病理學教學切片染色方法的改進

李汝佳

病理學教學切片的染色方法是關系到整個教學切片的質量的重要環節，現在主要采用HE染色。我們發現在外面購買的切片有的質量很差，使用沒多久就出現了褪色現象，為了保證教學質量，我們都是自己制作教學切片。經過我們多次試驗，對其染色方法進行了改良，提高了切片質量，延長了使用周期?，F將改進的染色方法總結如下。

1 資料與方法

1.1 材料 蘇木素，無水乙醇，冰醋酸，硫酸鋁鉀，甘油，伊紅，冰乙酸，95%乙醇，蒸餾水等。

1.2 染液配制方法

1.2.1 我們采用的是歐立式蘇木素，它的配制方法基本不變，但是改變了試劑的用量:蘇木素10 g溶解于無水乙醇500 ml中，然后加冰醋酸50 ml為A液。蒸餾水500 ml和硫酸鋁鉀30 g加熱攪拌溶解為B液。A液和B液混勻后倒入一個長頸三角瓶中，再加甘油500 ml，然后用棉花紗布做瓶塞塞好，置陽光下曬三個月后即可使用［1］。

1.2.2 伊紅的配制方法:伊紅3～5 g，蒸餾水1000 ml，冰乙酸50 ml，混勻后用濾紙過濾，把濾紙上的沉淀物烤干后再用95%乙醇1000 ml稀釋即可。

1.3 染色步驟:

1.3.1 脫蠟:二甲苯I 10 min→二甲苯II 5 min→95%乙醇I、95%乙醇II、95%乙醇III各片刻→流水洗2 min;

1.3.2 染色:蘇木素5 min→流水洗1 min→1%鹽酸乙醇分化數秒→流水洗10～15 min→0.5%伊紅乙醇10～15 s→75%乙醇、85%乙醇0.5 min、95%乙醇、100%乙醇各0.5 min。

1.3.3 吹干，封片。

2 結果

HE染色方法改良后切片色彩鮮艷，細胞核呈深藍色，細胞質呈粉紅色，核膜、核仁、染色質清晰，細胞界限明顯，整個染色對比度清晰。

3 結論

HE染色中配方甚多，染色效果也存差異，其中蘇木素是組織切片中最常用的細胞核染料。本文研究采用的改良歐力式蘇木素染液中含有乙醇和冰醋酸，乙醇主要是對細胞質固定作用，對細胞質染色效果好。而冰醋酸是良好的核蛋白固定劑，適宜對細胞核的染色，特別是對染色質的染色效果甚佳，由于它能使細胞膨脹，防止收縮又不凝固細胞漿中的蛋白，和乙醇起到互補作用［2］。

需要注意的是，染色中所給的時間只能做為參考，染色時間應根據不同的組織，溫度濕度具體而定。封片用的中性樹膠在其中加少量二甲苯，這樣既能達到透明的目的，又能避免吸入過多的二甲苯氣體［3］。

通過改良染色技術，避免教學切片短時間內因染色方法的問題而出現褪色的現象，提高了切片的整體效果，延長了使用周期，很多年后仍能用于教學，可以節省很多教學成本，為教學的順利進行提供保證?？偠灾?，只有把各個環節都把好關了，才能制作出合格的病理教學切片。

［1］銀平章.臨床病理學實驗技術.鄭州:中原農民出版社，1997:43.

［2］楊麗.淺談石蠟切片HE染色技術改進.黔南民族醫專學報，2005，18(1):15-16.

［3］楊永平，張勇等.教學切片透明、封固技術的改進.菏澤醫專學報，2000，12(3):136.