TRFIA測定HCV的假陽性和解決方法

【摘要】目的了解時間分辨熒光免疫分析法（TRFIA）檢測HCV的假陽性率，為臨床檢測HCV提供參考方法。方法TRFIA法檢測了3854份血清標本，篩選HCV結果為弱陽性的28份標本，用酶聯免疫吸附試驗（EL1SA）復核檢測，復查ELISA為陽性的發陽性報告；ELISA法檢測結果陰性者，用PCR法再次復查，陰性者發陰性報告。結果TRFIA法檢測HCV的假陽性率為0.441%（17/3854），而用PCR法再次復查后假陽性占總檢測標本百分比降至0.415%（16/3854）。結論TRFIA法檢測HCV假陽性偶有發生，絕大多數可以通過用ELISA法復檢加以糾正。

【關鍵詞】酶聯免疫法；時間分辨免疫熒光分析法；HCV

丙型肝炎病毒（HCV）感染引起的肝炎是危害人類健康的疾病之一，當前，臨床上診斷丙肝病毒感染的方法主要有血清抗體的檢測和分子生物學技術檢測病毒核酸等。其中自動酶聯免疫測定可用于檢測大批量樣本，用來初步檢測血液中的丙肝病毒抗體，然而，在臨床實踐中，在免疫力低下患者或腎衰竭患者或冷球蛋白血癥合并丙肝病毒感染者，可有產生假陰性結果?？贵w弱陽性者需要用核酸擴增的方法定量檢測HCV-RNA。

1材料與方法

1.1研究對象選取2012年4月5日-2012年6月5日，通化中心醫院門診患者與住院病人血清共3854份，收集OD值在1.0-2.0之問的弱陽性標本28份。

1.2主要儀器和試劑①HCV酶免疫診斷試劑盒為上海實業科華生物技術有限公司產品。②HCV時間分辨免疫熒光分析法測定試劑盒為蘇州新波生物技術有限公司產品。ANYTEST2000時間分辨熒光測定儀出自上海新波生物技術有限公司。

1.3方法酶聯免疫法、時間分辨免疫熒光分析法對血清標本進行檢測，嚴格按照試劑盒說明書操作測定；對TRFIA法檢測結果HCV為弱陽性的標本，全部用ELISA法復核檢測，其ELISA為陽性的發陽性報告；ELISA法檢測結果陰性者，再用PCR法復查陰性者發陰性報告。

2結果

TRFIA法共檢測了3854份血清標本，收集其OD值在1.0-2.0之問的28份弱陽性標本，以ELISA法進行復檢，其中11份標本HCV陽性，將余下17份標本檢測HCV—RNA，其中1份陽性。TRFIA法檢測HCV的假陽性占總檢測標本的百分比為0.441%（17/3854），而用PCR法再次復查后假陽性占總檢測標本的百分比降至0.415%（16/3854）。

3討論

丙型肝炎病毒作為非經口傳播的非甲非乙型肝炎的主要病原于1989年得到確認。全世界大約有1.7億人為慢性丙肝病毒感染患者，其特征是導致不同程度的炎癥和肝臟的纖維化。部分慢性感染患者經過20-40年將發生進行性的肝臟損害以致肝硬化及終末期肝病的各種并發癥。目前在發達國家，慢性丙肝感染是肝移植的首要適應證，在未來10-20年中慢性丙肝將繼續成為重要的健康和經濟負擔，因此，進一步提高血清HCV檢測的準確度、靈敏度及特異性有重要意義。

3.1酶聯免疫法是傳統的HCV檢測方法，因其成本低廉、操作簡單、易于大批量檢測，己普遍應用，但它特異性和敏感度都較差，對低水平人群易造成漏檢：由于孔間差異、批間差異、不同操作者之間差異、放置時間差異、環境溫度不同等導致其檢測的重復性也差；由于方法學本身的局限性，酶聯免疫法只能進行HCV陰性和陽性的定性判斷，不能進行HCV的定量檢測；由于其試劑盒中酶標試劑不易保存，操作中需通過加樣、加試劑、孵育、洗板等一系列過程，延時長，對于低水平存在的HCV酶聯免疫法易產生假陽性或假陰性，易引起標本間交叉污染或陽性標本對人體的污染，給實驗室檢測工作帶來不便，不能滿足臨床急診快速出結果的要求。

3.2時間分辨免疫分析技術（TRFIA）是近年發展起來的精密的免疫標記檢測技術，它以稀土離子為標記物，通過時間延遲，去除非特異性熒光干擾，在固定時間檢測特異性熒光，解決了自然背景干擾問題，明顯提高了檢測靈敏度，提高了光譜的分辨率，使特異性明顯增強。與酶聯免疫法比較，TRFIA靈敏度高，特異性強，操作簡便，不用放射性物質而用鑭系作標記物，因此具有無放射性，標記物穩定，便于長期保存，試驗重復性好，分析速度快，樣品用量少及標準曲線量程寬等優點^[1]，時間分辨也有時間分辨的缺點，就是由于其在國內起步較晚，試劑盒的性能及穩定性方面都還不夠好，且對實驗室條件和操作人員條件要求高，血液成分復雜，存在多種未知的干擾，可能造成假陽性，同時操作不當也是引起假陽性的主要原因，本實驗嚴格按照試劑說明書操作，很大程度上減少了實驗誤差。試劑本身的質量問題也會引起TRFIA法檢測HCV假陽性結果。本實驗所用的試劑都是經衛生部批檢合格的產品，并在有效期內使用。TRFIA法檢測HCV假陽性時有發生，但從本實驗的結果看，絕大多數都可以通過用ELISA法復檢加以糾正。

抗體陽性而丙肝病毒RNA陰性在臨床中也偶爾可見，這提示可能為感染清除；或者免疫檢測假陽性，可見于低?；颊撸换蛘唛g斷性低水平病毒血癥極少見。

參考文獻

[1]葉應嫵，王毓三，申子瑜，主編.全國臨床檢驗操作規程（第三版）[M].南京：東南大學出版社，2006：571.

[2]丙型肝炎病毒抗體酶聯免疫吸附試驗陽性判斷值在獻血員血液篩檢中的意義[J].中華檢驗醫學雜志，2004（10）.

[3]乙型肝炎病毒免疫檢測弱反應性標本的產生原因及處理[J].中國中醫藥現代遠程教育，2010（11）.