桂西地區(qū)少數(shù)民族瘧疾感染人群紅細(xì)胞CD35分子表達(dá)研究

【摘要】目的探討紅細(xì)胞免疫相關(guān)表面分子CD35與瘧疾感染的相關(guān)性。方法選擇桂西地區(qū)少數(shù)民族人群曾經(jīng)感染或者正在感染瘧疾的587例患者（瘧疾易感組）和560例健康成年人（非易感組）作為觀察對(duì)象，運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)紅細(xì)胞表面分子CD35的表達(dá)水平，以探討瘧疾感染與紅細(xì)胞免疫功能的關(guān)系。結(jié)果瘧疾易感組紅細(xì)胞CD35平均熒光強(qiáng)度為（60.81±29.73），明顯低于非易感組的（67.93±25.05），組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=43935，P=0.000）。結(jié)論桂西地區(qū)少數(shù)民族瘧疾易感人群中，紅細(xì)胞表面分子CD35與瘧疾感染有著較為密切的聯(lián)系，為瘧疾感染的診斷和治療提供了新思路，其具體作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

【關(guān)鍵詞】瘧疾；紅細(xì)胞免疫；CD35

文章編號(hào)：1003-1383（2013）03-0321-03中圖分類(lèi)號(hào)：R34 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

瘧疾是瘧原蟲(chóng)寄生于人體所引起的傳染病，廣泛分布于熱帶、亞熱帶及溫帶邊緣地區(qū)，在多數(shù)熱帶地區(qū)仍然是一種多見(jiàn)的公共健康問(wèn)題，而桂西地處亞熱帶，也是瘧疾的高發(fā)地區(qū)，其流行對(duì)該地區(qū)各民族分布產(chǎn)生了深遠(yuǎn)影響。近年來(lái)許多研究表明，瘧疾的感染與紅細(xì)胞的黏附功能有關(guān)[1]，許多病理特征都與瘧原蟲(chóng)感染和紅細(xì)胞相互作用有關(guān)。而紅細(xì)胞膜表面存在著大量的黏附相關(guān)分子，它們可能是紅細(xì)胞發(fā)揮抗瘧免疫功能的重要分子基礎(chǔ)[2]。因此，該課題成為醫(yī)學(xué)界研究的熱點(diǎn)之一，筆者曾經(jīng)對(duì)相關(guān)課題作了初步研究[3～5]，本研究主要運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定紅細(xì)胞表面分子CD35表達(dá)水平，旨在探討瘧疾的感染與紅細(xì)胞免疫功能的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)道如下。對(duì)象與方法1.實(shí)驗(yàn)對(duì)象以桂西地區(qū)經(jīng)歷過(guò)瘧疾流行的人群為研究對(duì)象，按瘧疾易感者和非易感者分為兩個(gè)組，其中瘧疾易感組587例，主要為曾經(jīng)感染或者正在感染瘧疾的患者，均為居住在桂西地區(qū)的少數(shù)民族人群。男345例，女242例，年齡20～75（43.2±15.3）歲。另選擇560例健康成年人（非易感組）作

※基金項(xiàng)目：廣西自然科學(xué)基金課題（桂科自0728247）；國(guó)家自然科學(xué)基金課題（81160212）。

作者簡(jiǎn)介：陳文成（1975-），男，廣西寧明縣人，碩士，暨南大學(xué)在讀博士，從事臨床微生物學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn)工作。E為對(duì)照，男357例，女203例，年齡20～72（44.8±13.8）歲，健康對(duì)照組為同一生活環(huán)境內(nèi)、隨機(jī)抽樣的成年人，均未感染過(guò)瘧疾。兩組的年齡、性別、居住環(huán)境比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

2.主要試劑所有試劑均從BD公司購(gòu)買(mǎi)：CD35熒光抗體、同型對(duì)照IgG1抗體、校準(zhǔn)微球。軟件為BD FACSDivaTM，用BD FACSCantoTMⅡ流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

4.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所得數(shù)據(jù)用SPSS 13.0軟件包進(jìn)行分析，計(jì)量資料以（-±s）表示，兩獨(dú)立樣本的比較用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果 瘧疾易感組紅細(xì)胞CD35平均熒光強(qiáng)度為（6081±2973），明顯低于非易感組的（6793±2505），組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=43935，P=0000）。說(shuō)明紅細(xì)胞表面分子CD35與瘧疾感染有著較為密切的聯(lián)系。封四圖1為瘧疾易感者紅細(xì)胞CD35平均熒光強(qiáng)度檢測(cè)圖。討論瘧疾是種群進(jìn)化進(jìn)程中自然界對(duì)人類(lèi)基因進(jìn)行選擇的重要因素之一，人類(lèi)的基因組中，有的基因賦予了人類(lèi)抵抗瘧疾的能力，使他們能夠在瘧疾流行區(qū)中得以存活下來(lái)，這些基因在特定人群中也得以濃集，從而影響了人類(lèi)的健康，也導(dǎo)致了某一群體中的這些基因特殊的平衡多態(tài)性[3]。桂西地區(qū)是壯族居住最密集的地區(qū)，也是地中海貧血等遺傳性紅細(xì)胞缺陷及瘧疾的高發(fā)區(qū)[6]，瘧疾危害在20世紀(jì)中期得到了有效控制，但在80年代該地區(qū)仍有三次大的流行，瘧疾又開(kāi)始死灰復(fù)燃，并有愈演愈烈之勢(shì)[7]。

瘧疾感染和紅細(xì)胞免疫有密切聯(lián)系，近年來(lái)國(guó)外有研究顯示[8，9]，瘧疾的感染與紅細(xì)胞黏附功能有關(guān)。紅細(xì)胞膜表面的一些受體是瘧原蟲(chóng)侵入紅細(xì)胞過(guò)程所必需的，已有研究表明紅細(xì)胞補(bǔ)體受體Ⅰ（CR1）介導(dǎo)的免疫黏附功能、異常血紅蛋白等紅細(xì)胞疾病均與抵抗瘧原蟲(chóng)感染免疫有關(guān)[10]。多年前，CR1又被認(rèn)為是瘧疾患者紅細(xì)胞形成玫瑰花結(jié)的主要受體，惡性瘧疾具有在試管中使未感染紅細(xì)胞黏附感染細(xì)胞形成細(xì)胞團(tuán)的能力，在非洲的眾多研究中都發(fā)現(xiàn)，許多嚴(yán)重的瘧疾患者都有這種細(xì)胞成團(tuán)的現(xiàn)象[11]。因此，研究者對(duì)CR1基因多態(tài)性越來(lái)越感興趣，不斷探索CR1在嚴(yán)重瘧疾致病中的作用。近年來(lái)的研究結(jié)果進(jìn)一步支持CR1與嚴(yán)重瘧疾的致病性有關(guān)，首先，Cockburn等發(fā)現(xiàn)，在巴布亞新幾內(nèi)亞，導(dǎo)致CR1低表達(dá)的基因型在瘧疾高發(fā)區(qū)極常見(jiàn)，且與嚴(yán)重瘧疾的保護(hù)相關(guān)聯(lián)[9]。但在其它人群的研究中都給出矛盾的報(bào)道，如在泰國(guó)成人中，低表達(dá)CR1與嚴(yán)重瘧疾保護(hù)有關(guān)；在岡比亞人群的研究中，低表達(dá)CR1對(duì)嚴(yán)重瘧疾無(wú)保護(hù)作用[8]。這些不同的觀察結(jié)果可能是因?yàn)镃R1表達(dá)隨年齡變化，不同瘧疾高發(fā)區(qū)的流行型不同以及CR1與其他基因相互作用結(jié)果不同而異。因此，各地區(qū)有必要對(duì)CR1與瘧疾的致病和保護(hù)作用作進(jìn)一步深入的研究。

我們的研究結(jié)果顯示：瘧疾易感者和非易感者紅細(xì)胞CD35平均熒光強(qiáng)度比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），瘧疾易感者紅細(xì)胞CD35分子的平均熒光強(qiáng)度明顯低于非易感者，該地區(qū)瘧疾易感者CR1低表達(dá)可能與瘧疾的保護(hù)相關(guān)聯(lián)。CR1是一個(gè)分子約為200KD的單鏈糖蛋白，是紅細(xì)胞執(zhí)行免疫功能的主要分子基礎(chǔ)，其主要功能是通過(guò)CR1促進(jìn)免疫復(fù)合物由循環(huán)中完全清除。無(wú)論是紅細(xì)胞上CR1 的表達(dá)降低，還是紅細(xì)胞黏附功能下降，均會(huì)引起機(jī)體免疫功能低下，而本研究結(jié)果顯示瘧疾易感者紅細(xì)胞CD35分子的平均熒光強(qiáng)度明顯低于健康對(duì)照者，提示紅細(xì)胞免疫功能下降，有利于瘧原蟲(chóng)侵入，這為瘧疾感染的診斷和治療提供了新思路。

目前，雖然有關(guān)紅細(xì)胞的其他多種免疫功能并未得到普遍認(rèn)可[11]，但已有相當(dāng)數(shù)量的研究，尤其是近年來(lái)紅細(xì)胞黏附作用在抗瘧疾免疫方面的作用越來(lái)越受到人們關(guān)注[12]。而紅細(xì)胞膜表面存在著大量的免疫相關(guān)分子，如CD35、CD44、CD47、CD55、CD58、CD59等，它們中有些可能是紅細(xì)胞發(fā)揮抗瘧免疫功能的重要分子基礎(chǔ)，CD35是參與紅細(xì)胞免疫-±s）