p16蛋白表達及HPV檢測在宮頸上皮內(nèi)瘤變中的診斷意義

【摘要】 目的 探討p16和HPV檢測在評估宮頸低度鱗狀上皮內(nèi)瘤變和高度鱗狀上皮內(nèi)瘤變分型中的價值。方法 對宮頸低度鱗狀上皮內(nèi)瘤變和高度鱗狀上皮內(nèi)瘤變患者同時采用第2代雜交捕獲（HC2）試驗系統(tǒng)檢測高危型HPV感染及檢測p16蛋白的表達，比較宮頸低度鱗狀上皮內(nèi)瘤變和高度鱗狀上皮內(nèi)瘤變HPVDNA負荷量和p16蛋白表達的差異。結(jié)果 宮頸低度鱗狀上皮內(nèi)瘤變中p16表達率為36.67%（11/30），高度鱗狀上皮內(nèi)瘤變中表達率為100%（40/40），二者比較差異有顯著性 （P<0.01）。30例低度鱗狀上皮內(nèi)瘤變中HC2檢測陽性率為6333%（19/30），高度鱗狀上皮內(nèi)瘤變中為97.5%（39/40），二者比較差異有顯著性（P<0.01）。HPV感染與p16表達呈正相關(guān)。結(jié)論 宮頸上皮內(nèi)瘤變中p16的強陽性染色和全層染色支持高度鱗狀上皮內(nèi)瘤變的診斷，高度鱗狀上皮內(nèi)瘤變與高危型HPV感染有關(guān)，對于宮頸高度上皮內(nèi)瘤變的診斷，最好HPV與p16聯(lián)合應用，以提高其病理診斷準確性。

【關(guān)鍵詞】 宮頸組織；乳頭狀瘤病毒感染；HC2檢測；p16蛋白表達

文章編號：1003-1383（2013）04-0513-03 中圖分類號：R737.33 文獻標識碼：A

宮頸上皮內(nèi)瘤變（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）是一組與浸潤性宮頸癌密切相關(guān)的癌前病變的統(tǒng)稱。由于CIN發(fā)展形成宮頸癌的病程較長，各類CIN分級的臨床處理方法不一，低級別CIN患者一般采取定期隨訪，高級別CIN患者一般行宮頸Leep術(shù)。因而對CIN的準確病理學診斷尤為重要，但僅根據(jù)HE切片對于低度鱗狀上皮內(nèi)瘤樣病變（CINⅠ）和高度上皮內(nèi)瘤樣病變（CINⅡ～Ⅲ級）之間的鑒別診斷，不同病理醫(yī)師在診斷時常存在爭議[1]。本研究旨在探討p16和高危型HPV感染

作者簡介：繆衛(wèi)娟（1975-），女，江蘇省江陰市人，醫(yī)師。研究方向：婦科病理。在鑒別二者中的意義。

對象與方法 1.研究對象 回顧性選擇2011年6月～2012年5月在江陰市婦幼保健院及常州市腫瘤醫(yī)院婦科門診就診的宮頸環(huán)切組織患者，經(jīng)常規(guī)制片、HE染色，由2位有經(jīng)驗的病理醫(yī)生嚴格統(tǒng)一診斷，共挑選宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）患者70例，其中低級別上皮內(nèi)瘤變（CINⅠ級）患者30例，高級別上皮內(nèi)瘤變（包括CINⅡ級、CINⅢ級及原位癌）患者40例。研究對象年齡22～50歲，均為非妊娠期，非月經(jīng)期。

2.方法

（1）HPVDNA檢測：在受檢者宮頸管及宮頸外口刷取標本，用美國Digene公司第二代雜交捕獲試驗（hybrid capture，HC2）行高危型人乳頭狀瘤病毒（HPVDNA）的測定，測定HPVDNA含量，判斷結(jié)果分為陽性和陰性。檢測值<1.0 pg/ml為陰性，≥1.0 pg/ml為陽性。

（2）免疫組化檢測：采用EnVision二步法。p16鼠單克隆抗體購自北京中杉生物技術(shù)有限公司，以已知陽性標本作為陽性對照，以PBS代替一抗作為陰性對照。p16表達定位于細胞核或細胞質(zhì)，判讀結(jié)果參照張建蘭等標準[2]：陰性（-）：陽性細胞數(shù)<5%；弱陽性（+）：陽性細胞數(shù)為5%～24%；陽性（++）：陽性細胞數(shù)為25%～50%；強陽性（+++）：彌散的細胞染色，陽性細胞數(shù)>50%。

3.統(tǒng)計學方法 統(tǒng)計分析采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件。系統(tǒng)相關(guān)資料采用χ2檢驗比較兩種方法是否存在差異，P<0.05為差異有顯著性。

結(jié) 果 1.宮頸病變中HPV表達相關(guān)性 70例標本中HC2的檢出率為82.86%（58/70），其中30例低級別CIN患者中HC2檢測陽性率為63.33%（19/30），高級別CIN中檢測陽性率為97.5%（39/40），二者比較差異有顯著性（χ2=14.09，P<0.01）。見表1。

2.宮頸病變中p16表達相關(guān)性 70例標本中，p16的表達率為72.86%（51/70）。其中低級別CIN中p16表達率為36.67%（11/30），高級別CIN表達率為100%（40/40），二者比較差異有顯著性（χ2=34.77，P<0.01）。低級別組p16表達呈局灶性，散在弱陽性。高級別組p16表達主要呈全層彌漫性，強陽性，且p16表達類型逐漸從弱陽性轉(zhuǎn)變?yōu)閺婈栃浴Ｒ姳?。

3. HPV與p16的關(guān)系 本研究中高級別CIN中39例HPV感染者全部表達p16（+），低級別CIN中19例HPV感染者有10例p16（+），二者比較差異有顯著性（χ2=18.40，P<0.01）。表明高危型HPV感染與p16呈正相關(guān)，同時還提示：隨著CIN級別進展，HPV的檢出率和p16蛋白的表達也同時升高。

討 論 目前大量研究已經(jīng)證明高危型HPV生殖道持續(xù)感染是引起CIN及宮頸癌的必要條件。HPV感染是一種通過性生活傳播的疾病，性活躍婦女一生感染高危HPV的機會高于70%，且大多為一過性，通常感染在數(shù)月至兩年內(nèi)消退，只有5%～10%的高危HPV可表現(xiàn)為持續(xù)感染狀態(tài)。從病毒感染到宮頸癌的發(fā)生需要十幾年，而癌前病變期是可逆轉(zhuǎn)的，因此高危型HPV檢測正日益受到臨床醫(yī)生和患者的重視。HC2是目前唯一經(jīng)美國FDA及中國SDA認證的，允許用于臨床高危型HPVDNA的檢測方法，目前HPVDNA含量與宮頸病變進展的關(guān)系還處于爭論之中，多數(shù)文獻報道并無相關(guān)性[3，4]。本結(jié)果顯示低級別CIN中高危型HPV檢測的陽性率為63.33%（19/30），高級別CIN中高危型HPV檢測的陽性率為97.5%（39/40），兩者比較差異有顯著性，提示宮頸HPVDNA含量與宮頸病變程度有一定相關(guān)性。p16在宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）的發(fā)生發(fā)展機制中起調(diào)控作用，p16基因是細胞周期中作用于細胞分裂周期關(guān)鍵酶CDK4的抑制因子，它可阻止細胞從Gl期進入S期，從而抑制細胞增殖。當p16基因突變致結(jié)構(gòu)和功能缺失時，可刺激細胞旺盛分裂增殖，引起細胞的非典型增生，甚至癌變。因此從理論上推測，p16檢測對宮頸病變進展更具特異性。本結(jié)果顯示，p16蛋白表達在低級別CIN中的陽性率為36.67%（11/30），且p16表達呈局灶性，散在弱陽性，在高級別CIN中的陽性率為100%（40/40），p16表達主要呈全層彌漫性，強陽性，且p16表達類型逐漸從弱陽性轉(zhuǎn)變?yōu)閺婈栃裕卟町愑酗@著性，與文獻報道一致[5]。提示宮頸上皮中p16的強陽性染色和全層染色高度支持高級別CIN的診斷，p16檢測可作為宮頸上皮內(nèi)瘤變之間的鑒別診斷標記物，p16蛋白在宮頸組織學中的表達與宮頸組織學疾病嚴重程度呈正相關(guān)，也認為可根據(jù)p16免疫染色情況為宮頸組織學疾病嚴重程度提供診斷依據(jù)。

由于CIN患者的最佳處置與CIN的關(guān)系密切，低級別CIN患者一般采用定期隨訪，高級別CIN患者一般采用Leep術(shù)，因而對CIN的準確病理學診斷尤為重要。對組織中是否存在CIN及判斷CIN的級別，僅根據(jù)HE切片，不同病理醫(yī)師在診斷時常存在爭議。如果在組織學的基礎(chǔ)上再尋找有效的預測指標，從數(shù)量和性質(zhì)兩個角度對所查病變的特征做出評估，則更具有診斷價值。本研究結(jié)果表明，隨著宮頸CIN病變加重，HPV檢出率逐漸升高，p16蛋白表達亦逐漸升高，且兩者呈正相關(guān)，故在CIN診斷中高危HPV檢測與p16聯(lián)合應用可起到互相補充的作用。聯(lián)合運用高危HPV檢測及p16蛋白檢測，有可能對CIN的分級有幫助，具有一定的臨床應用價值。

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