阿特拉津對雛雞的急性毒性作用和骨髓微核率的影響

靳 生，王冠穎，杜 強，郝雅環，李 術

（東北農業大學動物醫學學院，黑龍江 哈爾濱150030）

阿特拉津，又名莠去津，是選擇性內吸傳導型苗前、苗后除草劑，是國際上使用最為廣泛的除草劑之一。在土壤中可被微生物分解，殘效期跟用藥劑量、土壤質地等因素有關，可長達半年。適用于玉米、高粱、林地、草地、甘蔗等防除一年生和二年生闊葉雜草和單子葉雜草。20世紀80年代初我國開始使用阿特拉津，每年用量以平均20%的速度遞增［1］，雖然阿特拉津是一種中等偏低毒性的除草劑，但由于其使用量大、殘留期長（半衰期244d）、污染范圍廣（水環境、土壤大氣），對人和哺乳動物可能有致癌作用，所以被列為環境荷爾蒙（內分泌干擾劑）的可疑物質，被聯合國認定為27種持久性有毒化學污染物（Persistent Toxic Substances，PTS）之一［2－3］。目前有關阿特拉津對生物毒理效應的研究主要集中在哺乳動物的鼠類和兩棲動物的蛙類。本試驗以雛雞為研究對象，通過灌服測定阿特拉津對雛雞的半數致死量，從而來研究阿特拉津對雛雞的急性毒性作用。在此基礎上，通過試驗阿特拉津對雛雞骨髓微核的影響，來研究它的致突變性，為阿特拉津安全評價提供依據。

1 材料與方法

1．1 材料 阿特拉津（吉林市世紀農藥責任有限公司，批號：HNP33068），50%（M／N）；環磷酰胺（批號：20100302，山西省普德藥業有限公司）；秋水仙素。1日齡雛雞，36～40g（東北農業大學孵化場）。

1．2 方法

1．2．1 半數致死量的測定

1．2．1．1 預試驗 配制濃度為125g／mL阿特拉津水溶液，將60只體重相近的4日齡雛雞隨機均分為6組，按藥品劑量（等差數列）分為6組并灌服給6組雛雞，連續觀察5d，反復試驗，確定0死亡率和100%死亡率。

1．2．1．2 LD50測定試驗 按照 Well′s法［4］設計試驗，組間劑量對數差值為0．05325，將體重相近、日齡相同的雛雞隨機分為4組，每組4只，藥品劑量分別為383．3mg／kg體重，433．4mg／kg體重，489．9 mg／kg體重，553．9mg／kg體重，并分別編為1，2，3，4。待4日齡時進行灌藥，連續觀察7d，并記錄每組雛雞死亡數。

1．2．2 骨髓細胞微核試驗 選4日齡健康、體重相近的雞隨機分為5組，每組5只，即陰性對照組（生理鹽水20mL／kg體重），阿特拉津低劑量組（1／20 LD50）、中劑量組（1／15LD50）、高劑量組（1／10 LD50）、陽性對照組（環磷酰胺20mg／kg體重）。連續染毒9d后取其胸骨，擠出骨髓液，滴在載玻片一端預先滴好的一滴胎牛血清中，混勻后推片，長度為2～3cm，固定（固定液固定）、染色（姬姆薩染色）、蒸餾水沖洗，干燥后進行觀察。

1．3 數據處理 采用SPSS 13．0統計軟件，進行t檢驗數據統計分析。

2 結果

2．1 急性中毒臨床癥狀 灌藥后連續觀察7d，雛雞表現為食欲減退，精神委靡，雙翅下垂。死亡前雛雞全身痙攣，喙邊充滿黏液，呈昏迷狀態。第3組和第4組給藥劑量大，較早出現癥狀，12h后雛雞開始死亡。第1組和第2組灌藥后第2天雛雞開始死亡，直到第5天停止死亡。

2．2 半數致死量的計算 LD50為451．43978mg／kg體重；LD5095%可信限為390．82670～521．45332 mg／kg體重。

2．3 雛雞骨髓微核試驗結果 阿特拉津對雛雞的骨髓嗜多染紅細胞的微核率有顯著影響（如表1），可以觀察到明顯的微核，見圖1，隨著阿特拉津濃度的增大骨髓微核率升高，呈劑量－效應關系。

圖1 骨髓微核試驗

表1 阿特拉津致雞骨髓細胞微核率的檢測

3 討論與分析

3．1 半數致死量測定 有關阿特拉津對生物毒理效應的研究，主要集中在哺乳動物的鼠類和兩棲動物的蛙類，尚未報道有關雞的毒性試驗。本試驗測定半數致死量為451（mg／kg體重）。不同種類動物還有不同的染毒方式對阿特拉津的敏感性不同，試驗表明，阿特拉津對動物的急性毒性，LD50672mg／kg體重（大鼠經口）；850mg／kg體重（小鼠經口）；750mg／kg體重（兔經口）；7 500mg／kg體重（兔經皮）。

3．2 阿特拉津對雛雞骨髓微核率的影響 骨髓微核試驗是檢測化學物質致突變性的常用方法，是一種廣泛應用于遺傳毒性檢測的快速、簡便方法。它主要是通過微核率的變化來反映化學物質的遺傳毒性，因此微核率是檢測細胞遺傳毒性損傷的一種重要指標，許多學者都進行過研究。肖凱、李宏霞研究環磷酰胺劑量、取樣時間對小鼠骨髓微核率的影響，結果表明40mg／kg體重和80mg／kg體重環磷酰胺均可致小鼠骨髓嗜多染紅細胞的微核率顯著增加（P＜0．01），具有劑量反應關系［5］。黃海雄等人研究了三氯乙烯染毒對小鼠微核的影響，結果顯示三氯乙烯小鼠骨髓微核試驗結果為陰性［6］。

關于阿特拉津毒性的研究也有很多試驗，有研究表明，3ng／mL的阿特拉津可使倉鼠染色體斷裂［7］；張越等人試驗報道稱阿特拉津對小鼠微核形成無顯著影響［8］。本次試驗研究的結果表明，隨著阿特拉津染毒濃度的增大，雛雞骨髓細胞微核率也逐漸增大，試驗組與陰性對照組相比有極顯著性差異 （P＜0．01）。

［1］ 萬年升，顧繼東，段舜山．阿特拉津生態毒性與生物降解的研究［J］．北京環境科學學報，2006，26（4）：552－560．

［2］ Hayes T，Kelly H，Tsui M，etal．Herbicides：feminization of male frogs in the wild．Nature［J］．2002，419：895－896．

［3］ 秦傳玉，趙勇勝，劉娜，等．阿特拉津在土壤中的吸附行為［J］．環境污染與防治，2007，29（3）：165－167．

［4］ 張銑，劉毓谷．毒理學［M］．北京：北京醫科大學中國協和醫科大學聯合出版社，1997．

［5］ 肖凱，李宏霞．環磷酰胺劑量、取樣時間對小鼠骨髓微核率的影響［J］．癌變畸變突變，2005，17（6）：367－369．

［6］ 黃海雄，黃錦周，黃鈺，等．三氯乙烯染毒小鼠骨髓微核試驗觀察［J］．職業與健康，2002，18（4）：35－36．

［7］ 弓愛君，葉常明．除草劑阿特拉津（Atrazine）的環境行為綜述［J］．環境科學進展，1997，5（2）：37．

［8］ 金煥榮，張越，段志文，等．阿特拉津對小鼠微核及精子畸形率的影響［J］．沈陽醫學院學報，2000，2（2）：72－73．