探討孕婦HBV—DNA定量對監測母體HBV傳播價值

【摘要】目的乙型病毒性肝炎是目前已確認的病毒性肝炎中對人類健康危害最為嚴重的一種肝炎。方法采用熒光定量PCR技術對122例乙肝血清標志陽性的孕婦及其嬰兒血清進行HBV-DNA定量檢測，分析母嬰血清中含HBV-DNA的數量存在的相關性。結果在41例“大三陽”的孕婦組中，患者的血清中的HBV-DNA所含的數量在6.00-9.90之間，測的的平均值是7.57±1.27，母嬰傳播率為82.9%；“小三陽”組孕婦65例，血清HBV-DNA含量范圍為<2.00-4.71，均值為413±1.64，母嬰傳播率為52.3%；在14例單一的HBcAb陽性的孕婦組中，患者的血清中含有的HBV-DNA的數量的范圍小于2.00-4.71，測的平均值是3.17±1.54，母嬰傳播率為12.5%，HBV母嬰宮內傳播率隨孕婦血清HBV-DNA含量的增高而增加。結論母嬰乙型肝炎病毒宮內傳播率與孕婦血清中HBV-DNA含量呈正相關性（r=0.351，p<0.01），當孕婦血清中HBV-DNA含量>6.00時，乙型肝炎病毒母嬰宮內傳播率顯著增加（增加47.5%），提示有效控制患乙肝孕婦血清中HBV-DNA含量，可明顯減少宮內母嬰乙肝病毒傳播率。

【關鍵詞】熒光定量PCR；HBV-DNA含量；乙型肝炎病毒；宮內傳播

1資料與方法

1.1一般資料選擇122名乙肝陽性的孕婦，經統計在122名患者中有41名大三陽患者即患者的血清中HbcAb陽性，HB-sAg陽性，HbeAg陽性；有65名患者是小三陽即患者的血清中HbcAb陽性，HbsAg陽性，HbeAg陽性；有16名患者是血清中只有HBcAb陽性。采血的時候要注意，在孕婦分娩之前采集孕婦的靜脈血，在分娩的過程中采集胎兒的臍帶血。采完血之后，用設備將血清進行分離，將分離后的血清放在零下20℃的環境中進行保存，留在以后用。選擇合適的試劑。

1.2實驗方法

1.2.1選擇HBV-DNA定量的基本方法來進行實驗。第一步先將獲得的血清樣本中的HBV-DNA通過PCR技術進行相應的不對稱的擴增，在擴增的過程中會產生一條單鏈的DNA模板。第二步，在實驗的血清中加入能夠與該擴增的單鏈的DNA模板產生互補的熒光雙鏈引物，然后再通過PCR技術進行巢式擴增，目的是能夠使后來加入的熒光雙鏈引物中的一條鏈與之前擴增的模板單鏈DNA重新進行堿基配對成為一條新的雙鏈DNA分子，這樣原來的熒光雙鏈DNA引物的雙鏈結構就遭到了破壞，其雙鏈發生分離，就會阻斷了原來的傳遞熒光能量的通道，再來通過專業的分析儀器來測定熒光信號的強度所發生的變化，這樣就能夠測得樣品中的模板HBV-DNA含量是多少了。

1.2.2HBV-DNA進行定量測定的基本原理。選擇AG-9600Am-plisensor的熒光定量PCR擴增系統，它的基本的原理就是能夠通過測定熒光能量發生的轉移來對DNA分子進行定量的分析。

1.2.3測定范圍。

1.2.4將得到的結果用lg copies/ml來表示。

1.2.5將得到的數據進行統計分析。用χ±s來表示母嬰的HBV-DNA的定量數據，用線性回歸的方法對母嬰間的相關性進行分析和檢驗，應用t檢驗來比較組間的均數，應用X檢驗的方法來對組與組之間的乙肝宮內傳染率進行比較；用相關的統計軟件來進行數據處理。

2對結果進行分析

2.1測的不同HBV血清學標志的孕婦血清中的HBV-DNA含量。在41名“大三陽”孕婦組中，患者的血清中所含的HBV-DNA數量在6.00-9.90之間，它的平均數是7.57±1.27；在65名“小三陽”孕婦組中，患者的血清中含有的HBV-DNA的數量量范圍小于2.00-6.25，測的它的平均數是4.13±1.64；在16名單一的HBcAb陽性孕婦組中，測的孕婦血清中的含HBV-DNA的數量小于2.00-4.71，測得平均數是3.17±1.54.綜合三者的結果可以得出結論，孕婦的血清中含有的HBV-DNA的數的量變化與孕婦的血清中HBV的血清學標志的變化是一致的。

2.2測定母嬰HBV-DNA的相關性。在41名“大三陽”孕婦組中，患者的血清中測定的HBV-DNA的平均數是7.57±1.27，同時測得改組的嬰兒的血清中含的HBV-DNA量的平均數是4.81±1.62；在65名“小三陽”孕婦組中，患者的血清中含有的HBV-DNA的量的平均數是4.13±1.64，同時測的改組的嬰兒的血清中含有HBV-DNA量的平均數是3.01±1.30；在16名血清中單一的HBcAb陽性的孕婦組中，患者的血清中含有的HBV-DNA量的平均數是3.17±1.54，同時測得改組的嬰兒的血清中含有的HBV-DNA量的平均數小于2.0.利用直線回歸方法進行分析，可以知道母嬰血清中HBV-DNA含量的測定值之間是正相關（r=0.351，p<0.01）關系的，嬰兒血清中的HBV-DNA的含量的測定值會隨著其母親體內血清中的HBV-DNA含量的測定值的增加相應增加（p<0.01）。分析孕婦血清HBV-DNA測定數值是否與母嬰之間HBV傳播存在關系。在不同的組之間比較三組母嬰血清中的HBV-DNA含量的測定值，并且記錄測定的結果，見表1。