舒血寧對高氧暴露早產鼠視網膜HIF—1α和VEGF表達的影響

摘要：目的：觀察舒血寧對高氧暴露早產鼠視網膜缺氧誘導因子-1α（hypoxia inducible factors-1α，HIF-1α）和血管內皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）表達的影響。

方法：3日齡早產大鼠36只隨機分為：高氧組、干預組、空氣組，免疫組織化學法檢測各組早產鼠視網膜HIF-1和VEGF表達水平。

結果：空氣組HIF-1α、VEGF均呈低表達，未見或罕見突破內界膜的內皮細胞核；與空氣組相比，高氧組突破內界膜的內皮細胞核明顯增多，HIF-1α及VEGF表達的表達均顯著增加，（P分別<0.001，0.001，0.01），與高氧組相比，干預組突破內界膜的內皮細胞核明顯減少，HIF-1α及VEGF的表達均顯著下降（P分別<0.05，0.001，0.05）；視網膜HIF-1α的表達與VEGF的表達、視網膜HIF-1α的表達與突破視網膜內界膜內皮細胞核數、VEGF的表達與突破視網膜內界膜內皮細胞核數均呈正相關（r分別為0.55，0.65，0.46，P分別<0.01，0.01，0.05）。

結論：高氧暴露早產鼠視網膜內可觀察到VEGF和HIF-1α的高表達，舒血寧使高氧暴露早產鼠視網膜HIF-1和VEGF的表達明顯下降，突破視網膜內界膜的內皮細胞核數量明顯減少，減少新生血管的形成，對高氧性視網膜病有一定的保護作用。

關鍵詞：視網膜病新生鼠缺氧誘導因子-1α血管內皮生長因子舒血寧

【中圖分類號】R4【文獻標識碼】A【文章編號】1008-1879（2012）12-0001-02

早產兒視網膜病變（rentinopathyofprematurity，ROP）原稱晶體后纖維增生癥，是一種因視網膜血管異常增殖而導致幼兒視力嚴重喪失的疾病，嚴重威脅早產兒存活和生存質量。目前的研究以抗血管內皮細胞生長因子治療為熱點[1]。本實驗我們觀察舒血寧對高氧暴露早產鼠視網膜HIF-1α和VEGF表達的影響，探討高氧暴露下視網膜HIF-1α和VEGF表達增加的機制及舒血寧的保護作用。

1材料與方法

1.1ROP動物分組和處理方法。提前1天剖宮產出生的新生早產大鼠36只，適應性生長3天后進入實驗程序，隨機分為：高氧組、干預組、空氣組。三組鼠均置于同一實驗室，室內溫度25～26℃。其中高氧組和干預組均吸入濃度≥90%氧，每日監測氧濃度3次（CYS21數字式測氧儀，上海嘉定學聯儀表廠），用鈉石灰吸收二氧化碳。高氧組、干預組每天開箱1h，添加水及飼料，更換墊料，并與空氣組互換母鼠，避免母鼠因氧中毒致護理能力下降，7天后返回空氣5天；空氣組置于同一室內空氣中。干預組吸氧同時每天還接受舒血寧腹腔注射（黑龍江省珍寶島制藥有限公司產品，每支5ml，折合銀杏葉提取物為17.5mg，含總黃酮醇苷4.2mg；含銀杏內酯0.70mg），舒血寧用生理鹽水20倍稀釋，劑量為0.15ml/10g。高氧組和空氣組每天用等量生理鹽水腹腔注射。實驗結束即頸椎脫臼處死，摘除眼球，每組12只鼠，24只眼球，經固定、脫水、石蠟液浸蠟包埋，作平行于角膜至視盤的矢狀位的4μm厚度連續切片，制作視網膜組織切片。

1.2視網膜新生血管內皮細胞計數。每只眼球取5張視網膜組織切片，石蠟切片脫蠟至水，常規HE染色并用CD34抗體標記視網膜內皮細胞觀察視網膜血管數量和形態情況，光鏡下計數突破內界膜的內皮細胞核數目，計算5張切片的平均數。

1.3視網膜組織HIF-1α及VEGF蛋白檢測。SABC法[2]。在高倍顯微鏡（×400）下隨機選取10個視野，數出每個高倍鏡視野的細胞數及陽性細胞數，并計算陽性細胞的百分率。

1.4統計學處理。采用SPSS11.0軟件系統，標準差計量資料用均數（X±S）表示，多組間比較采用秩和檢驗，兩組間比較用t檢驗，以α=0.05作為檢驗水準。P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1新生血管內皮細胞數。空氣組均未見或罕見突破內界膜的內皮細胞核。高氧組可見到大量突破內界膜的內皮細胞核，與空氣組相比增加明顯[（22.90±6.27）vs（2.22±1.07），t=213.30，P<0.001]，與高氧組相比，干預組突破內界膜的內皮細胞核明顯減少[（16.55±6.36）vs（22.90±6.27），t=5.24，P<0.05]，見表1。

2.2HIF-1α的表達。空氣組有微弱表達，高氧組的表達明顯著高于空氣組[（41.90±8.07）vs（2.27±0.63），t=227.45，P<0.001]，與高氧組相比，干預組HIF-1α表達明顯降低[（24.73±6.23）vs（41.90±8.07），t=13.43，P<0.01]，見表1。

2.3VEGF的表達。空氣組有較低水平VEGF的表達；高氧組VEGF表達明顯高于空氣組[（39.44±6.83）vs（11.89±3.98），t=66.26，P<0.001）；與高氧組相比，干預組的表達明顯下降[（30.33±8.54）vs（39.44±脊柱滑脫是常見脊柱疾病，常見于峽部裂性和退行性，目前手術方法主要包括：單純椎板減壓，減壓和脊柱融合，以及在減壓和橫突間植骨基礎上運用的內固定。本文從多年研究的基礎上運用椎體移位矯正術治療并隨訪40例原發性退行性脊柱滑脫患者，取得不錯的效果。椎體移位矯正術治療脊柱滑脫是個創新，2003年以來，通過對40例脊柱滑脫患者的治療隨訪，以探索脊柱滑脫新治療步驟及新治療方法，利于患者對脊柱滑脫非手術治療方法上多一個選擇，目前國內外鮮見報道。

1對象與方法

1.1病人來源。2003年1月至2012年1月份本市各縣級以上醫院確診的病人，其診斷具有影像學依據。

1.2入選標準。

1.2.1診斷標準。結合脊柱外科學和Marchetti及Bartolozzi改良的1994年對脊柱滑脫的分型。主要有以下幾點：

（1）無明顯的腰部外傷及手術史。

（2）癥狀：腰部疼痛，或伴下肢放射痛、麻木，間歇性跛行，臥床不起等。

（3）體征：要部活動受限，膀胱及直腸反射功能降低或障礙，下肢肌肉輕度萎縮，膝或踝關節反射減弱。

（4）X線攝片，常規正側位及雙斜位片，CT掃描，MRI攝片以排除病理性滑脫。據此判斷脊柱的穩定性和分級。

1.2.2分度標準。采用Meyerding提出的滑移分度標準：I°：滑移為0-25%；Ⅱ°：滑移為25-50%；Ⅲ°：滑移為50-75%；Ⅳ°：滑移大于75%。

1.2.3納入標準。①符合上述診斷標準；②年齡40-75歲之間；③常規檢查無明顯異常；④能積極配合，完成臨床觀察。

1.3過程與方法。

1.3.1治療方法。采用研究小組研制的椎體矯正術。患者俯臥，掌握治療參數的醫生，明確診斷后，用國家專利儀器：椎體移位矯正儀，根據參數固定橫突，力點選在突出的棘突和橫突上，借助腹肌施力于脊突旋轉以矯正移位的脊椎，使移位現象消失。5次為一療程，隔日一次。一般治療一至三療程，平均二療程。

1.3.2輔助治療。在患者頸部查找到移位椎體用手法或打磨過的牛角側臥位按壓以矯正頸椎移位，暢通神經信息，啟動神經免疫調節；少部分患者配合內服草藥湯劑，基本方劑為：防風、防己、威靈仙、炒棗仁、蒼術、白術、羌活、獨活、知母、桂枝等。因癥加減。或西藥：魯南貝特配阿司匹林腸溶片口服三次/日，療程一周。

1.3.3功能鍛煉。囑患者每日俯臥于凳上兩腳離地半小時；或者腰背肌鍛煉，病人俯臥，腹部墊一薄枕，使腰椎保持平行位置，抬伸上身和腿，以鍛煉腰背肌肉。

1.3.4觀察指標。療效指標根據日本整形外科協會的JOA評分標準來判定腰痛的治療效果，所有患者在治療前，治療后一年及最終隨訪時均JOA評分，以評價神經功能恢復情況，評估指標主要包括主觀癥狀（腰痛、腿痛、步態）與臨床體征（感覺和運動障礙、直腿抬高試驗）日常活動受限情況及膀胱功能，腰椎X線片CT或MRI以明確滑脫情況和椎間情況。統計學處理采用配對資料的t檢驗；治療后恢復率參照Hirabayashi法計算。

1.3.5療效的評價標準。根據JOA評分標準，大于30分為優秀，20-30分為良，10-20分為中，小于10分為差。結合治療前后腰椎側位腰椎滑脫程度的測量。

2結果

2.1資料分析及療效。本組40例患者，男15例，女25例，年齡最大75歲，最小46歲。I°滑脫18例，Ⅱ°滑脫22例。隨訪時間為1年至3年，平均2年。JOA評分治療前為11.4+3.6，治療后一年位24.4+3.5，最終隨訪時為24.6+3.8。治療前后差異有顯著性（P<0.01），治療后一年與末次隨訪間差異無顯著性（P>0.05）。治療后原發腰腿痛癥狀明顯緩解或消失，X線片顯示35例滑脫完好復位，4例部分復位，1例無明顯變化。

2.2安全性評價。收治病人中有4例出現局部紅、腫、痛反應，經過進一步治療，癥狀體征消失。

2.3本治療法的禁忌癥：孕婦、肝硬化、骨結核、肺大泡、氣胸、胸腔積液、嚴重缺鈣、內臟器官損傷、內臟大手術后、腦溢血、嚴重精神病、晚期腫瘤等。

3結論

對于原發性脊柱滑脫手術較多，基本方式主要包括：單純椎板減壓，減壓和脊柱融合，以及在減壓和橫突間植骨基礎上運用的內固定.非手術仍然被大都數患者所接受.非手術療法主要有：推拿，功能鍛煉，理療配合藥物等，椎體移位矯正術屬于非手術療法范圍。本法主要的優點如下：

（1）治療時間短，非經皮手術，幾乎無創傷，安全且治療費用低，為綠色療法。

（2）治療后不需臥床休息，不影響患者正常生活。

（3）療效較好，可能與脊柱神經系統的修復及免疫調節的啟動有關。

（4）患者的骶骨和骨盆前移，改變了患者的力線，對于滑脫復位后的穩定起到至關重要的作用。

（5）方法簡單安全，基層醫院值得推廣普及。

理論探討：

（1）通過矯正椎體的輕微移動，小關節的錯位得到糾正，同時在脊椎緩慢旋轉的過程中，起到了減壓、解除神經根壓迫的效果，有利于椎間盤回納修復。

（2）對骶骨及骨盆的向前方向移動，有利于改善身體前后力線方向，使身體容易平衡，解決了“翹臀”步態問題，同時有利于背部肌肉群的功能恢復。

（3）神經根壓迫的解除，椎間盤的復位椎體移位的復位，有利于神經信息的調節，重啟免疫修復，恢復腰部及下肢功能，排除陳舊黏連及無菌體毒。

（4）頸部椎小關節復位，對于全身的免疫修復有一定意義，也有利于背部肌肉群和下肢神經肌肉的恢復。

（5）囑患者經常爬凳及肌肉功能鍛煉，有利于預防滑脫的再發生，鍛煉背部肌肉群。

參考文獻

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