雞桿菌感染研究進展

皇甫和平，王川慶，楊 霞，趙 軍，李喬晶，鄭鹿平

（1．鄭州牧業工程高等?？茖W校，河南 鄭州450046；2．河南農業大學 禽病研究所，河南 鄭州450002）

雞桿菌（Gallibacterium）是由Christensen等［1］于2003年在巴氏桿菌科中重新組合的一個屬，包括原來的鴨巴氏桿菌、輸卵管炎放線桿菌和溶血性巴氏桿菌。雞桿菌是健康雞體的1種常在菌，但大量研究表明，其與蛋雞輸卵管炎和輸卵管囊腫等關系密切，并具有條件致病性［2－4］，人工感染可引起雞的輸卵管炎、腹膜炎和敗血癥等［2，5］。

1 病原學

1．1 病原特征 雞桿菌為兩端鈍圓、無芽孢，不運動的革蘭陰性小球桿菌。鏡下單個存在或成對分布，瑞氏和美藍染色呈兩極濃染，新鮮分離株能看到明顯或微弱的莢膜［1］。

根據Bisgaard等［6］在2009年的報道，雞桿菌對營養要求嚴格，在普通瓊脂培養基上生長不良；伊紅美藍培養基、西蒙氏枸椽酸鹽培養基和含有KCN的培養基上均不生長，不同種的雞桿菌在麥康凱培養基生長情況不一，部分菌株生長，部分菌株不生長。在含5%～10%綿羊血瓊脂平板上，37℃需氧條件下培養18～24h后，形成圓形、灰白色、半透明、有光澤、邊緣整齊、直徑1～2mm的小菌落，呈β－溶血或不溶血。

1．2 分子分型 2009年，Bisgaard等［6］將雞桿菌屬的菌種進行細化，確定該屬包括4個已命名的種：鴨源雞桿菌（Gallibacteriumanatis）、輸卵管炎雞桿菌（Gallibacteriumsalpingitidis）、虎皮鸚鵡雞桿菌（Gallibacteriummelopsittaci）和海藻糖發酵雞桿菌（Gallibacteriumtrehalosifermentans）4個種，以及3個復合群（Gallibacteriumgenomosp1，2and 3）。雞桿菌屬的代表種是鴨源雞桿菌，該菌有溶血型和非溶血型2個表型。

1．3 血清學分類 目前雞桿菌有24個血清型，其中Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅳ型具有致病性［7］。不同血清型之間沒有交叉免疫保護作用［1］，隨著研究的深入，雞桿菌的血清型將還會增加。

1．4 致病因子

1．4．1 金屬蛋白酶 Garcia－Gomez E等［8］利用甲醇沉淀的方法得到了2株鴨源雞桿菌的金屬蛋白酶，發現此酶能夠降低雞體內IgG，破壞機體的免疫系統，在鴨源雞桿菌引起的感染中起作用。但金屬蛋白酶降低IgG在致病機理中的作用仍有待深入研究。

1．4．2 GtxA毒素 GtxA毒素屬于RTX毒素，2010年Kristensen首次發現了GtxA毒素基因，該基因編碼含2 026個氨基酸的RTX毒素。GtxA毒素具有毒害白細胞活性和溶血活性。GtxA毒素N＇結構域對該毒素充分發揮其溶血活性是必須的，對發揮該毒素的白細胞毒性起關鍵作用［9］。

1．4．3 耐藥基因 2008年，郭倫濤［10］的研究發現，雞桿菌質粒上攜帶有鏈霉素耐藥基因StrA、StrB、aadA和磺胺類藥物的耐藥基因SulⅠ和SulⅡ；同時發現該菌的促旋酶A基因和拓撲異構酶Ⅳ基因的喹諾酮耐藥區發生突變，導致了對氟喹喏酮類藥物的耐藥性。

2011年，Bojesen等［11］在雞桿菌鑒定了四環素抗性決定簇tet（B）、tet（H）和tet（L），其中tet（B）是最為普遍的一個決定簇。同年，Bojesen等［12］又報道四環素抗性決定簇tet（31）在鴨源雞桿菌中普遍存在，這是該基因在鮭產氣單胞菌中鑒定后的首次報道，推測可能具有相同的起源。

1．4．4 附著生物膜 2011年，Vaca等［13］對2株鴨源雞桿菌和1株雞桿菌復合群1菌株的黏附能力進行了研究，發現3株細菌在聚苯乙烯和玻璃表面形成了結實的生物膜，并黏附在上面，此種黏附方式可能對雞桿菌在組織表面的吸附，及在宿主體內的感染有重要作用，然而此種生物膜的具體成分及黏附作用的具體機制仍需深入研究。

2 流行病學

雞桿菌感染譜廣泛，包括雞、鴨、鵝、火雞、野雞、白鷺、鷓鴣、鸚鵡、鴿子、斑鳩和牛等。雞是最常見的宿主，且不同品種、日齡的雞均可感染，肉用雞和蛋用雞在對雞桿菌的易感性上沒有差別，發病最明顯的是當年孵育的高產母雞［14］。

傳播途徑：雞桿菌主要經水平方式傳播，已確定可經呼吸道傳播［15］。同居感染試驗表明，雞桿菌傳播很快，2d即可在雞的上腭裂和泄殖腔中分離出雞桿菌。盡管報道顯示雞桿菌能以一定的低水平經卵傳播至蛋中，但目前的研究均未發現該菌可垂直傳播［3，5］。

感染特點：沒有明顯的季節性，常和大腸桿菌、傳染性支氣管炎病毒、支原體等混合感染，并且雞桿菌可能會誘發或加劇其他病原的感染。雞桿菌在中、低水平生物安全狀態雞群中的感染率遠高于高水平生物安全雞群，寒冷、悶熱、氣候劇變等誘因可促進雞桿菌的感染，在免疫抑制的狀況下，可造成與臨床自然感染類似的腹腔炎癥［2－3］。

少數學者對中國部分地區分離的雞桿菌進行了種類及血清型調查研究。張金來等［16］利用rpoB、infB和atpD基因序列分析的方法證實11株河南分離株均屬于鴨源雞桿菌。

王川慶等［4］的研究表明，河南12個雞場全部感染雞桿菌血清Ⅱ型和Ⅳ型，其中7個場又同時感染血清Ⅰ型。王珊等［17］對河南、山東和山西3個省86家臨床健康蛋雞場的1 314份血清樣品進行了檢測，結果顯示，血清Ⅰ型感染率為11．95%，Ⅱ型感染率為23．29%，Ⅳ型感染率為9．82%。

3 癥狀和病理變化

3．1 癥狀 雞性成熟前感染，沒有明顯的臨床癥狀，性成熟后感染，病雞表現精神委頓，雞冠蒼白，產蛋量逐漸下降，部分雞產蛋停止，腹部膨大，行走似企鵝狀，病程在1個月以上，最后逐漸衰竭死亡。人工感染雞桿菌能使蛋雞開產日齡推遲，產蛋量下降，劣質蛋增加。大腸桿菌和雞桿菌混合人工感染SPF雞，引起更大幅度的產蛋量下降和更多的劣質蛋［4－5］。

3．2 病理變化 病雞可見輸卵管不同程度的炎癥、腹膜炎、卵巢炎以及敗血癥等。雞桿菌人工感染SPF雞可觀察到輸卵管炎，輸卵管充血，組織學檢查可見輸卵管膨大部和子宮黏膜上皮細胞增生，纖毛脫落及炎性滲出，腺體上皮細胞變性、胞核呈多形態等；大腸桿菌和雞桿菌混合感染開產前SPF雞，組織學檢查發現，呼吸系統和生殖系統出血、淤血，大量嗜異性白細胞浸潤等，開產后SPF雞感染兩種病原后出現急性死亡，剖檢可見心包炎、肝周炎及腹膜炎癥狀［4－5］。

4 雞桿菌的分子診斷

4．1 聚合酶鏈式反應（PCR） Bojesen等［18］設計了一對分別定位于16SrRNA和23SrRNA基因上的雞桿菌屬特異性PCR引物，該方法能擴增出1個或2個片段（790bp和1 030或1 080bp）。該方法克服了傳統雞桿菌鑒定方法存在的主要缺點，極大方便了該菌的鑒定。

4．2 擴增片段長度多態性（AFLP） Bojesen等［7］報道，AFLP技術在114株雞桿菌基因分型中的應用。結果顯示，蛋雞親本群的分離株被分為2個亞群，每個亞群的相似性都在90%以上，其中1個亞群均分離于呼吸道，另1亞群則主要分離于泄殖腔。從而證明不同器官分離的雞桿菌菌株譜系上的差異性。該技術已被廣泛應用于雞桿菌菌株譜系的鑒別。

4．3 隨機擴增多態性DNA（RAPD） 陳陸等［19］應用8條隨機引物對9株雞桿菌中國分離株和3個參考菌株（1株巴氏桿菌、1株大腸桿菌和1株鏈球菌）進行了RAPD分型研究。結果顯示，12株細菌共分為4個聚類群，其中9株雞桿菌中國分離株位于同一聚類群中，且又可分為4個聚類亞群；3個參考菌株各自形成1個獨立的聚類群。不同血清型的雞桿菌菌株具有相似的指紋圖，同1血清型的菌株指紋圖存在差異。

4．4 熒光原位雜交（FISH） 2003年，Bojesen等［20］設計了1條定位于雞桿菌16SrRNA基因的核酸探針，試驗結果表明，該探針能特異性的檢測雞桿菌，2004年，其又報道了該方法在雞桿菌人工感染試驗中的應用，結果表明，免疫抑制雞在腹腔接種后12h即可在肝臟漿膜表面和被膜下，靜脈接種12 h后在脾臟中檢測到雞桿菌聚集現象［2］。

5 雞桿菌感染的防制

雞桿菌主要經水平傳播，所以首先要加強飼養管理，減少各種應激因素；其次做好環境衛生，嚴格消毒，消滅環境中病原微生物，切斷水平傳播途徑。鑒于雞桿菌分離株廣泛的耐藥性，生產中應根據藥敏試驗結果，合理使用抗菌藥物進行預防和治療。雞桿菌有3種致病性血清型，且無交叉免疫保護作用，所以應根據本地區流行種類選用合適血清型疫苗進行預防或選用包含3種血清型的多價疫苗進行預防。

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