EB病毒、微衛(wèi)星DNA不穩(wěn)定性與淋巴瘤相關(guān)性研究進展

【關(guān)鍵詞】 EB病毒；MSI；淋巴瘤；相關(guān)性

文章編號：1003-1383（2013）04-0593-04 中圖分類號：R733；R373.9 文獻標識碼：A

doi：10.3969/j.issn.1003-1383.2013.04.054

淋巴瘤（Hodgkin’s Lymphoma，HL）是機體免疫系統(tǒng)的免疫細胞發(fā)生的惡性腫瘤，兒童、青年、中老年人均可發(fā)生。目前淋巴瘤是我國發(fā)病率增長速度最快的血液系統(tǒng)惡性腫瘤[1]，且淋巴瘤類型繁多，發(fā)病機制復(fù)雜。由于PCR技術(shù) 、原位雜交技術(shù)、免疫組織化學染色等科研技術(shù)的廣泛運用，研究發(fā)現(xiàn)EB病毒（Epsteinbarr virus，EBV）感染和微衛(wèi)星DNA不穩(wěn)定性（Microsatellite Instability，MSI）與某些類型淋巴瘤（伯基特淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、NK/T 細胞淋巴瘤等）的發(fā)病與發(fā)展有關(guān)。現(xiàn)就 EBV 感染相關(guān)抗原、EBV相關(guān)性淋巴瘤、EBV與MSI的相關(guān)性及其在淋巴瘤發(fā)病機制中的研究進展作一綜述。

EB病毒與微衛(wèi)星的生物學特性 1.EB病毒 EBV是一種嗜人B淋巴細胞雙鏈γ DNA 皰疹病毒，人類普遍易感。EB病毒包括11個基因，編碼6種核抗原（EBNA1、EBNA2、EBNA3A、EBNA3B、EBNA3C和EBNALP，3 種潛伏膜蛋白（LMP1、LMP2A和LMP2B），2種多聚核苷

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※基金項目：廣西衛(wèi)生廳科研項目（合同編號：Z2013769）；百色市科學研究與技術(shù)開發(fā)計劃項目[百科計字（2013）1號）]。

作者簡介：羅春英（1977-），女（苗族），貴州省銅仁市人，講師，醫(yī)學碩士，研究方向：腫瘤分子病理。酸RNA（EBER1和EBER2）。EBV通過gp350結(jié)合B細胞受體CD21，感染B淋巴細胞后，EB病毒DNA結(jié)成環(huán)狀結(jié)構(gòu)并自我復(fù)制[2]，EBV在受染細胞中合成EBV早期抗原、EBV殼抗原和EBV膜抗 原，然后組裝成完整的病毒顆粒而釋放，導(dǎo)致受染細胞的溶解死亡，此為EBV的增殖性感染。還有一種狀況叫潛伏性感染，即病毒在受染細胞中不增殖而表達多種基因產(chǎn)物，產(chǎn)生抗原。有研究報道90%以上的人曾感染過EBV，且大多數(shù)為潛伏感染[3]。EBV感染宿主后產(chǎn)生的抗原中，研究最多、與疾病發(fā)生關(guān)系最密切的是潛伏膜蛋白（EBV Latent menbrane protein，LMP）和EBV基因編碼的核糖核酸（EBV encoded RNAs，EBERs）[4]。與EB病毒感染有關(guān)的腫瘤有伯基特淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、某些類型的T細胞淋巴瘤、鼻咽癌和胃癌等。

2.微衛(wèi)星 微衛(wèi)星（Microsatellite，MSI）是廣泛存在于人類基因組中簡單串聯(lián)重復(fù)DNA序列，重復(fù)單位為1～6 bp，重復(fù)次數(shù)不超過60次，片段長度通常小于350 bp，它們一般處于可積累中性突變的非編碼DNA區(qū)域，在人群中呈高度多態(tài)性，并且穩(wěn)定遺傳，可用于個體鑒定。微衛(wèi)星不穩(wěn)定性（Microsatellite Instability，MSI）是指錯配修復(fù)（Mismatch repair，MMR）基因有缺陷后，同一微衛(wèi)星位點在同一個體的正常組織與異常組織之間，因微衛(wèi)星位點重復(fù)序列的插入或缺失而導(dǎo)致整個基因組處于不穩(wěn)定狀態(tài)。目前普遍認為微衛(wèi)星改變是基因重排及變異的來源，微衛(wèi)星可能通過與特異性蛋白質(zhì)結(jié)合或改變基因的結(jié)構(gòu)和位置而發(fā)揮其基因調(diào)控作用。基因內(nèi)或基因附近的微衛(wèi)星DNA的不穩(wěn)定，可能誘發(fā)這些基因的表達及功能的改變，如通過TGFβ22ⅡR、IGFⅡR、BAX等基因異常參與細胞生長、凋亡過程，從而引發(fā)疾病。有研究表明[5]，編碼區(qū)微衛(wèi)星不穩(wěn)定性能使基因發(fā)生移碼突變，從而產(chǎn)生截短蛋白，導(dǎo)致靶基因的失活。

EBV潛伏感染相關(guān)抗原及其致癌機制 1.潛伏膜蛋白1（LMP1） EBV 主要通過LMP1誘導(dǎo)B 細胞轉(zhuǎn)化。LMP1是EBV潛伏感染中編碼的分子量為 63 kD的跨膜蛋白，由氨基端、跨膜區(qū)、羧基端三部分組成。氨基端可將LMP1定位到受染細胞膜上，較長的羧基端激活區(qū)可激活諸多信號通路。LMP1通過激活 NFκB 信號通路而影響P53基因，從而干擾正常細胞周期，使宿主細胞增殖、凋亡失衡；LMP1還可通過激活磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）而啟動PI3K激酶磷脂酰肌醇通路，從而促進有絲分裂的發(fā)生[6，7，8]。LMP1目前已經(jīng)被證實為EBV致癌的關(guān)鍵基因，LMP1在胃癌、甲狀腺癌、肺癌等惡性腫瘤中都有陽性表達。

2.潛伏膜蛋白2（LMP2） LMP2 基因編碼兩種蛋白：LMP2A和LMP2B。LMP2A含有受體酪氨酸激活區(qū)（ITAM），該激活區(qū)磷酸化后可募集并激活酪氨酸蛋白激酶家族PTKs，從而調(diào)控淋巴細胞的增殖與分化。

3.EB病毒編碼的核糖核酸（EBERs） EBERs是由EBV自身編碼、組裝而成的核糖核酸。EBERs對宿主的主要影響是抑制蛋白激酶的激活，下調(diào)轉(zhuǎn)錄起始因子α 的磷酸化，從而起始轉(zhuǎn)錄，有利于EBV在宿主細胞內(nèi)持續(xù)感染。其次EBERs還可通過上調(diào)抗凋亡蛋白Bcl2 的表達，達到抗凋亡效果[9]。

4.EB病毒核抗原1（EBNA1） EBNA1與EBV基因組的復(fù)制和穩(wěn)定性有關(guān)，可維持EB病毒DNA在宿主細胞中的環(huán)化，利于EB病毒的潛伏性感染。有研究報道在EBV感染陽性的B細胞淋巴瘤中，survivin的表達明顯增強，推測EBV編碼的EBNA1抗原通過上調(diào)survivin基因的表達而起到抗凋亡的作用[10]。關(guān)于EBV引發(fā)鼻咽癌的發(fā)病機制，有研究報道EB病毒通過EBNA1抑制IKKα/β磷酸化而抑制感染細胞的NFκB信號通路，使受染細胞出現(xiàn)生長、分化異常，從而促進腫瘤發(fā)生[11]。

5.EB病毒核抗原2（EBNA2） EBNA2是EB病毒編碼的酸性磷蛋白。EB病毒促進B淋巴細胞的增殖，主要是通過EBNA2促進受染細胞和EB病毒的轉(zhuǎn)錄過程，同時上調(diào)潛伏膜蛋白的表達。Murornoto等[12]研究發(fā)現(xiàn)淋巴瘤的發(fā)生與EBNA2 協(xié)同 LMP1 上調(diào) STAT3轉(zhuǎn)錄有關(guān)。

6.EBV核抗原3（EBNA3） EBNA3家族由EBNA3A、EBNA3B、EBNA3C三個成員組成。EBNA3A和EBNA3C主要通過影響受染細胞的細胞周期而促進受染細胞的正增殖。B淋巴細胞轉(zhuǎn)化與EBNA3與 EBNA2、LMP1 間的協(xié)同作用關(guān)系密切。

7.EBV核抗原4（EBNA4/EBNALP） EBNA4 由EBNA mRNA先導(dǎo)鏈編碼，其蛋白表達受控于BamHIW重復(fù)序列[13]。EBNA4可與EBNA2協(xié)同，上調(diào) LMP1、LMP2的表達，促進病毒的致癌作用。

EBV相關(guān)淋巴瘤的類型 1.NK/T細胞淋巴瘤 NK/T細胞淋巴瘤歐美國家少見，亞洲國家多見。EBV既可感染B淋巴細胞也可感染NK/T淋巴細胞。有研究表明EBV感染與NK/T細胞淋巴瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切[14]。Ramakrishnan等[15]的研究發(fā)現(xiàn)EBV BamHIA 編碼區(qū)BART9可通過上調(diào)節(jié)LMP1的表達而促進NK/T細胞淋巴瘤的增殖。

2.霍奇金淋巴瘤 有研究顯示霍奇金淋巴瘤EBV感染陽性率為52.5%[16]。腫瘤性RS細胞高表達LMP1，提示 LMP1 對霍奇金淋巴瘤的發(fā)生起到重要作用。

3.伯基特淋巴瘤 伯基特淋巴瘤是B淋巴細胞來源的具有高度侵襲性的惡性腫瘤，約90%以上腫瘤細胞中可檢測到EBV。地方型伯基特淋巴瘤的發(fā)生、發(fā)展與EBV關(guān)系密切。大多數(shù)EBV 陽性的伯基特淋巴瘤高表達EBNA1、EBERs 和LMP1。研究發(fā)現(xiàn)EBNA1抑制了伯基特淋巴瘤細胞的凋亡，從而促進其生長、增殖[17]。伯基特淋巴瘤的腫瘤細胞常被檢測到8號和14號染色體易位，導(dǎo)致8號染色體長臂上的原癌基因cmyc與14號染色體上的IgH基因融合而過度表達，從而促進細胞的增殖導(dǎo)致伯基特淋巴瘤的發(fā)生[18]。

EBV與MSI的相關(guān)性及其在淋巴瘤中的作用 1.EBV與MSI的相關(guān)性 除了錯配修復(fù)基因功能失活，易導(dǎo)致微衛(wèi)星DNA重復(fù)序列的不穩(wěn)定性外，廣泛、重度的DNA損傷超過了DNA的修復(fù)功能也可能出現(xiàn)MSI，即過飽和機制。是否有其它基因及環(huán)境因素參與微衛(wèi)星不穩(wěn)定性改變，有待進一步研究。研究已證明EBV感染是鼻咽癌的一個重要病因，Mutirangura等[19]發(fā)現(xiàn)EBV感染陽性的鼻咽癌3p14的等位基因丟失頻率較高，提示EBV感染可能與鼻咽癌的遺傳學改變有關(guān)。也有研究報道EBV感染導(dǎo)致鼻咽癌可能的作用機制是病毒DNA整合到FRA3B區(qū)域，導(dǎo)致染色體缺失并可能滅活候選的抑癌基因而引起[20]。但有人對549例胃癌同時檢測了EBV和MSI，結(jié)果無一例同時表現(xiàn)EBV和MSI陽性，沒有證據(jù)顯示EBV感染與MSI有關(guān)[21]。也有人對宮頸癌進行了HPV感染和MSI研究， 結(jié)果提示HPV16可能不是通過MSI誘發(fā)宮頸癌的發(fā)生[22]。

2.MSI在淋巴瘤發(fā)病中的作用 目前國內(nèi)外有關(guān)MSI在淋巴瘤中的研究報道大多是針對B細胞性淋巴瘤。對MSI在T細胞性淋巴瘤中的情況研究報道較少，而我國該型淋巴瘤發(fā)生比例較西方國家高。國外研究認為特定類型淋巴瘤的發(fā)生與錯配修復(fù)系統(tǒng)某一基因的功能缺失是有關(guān)聯(lián)的[23，24]。也有報道認為錯配修復(fù)基因MLH1的缺失不僅易導(dǎo)致霍奇金淋巴瘤的發(fā)生，同時可能與腫瘤易于產(chǎn)生耐藥與腫瘤預(yù)后不良等因素有關(guān)[25]。國內(nèi)研究報道，T細胞淋巴瘤中存在MSI和p53基因突變，微衛(wèi)星改變陽性的腫瘤， p53突變傾向于高發(fā)[26]；而霍奇金淋巴瘤組織中伴p53基因突變的RS細胞未表現(xiàn)出錯配修復(fù)基因hMSH2、hMLH1蛋白表達減低或缺失[27]。魏中華等[28]對58例B細胞淋巴瘤6號染色體上七個微衛(wèi)星位點進行檢測，發(fā)現(xiàn)低頻的MSI。

綜上所述，淋巴瘤是我國發(fā)病率增長速度較快的血液系統(tǒng)惡性腫瘤，某些類型淋巴瘤的發(fā)生與EB病毒感染有關(guān)；部分淋巴瘤類型的發(fā)生還與基因組微衛(wèi)星DNA的不穩(wěn)定性有關(guān)。除了錯配修復(fù)基因異常可引起MSI外，可能還存在因病毒感染及病毒基因的整合、插入及其它環(huán)境因素造成宿主微衛(wèi)星DNA不穩(wěn)定性改變，從而引發(fā)疾病。目前這方面的報道不多，僅有的報道結(jié)論也不一致，有待進一步研究探討。

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