ELK-1與原發性高血壓大鼠左心室重構關系的研究

杰吉甫楊志剛

（1 新疆庫爾勒市巴音郭勒蒙古族自治州衛生學校解剖教研室，新疆 巴州 841000；2 北方民族大學管理學院，甘肅 銀川 750004）

ELK-1與原發性高血壓大鼠左心室重構關系的研究

杰吉甫1楊志剛2

（1 新疆庫爾勒市巴音郭勒蒙古族自治州衛生學校解剖教研室，新疆 巴州 841000；2 北方民族大學管理學院，甘肅 銀川 750004）

目的研究ELK-1在原發性高血壓大鼠（SHR）左心室的表達情況，探討ELK-1與高血壓左心室重構的關系。方法對比觀察各周齡SHR大鼠與WKY大鼠血壓，心臟/體質量比值變化；RT-PCR方法檢測左心室ELK-1的表達。結果在整個實驗過程中，WKY血壓保持在正常水平，24周齡SHR組尾動脈收縮壓明顯高于同周齡WKY組（P＜0.05）；與同周齡WKY相比24周齡SHR組的心臟/體質量比值增加明顯（P＜0.05）；大鼠左心室肌經RT-PCR檢測分析，隨周齡增加SHR左心室中ELK-1含量逐漸增高，24周齡的SHR組含量明顯高于同周齡WKY組大鼠（P＜0.05），且24周齡大鼠的含量明顯高于8周齡大鼠的（P＜0.05）。結論ELK-1可能對高血壓左心室心肌肥厚發展有促進作用。

高血壓；左心室肥厚；SHR；ELK-1

心臟是高血壓直接損傷的重要靶器官之一，高血壓所致的心室壁增厚和心室幾何構型改變稱為高血壓心臟重構。心肌重構在心臟功能補償中發揮重要作用，但是心肌細胞的持續的病理性肥大、增生，并協同纖維化的發展最終擾亂了心臟正常形態結構和心肌收縮功能。臨床試驗證實，高血壓患者盡管血壓得到長期有效控制，其左心室厚度仍逐漸增加，成為高血壓心血管并發癥的關鍵環節。高血壓心臟重構是一復雜的病變過程，血流動力學及神經體液等多種因素參與了高血壓心臟重構。作為ETS家族成員之一的轉錄激活因子ETS樣蛋白1（ELK-1）在細胞分化調節中起重要作用[1]，而轉錄激活因子ELK-1是否參與了高血壓大鼠左心室重構尚不清楚。本實驗采用RT-PCR技術觀察轉錄激活因子ELK-1在SHR大鼠左心室重構中的表達改變，探討高血壓左心室重構與ELK-1之間的關系。

1 材料與方法

1.1 材料

雄性WKY大鼠和雄性自發性高血壓（SHR）大鼠各10只，均購自北京維通利華實驗動物有限公司。trizol購自美國invitrogen生命技術公司，反轉錄試劑盒購自Fermentas生命技術有限公司，2×MIX購自美國OMEGA生命技術有限公司，引物購自北京三博遠志生物技術有限公司，6×loading buffer購自北京康為世紀生物技術限公司，DEPC水購自AMRESCO生物技術公司，DNA Marker購自北京康為世紀生物技術限公司。

1.2 動物分組

①WKY大鼠作為對照組：8周齡組（W1），24周齡組（W2）每組各5只。②SHR大鼠為高血壓組：8周齡組（S1），24周齡組（S2）每組各5只。

1.3 標本留取

各組大鼠分別在設定時間點，經腹腔注射3%的戊巴比妥鈉（50mg/kg）麻醉后，迅速取出心臟，裝入凍存管中、標記，投入液氮中保存備用。

1.4 RT-PCR及圖像處理

取100mg左心室心肌組織用1mltrizol研磨提取mRNA，利用反轉錄試劑盒按照說明書進行反轉錄，無菌無酶的蒸餾水代替mRNA作為陰性對照，反轉錄試劑盒提供陽性對照。引物由試劑公司設計ELK-1F 5'CATCATCTGCTCCTCGACACG3'，ELK-1R 5' GTCATTGCACCTCCCTTTGG 3'。PCR具體步驟按照2×MIX說明書進行，1%瓊脂糖凝膠電泳分離擴增產物，用標準分子量MARK比較判斷PCR片段大小。以β-actin為內參，利用Quatity One軟件對圖片進行分析。

1.5 結果觀察

預冷的PBS沖洗心臟，濾紙吸干水份后稱量心臟重量（HW）。計算心臟/體質量比值（mg/g）。在陽性對照出現相應擴增條帶，陰性對照無擴增條帶時判定結果。用β-actinR/β-actinF檢測，出現大小為321bp擴增片段時，判定為內參β-actin陽性，否則判定為陰性。用ELK-1R/ELK-1F檢測，出現大小為351bp擴增片段時，判定為內參β-actin陽性，否則判定為陰性。

1.6 統計學方法

采用SPSS13.0軟件包完成，結果以均數±標準差（χ—±s）表示，P＜0.05為有顯著性差異。

2 結 果

2.1 血壓變化

整個實驗過程中，WKY組大鼠收縮壓基本保持在正常水平（109.58±5.61mmHg）。SHR組大鼠從8周齡開始血壓升高，S2組動脈收縮壓均明顯高于同周齡的W2組（P＜0.05）。

2.2 SHR心臟/體質量比值變化

隨著周齡的增加SHR大鼠和WKY大鼠的心臟/體質量比值逐漸增加，S2組大鼠的心臟/體質量比值明顯高于S1組大鼠（P＜0.05）及同周齡W2組大鼠。

2.3 RT-PCR結果

瓊脂糖凝膠電泳檢測ELK-1的PCR 產物結果顯示，我們得到了特異性條帶，與預期擴增的片段大?。?51bp）一致，而且沒有非特異條帶的干擾，擴增特異性較強。大鼠左心室肌組織經RT-PCR檢測分析，隨周齡增加SHR左心室中ELK-1含量逐漸增高，S2組含量明顯高于同周齡W2組大鼠（P＜0.05），且24周齡大鼠的含量明顯高于8周齡大鼠的（P＜0.05）。

3 討 論

心臟作為高血壓病的直接受累的重要靶器官，在長期高血壓狀態下，左心室后負荷持續增加，導致其結構和功能發生了一些列改變，稱為心臟重構，以左心室肥厚為主[2]。本實驗采用逆轉錄PCR的方法，證實ELK-1可能對高血壓左心室心肌肥厚發展有促進作用。

Elk-1是TCF 轉錄因子家族的成員之一[5,6]，受到諸如細胞因子及紫外線燈等的刺激，轉錄因子ELK-1被磷酸化并激活，進而對細胞的生長、分化及凋亡產生影響，這一過程是絲列原活化蛋白激酶（MAPK）介導的，而且ELK-1是三種MAPK成員共同的的下游靶分子。MAPK超家族包括細胞外調節激酶（ERKs），應激活化蛋白激酶（SAPKs）或c-jun 氨基末端激酶（JNKs）通路和P38絲裂原激活蛋白激酶（p38MAPK）通路[7-12]。

Izumi等在5，8，14和24周齡的自發性高血壓腦卒中大鼠的心臟中測定ERK活性，發現左室ERK活性在輕度血壓增高期顯著高于同齡WKY大鼠，直至左室肥厚期仍保持在高水平，而無肥厚表現的右心室不顯示ERK的高活性[3]。Kagiyama等用反義寡核苷酸表皮生長因子受體阻斷SHR ERK途徑后，ERK活化程度降低，左室重/體質量比明顯下降[4]。安欣等利用WKY和SHR大鼠研究顯示 ：自發性高血壓大鼠隨周齡的增加，心臟改變主要表現為向心性重構和向心性肥厚。PD98059阻斷ERK1/2后，能夠明顯減少相對左心室壁厚度，一定程度上減緩高血壓心臟重構[13]。多數學者認為：MAPK的過度活化與心肌細胞肥大、平滑肌細胞增殖密切相關[16,17]。轉錄激活因子ELK-1的表達改變可能在慢性房顫心房肌的分子重構中起著重要的作用[18]。

綜上所述，我們的結果提示轉錄激活因子ELK-1可能在高血壓左心室重構中起著重要的促進作用。在本研究中，盡管我們觀察到隨著周齡的增加SHR大鼠ELK-1的表達量增加，且24周齡的SHR大鼠表達量高于同周齡的WKY大鼠，但是轉錄激活因子ELK-1與高血壓左心室重構間仍然缺乏直接的證據。在今后的研究中我們需要探討ELK-1表達上調促進高血壓左心室重構的直接證據。

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1671-8194（2013）13-0073-02