甲磺隆對臨床分離病原菌的抑菌作用

李艷艷

解放軍第309醫院 檢驗科，北京 100091

作為活性最強的磺酰脲類化合物，甲磺隆(sulfometuron methyl，SM)對結核分支桿菌的最小抑菌濃度(minimum inhibitory concentration，MIC)范圍為3~8 mg/L，高于部分二線抗結核藥的體外活性，但其對其他臨床致病菌抑菌活性的研究，目前尚且少見。本文通過測試甲磺隆抗菌活性，評價其作為研發抗生素先導化合物的可能性。

1 材料和方法

1.1 菌株的留取 本實驗菌株為我科微生物室2011年6-12月鑒定并保存的臨床分離菌株，革蘭陰性菌和真菌菌株于甘油菌種保存管中，革蘭陽性菌株于稀釋血液菌種保存管中，放置于-20℃冰箱中保存。

1.2 菌液的制備 實驗前2 d將冰凍保存的實驗菌株取出，室溫下靜置，待其溶解后接種于血平板培養基上培養2 d，觀察各菌株生長良好，將各菌株用氯化鈉溶液配置成0.5麥氏比濁單位的標準菌懸液。

1.3 甲磺隆原液的制備 實驗前將甲磺隆干粉、DMSO溶劑從冰箱中取出，放置至室溫后，用分析天平準確稱取12.0 mg甲磺隆干粉于潔凈干燥的試管中，并用微量加樣槍準確吸取1.2 ml DMSO溶劑加入試管中，混勻、充分溶解，配置成10 mg/ml的SM化合物原液。

1.4 含藥培養基的制備 實驗前將水解酪蛋白胨(murller hinton，MH)培養基干粉及沙保羅瓊脂粉取出，平衡至室溫。準確稱取MH干粉380.0 mg，35份，沙保羅瓊脂粉650.0 mg，5份，于錐形瓶中，分別用10 ml蒸餾水溶解； 化合物按照80 mg/L，40 mg/L，20 mg/L，10 mg/L的濃度倍比稀釋，無化合物的DMSO作為陰性對照，溶于培養基中。

1.5 接種 分別將已配制好的菌懸液用無菌棉簽接種于各種濃度的一個對應培養基上： 鮑曼、銅綠、肺克、大腸、金葡、表葡、腸球菌接種于MH培養基，白假絲接種于沙保羅培養基。標記好菌種、濃度。

1.6 培養 將接種有鮑曼、銅綠、肺克、大腸、金葡、表葡、腸球菌的培養基于25℃溫箱中培養，接種有白假絲酵母菌的培養基于15℃溫箱中培養。2 d后觀察結果并記錄。重復上述步驟10次，每次選用相同菌種的不同菌株，記錄并統計結果。

2 結果 80 mg/L的甲磺隆不能抑制銅綠、肺克、大腸、金葡、表葡、腸球菌的生長，但能很好抑制鮑曼菌的生長，而20 mg/L的甲磺隆能很好抑制白假絲酵母菌的生長。

3 討論 本實驗致力于對甲磺隆抗菌活性的進一步研究，只選擇了幾種典型且耐藥嚴重的臨床常見菌株，結果顯示，甲磺隆能很好地抑制鮑曼、白念菌的生長(對鮑曼菌的MIC值為80 mg/L，對白念菌的MIC值為20 mg/L)，其實驗菌株均為院內感染重要菌種，耐藥情況非常嚴重。本實驗證明，SM對真菌、細菌均具抑菌活性，這對今后的研究具有很好的指導作用。本實驗中，對于未表現出抑菌活性的菌株，其原因有可能是其他支鏈氨基酸合成途徑對乙酰羧酸合成酶(aceto hydroxy acid synthase，AHAS)酶的替代作用，也有可能此結構的磺酰脲類化合物不能有效抑制其AHAS酶活性，亦或其他原因，有待進一步研究。下一步可以對SM進行化學修飾，期待能得到更具抑菌活性的衍生物。