋＋＋清蛋白（g／L） 膽固醇（mmol／L）正常對照組22 17 5 5.81±2.86 - - 32.36±8.71 3.89±0.92 SNS組 31 23 8 5.63±3.02 21 10 17.58±3.42＊ 6.92±2.07＊NNS組 16 12 4 5.57±2.95 11 5 18.05±4.30＊ 7.03±2.11＊F 或 χ2 0.067 2.415 0.005 5.470 5.030 P 0.967 0.103 0.944 0.004 0.008

表2 研究對象治療前活動期各淋巴細胞亞群比較（%，±s）

表2 研究對象治療前活動期各淋巴細胞亞群比較（%，±s）

＊：P＜0.05，＊＊：P＜0.01，與正常對照組比較。

組別 n淋巴細胞亞群CD3＋ CD3＋CD4＋ CD3＋CD8＋ CD4＋CD25＋ B細胞 NK 細胞正常對照組 22 58.69±7.33 30.84±7.38 25.90±5.21 3.94±0.41 20.41±5.68 14.03±10.83 SNS組 31 56.25±6.58 26.19±6.62＊ 28.89±6.07＊ 2.75±1.07＊＊ 26.23±7.71＊＊ 5.63±4.11＊＊NNS組 16 57.48±11.24 27.32±10.45＊ 29.03±8.69＊ 2.57±1.03＊＊ 28.09±7.32＊＊ 7.52±6.08＊＊F 2.037 2.879 4.251 5.227 5.362 7.639 P 0.115 0.036 0.026 0.007 0.006 0.000

表3 激素治療前、后各淋巴細胞亞群變化情況（%，±s）

表3 激素治療前、后各淋巴細胞亞群變化情況（%，±s）

＊：P＜0.05，＊＊P＜0.01，與治療前比較；△：P＜0.05，△△：P＜0.01，與正常對照組比較。

組別 n淋巴細胞亞群CD3＋ CD3＋CD4＋ CD3＋CD8＋ CD4＋CD25＋ B細胞 NK 細胞正常對照組 22 58.69±7.33 30.84±7.38 25.90±5.21 3.94±0.41 20.41±5.68 11.03±7.83 SNS組緩解 治療前 28 56.31±6.42 26.08±6.66 29.16±6.91 2.73±1.12 26.41±7.64 5.59±3.89治療后 28 57.16±7.02 28.53±5.97＊ 26.43±6.05＊ 3.25±1.01＊ 22.49±11.46＊ 10.46±3.93＊＊SNS組未緩解 治療前 3 56.10±6.14 26.33±6.59 28.54±5.72 2.81±1.02 26.16±6.93 5.71±4.17治療后 3 57.95±6.89 26.76±6.25△ 27.92±5.98△ 2.93±0.97△ 24.57±6.28△ 6.24±3.37△△NNS組緩解 治療前 11 57.06±10.95 27.35±10.37 29.21±7.64 2.60±0.99 27.83±7.51 7.47±6.13治療后 11 57.42±10.19 29.43±8.62＊ 26.61±8.52＊ 3.29±1.38＊＊ 22.12±6.39＊ 10.39±6.56＊＊NNS組未緩解 治療前 5 56.77±11.17 27.11±10.20 28.69±7.90 2.62±1.05 28.21±7.24 7.58±5.89治療后 5 57.01±10.75 27.69±10.04△ 27.97±8.82△ 2.76±1.12△△ 26.91±6.82△△ 8.44±5.73△△

3 討 論

3.1 各淋巴細胞亞群在PNS發病機制中的作用 PNS是兒童常見的腎臟疾病之一，約占小兒時期腎病綜合征總數的90%［6］。其發病可能與遺傳、過敏性體質、免疫機制、炎性介質等因素有關，多數研究表明免疫功能紊亂在PNS發病中占主導地位［7］。機體通過各淋巴細胞亞群間相互作用來維持免疫功能的穩定，根據淋巴細胞表型和功能的不同分為T淋巴細胞、B淋巴細胞、NK細胞等亞群。

T細胞不產生抗體而直接發揮免疫作用，按其免疫效應功能分為輔助性T細胞（Th細胞）、細胞毒性T細胞（CTL細胞）和調節性T細胞（Treg細胞）3個亞群。Th細胞是由CD3＋CD4＋T細胞識別MHCⅡ類分子提呈的外源性抗原肽活化后分化而來，包括Th1、Th2和Th3共3類細胞；Th1分泌IL-2、IFN-γ、TNF等細胞因子，Th2 分泌細胞因子IL-4、IL-5、IL-13等，Th3分泌TGF-β細胞因子；Th1和Th2在細胞免疫和體液免疫中發揮作用，Th3在免疫應答中起負調節作用［8］。CTL細胞是由CD3＋CD8＋T細胞識別MHCⅠ類分子提呈的內源性抗原肽活化后分化而來，包括Tc1和Tc2兩類細胞，Tc1和Tc2分泌的細胞因子分別與Th1和Th2相似［8］。Treg細胞可表達膜蛋白分子CD4和CD25，CD4＋CD25＋Treg細胞具有免疫抑制性，可抑制CD4＋和CD8＋T細胞及B細胞的活化和細胞因子的分泌，在機體免疫反應中起負調節作用［9］。本研究表明，SNS和 NNS患兒外周血CD3＋、CD3＋CD4＋、CD4＋CD25＋T細胞比例低于健康兒童，而CD3＋CD8＋T細胞比例高于健康兒童。

B細胞是由淋巴樣前體細胞分化成熟而來，可表達MHCⅠ類、Ⅱ類抗原，其與CD19、CD21等膜蛋白分子非共價相聯形成B細胞共受體，增強對抗原刺激的敏感性；CD19可在B細胞整個成熟過程中持續表達，其表達水平代表B細胞水平，而CD21僅在成熟B細胞表達，因此，將CD19作為分選B細胞的標記。研究發現，PNS患兒外周血B細胞數明顯高于正常兒童，應用B細胞單克隆抗體（利妥昔單抗等）可有效治療［10-11］。NK細胞即自然殺傷細胞，可經CD2、CD3分子和細胞因子（IL-2、IFN-α、TNF-α、LR等）等多種途徑被活化而分泌細胞因子和發揮細胞毒作用，與機體抗感染、抗腫瘤以及免疫調節等密切相關。研究發現，IgAN患兒中外周血NK細胞明顯低于正常對照組［12］；慢性腎炎以及慢性腎功能衰竭患者體內的NK細胞活性明顯低于健康人，且腎損害越重，NK細胞活性下降越明顯［13］。本研究表明，SNS和NNS患兒外周血B細胞比例高于健康兒童，而NK細胞比例低于健康兒童。

3.2 PNS的治療方法和效果 目前，PNS治療以糖皮質激素（GC）和細胞毒性藥物為主，其中GC為治療PNS的首選藥物。GC具有抗炎和免疫調節作用，可直接影響細胞免疫反應的抗原識別、免疫活化、細胞增殖、免疫效應等。研究表明，PNS患兒對GC治療的敏感性不同，GC受體基因或蛋白質結構及其數量的異常是導致GC耐藥的最可能機制之一［15］。本研究發現，經GC治療后PNS患兒敏感率為82.98%，SNS組敏感率為90.32%，NNS組敏感率為68.75%。經GC治療后，SNS組和NNS組緩解患兒外周血CD3＋變化不明顯，CD3＋CD4＋、CD4＋CD25＋和NK細胞比例顯著升高，CD3＋CD8＋和B細胞比例均明顯下降，而未緩解患兒外周血各淋巴細胞亞群變化不明顯。綜上可知，CD3＋CD4＋、CD4＋CD25＋和NK細胞的下降以及CD3＋CD8＋和B細胞升高可能參與了PNS的發病過程，GC可通過改變各淋巴細胞亞群細胞比例而發揮治療作用。

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