反相高效液相色譜法測定柑橘中磺胺二甲基嘧啶

摘要：建立了用反相高效液相色譜測定柑橘中磺胺二甲基嘧啶的方法。結果表明，磺胺二甲基嘧啶能得到較好地分離，用外標法定量，在０．８～１５．０ μｇ／ｍＬ范圍內與峰面積成良好線性關系，相關系數為０．９９９ ０，檢測限為１２．６ ｎｇ／ｍＬ，方法可用于柑橘中磺胺二甲基嘧啶的測定。

關鍵詞：反相高效液相色譜；柑橘；磺胺二甲基嘧啶

中圖分類號：Ｏ６５７．１７＋２ 文獻標識碼：Ａ 文章編號：0439－８114（２０12）07－1456-02

Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｕｌｆａｍｅｔｈａｚｉｎe ｉｎ Ｃｉｔｒｕｓ ｂｙ Ｒｅｖｅｒｓｅｄ Ｐｈａｓｅ Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ

Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ

ＪＩＡＮＧ Ｚｈｏｎｇ－ｙｕａｎ，ＺＨＡＮＧ Ｙｕ－ｌｅ，ＺＥＮＧ Ｑｉ－ｈｕａ

（Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ， Ｚｕｎｙｉ Ｎｏｒｍａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ， Ｚｕｎｙｉ ５６３００２， Ｇｕｉｚｈｏｕ，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ａ ｒｅｖｅｒｓｅｄ ｐｈａｓｅ ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＲＰ－ＨＰＬＣ） ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓｕｌｆａｍｅｔｈａｚｉｎe ｗａｓ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ． Ｅｘｔｅｒｎａｌ ｓｔａｎｄａｒｄ method ｗａｓ ｕｓｅｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ ｃｕｒｖｅｓ ｓｈｏｗｅｄ ｇｏｏｄ ｌｉｎｅａｒｉｔｙ ｏｖｅｒ ｔｈｅ ｒａｎｇｅ ｏｆ ０．８～１５．０ μｇ／ｍＬ（r＝０．９９９ ０） ｆｏｒ ｓｕｌｆａｍｅｔｈａｚｉｎe． Ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｌｉｍｉｔ ｗas １２．６ ｎｇ／ｍＬ ｆｏｒ ｓｕｌｆａｍｅｔｈａｚｉｎe． Ｆｉｎａｌｌｙ ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ａｐｐｌｉｅｄ ｆｏｒ ｓｅｐａｒａｔｉｎｇ ａｎｄ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｓｕｌｆａｍｅｔｈａｚｉｎｎｕｍ ｉｎ ｃｉｔｒｕｓ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｒｅｖｅｒｓｅｄ ｐｈａｓｅ ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＲＰ－ＨＰＬＣ）； ｃｉｔｒｕｓ； ｓｕｌｆａｍｅｔｈａｚｉｎe

隨著現代醫藥科學的不斷發展，在畜、禽、牧、水產及農產品等領域應用藥物對動物進行預防疾病和治療，以及促動物生長、提高飼料轉化率等方面日益普遍。磺胺二甲基嘧啶（Sｕｌｆａｍｅｔｈａｚｉｎe，ＳＭ２）是抗感染藥劑，它是畜牧生產中應用最廣泛的磺胺類藥物之一。磺胺二甲基嘧啶具有抗菌力強、毒性小、吸收迅速完全，在畜禽及農產品體內藥效持續時間長等特點。但過量的藥物殘留會損害人體健康，已發現磺胺二甲基嘧啶可誘發嚙齒動物甲狀腺增生或腫瘤［１］。近年來也有將此藥物用于蔬菜、水果中進行殺菌的報道。

目前，磺胺類藥物常用的檢測方法為ＨＰＬＣ法［２－１１］，主要用于動物性食品中的檢測，但果蔬中磺胺二甲基嘧啶的檢測尚未見報道。本研究采用超聲提取，反相高效液相色譜法測定了柑橘中磺胺二甲基嘧啶的殘留量。該方法簡便、快速、前處理過程簡單、重現性好、方法的準確度和靈敏度均符合農藥殘留檢測要求，且費用較低，適合作為一種常規的殘留檢測方法。

１ 材料與方法

１．１ 儀器

ＬＣ－２０ＡＴ高效液相色譜儀（日本島津公司）， 配備ＳＰＤＭ－２０Ａ檢測器、ＳＩＬ－２０Ａ自動進樣器、ＣＢＭ－２０Ａ系統控制器；電子天平（上海越平科學儀器有限公司）；微孔過濾裝置（北京萊伯泰科學儀器有限公司）；ＳＹ３２００超聲波清洗器（上海聲源超聲波儀器設備有限公司）；ＤＨＧ－９０７０Ａ型新型電熱恒溫鼓風干燥箱（寧波江南儀器廠）；０４１２－１離心機（上海分析機械廠）。

１．２ 試劑

磺胺二甲基嘧啶（１００ μｇ／ｍＬ，農業部環境保護科研檢測所）；無水硫酸鈉；甲醇（分析純）；乙腈（色譜純）；去離子水。所有溶液使用前均由０．４５ μｍ孔徑的濾膜過濾。

１．３ 色譜條件

檢測波長：２７０ ｎｍ；色譜柱：Ｓｈｉｍ－ｐａｃｋ ＶＰ－ＯＤＳ（２５０ ｍｍ×４．６ ｍｍ， 日本島津公司）；流動相：甲醇∶乙腈∶水（含２％乙酸）＝１５∶１５∶７０；流速：０．６ ｍＬ／ｍｉｎ；柱溫：２５ ℃；進樣量：２０ μＬ。

１．４ 樣品溶液的配制

標準儲備液的配制：取１ ｍＬ磺胺二甲基嘧啶（１００ μｇ／ｍＬ）的標準溶液置于２５ ｍＬ的容量瓶中，用２５％甲醇定容至刻度，制成濃度為４ μｇ／ｍＬ的標準儲備液。

標準使用液的配制：用４ μｇ／ｍＬ的標準儲備液配制標準使用液系列，用流動相定容至刻度，使其成為一系列的標準使用液。

１．５ 提取和凈化

準確稱取經搗碎柑橘汁液１０．０００ ０ ｇ，置于５０ ｍＬ棕色容量瓶中，加入３０ ｍＬ提取液（０．１ ｍｏｌ／Ｌ的鹽酸溶液∶甲醇＝３∶７），將容量瓶置于超聲波儀器中超聲提取３０ ｍｉｎ，搖勻，用提取液定容至刻度。再加入２ ｇ無水硫酸鈉，２ ０００ ｒ／ｍｉｎ離心２ ｍｉｎ，取上清液過０．４５ μｍ有機濾膜待測。

２ 結果與分析

２．１ 吸收波長的選擇

利用二極管陣列檢測器掃描磺胺二甲基嘧啶標準溶液，得到磺胺二甲基嘧啶的最大吸光度出現在２７０ ｎｍ處，且樣品中雜質在該波長時對測定無影響，且色譜峰形較好。因此，選擇２７０ ｎｍ作為最適檢測波長。

２．２ 流速的影響

隨著流速增加，各峰的保留時間均減少，在０．４～０．８ ｍＬ／ｍｉｎ均能很好分離，但流速在０．５ ｍＬ／ｍｉｎ以下時，色譜峰逐漸擴展，檢測靈敏度下降。流速在０．６ ｍＬ／ｍｉｎ以上時，磺胺二甲基嘧啶峰與相鄰峰重疊，分離度下降。因此選擇流速為０．６ ｍＬ／ｍｉｎ。

２．３ 線性方程和檢出限

用配制的系列磺胺二甲基嘧啶標準溶液在０．８～１５．０ μｇ/ｍＬ濃度范圍內在上述色譜條件下進行測定，得到線性方程為ｙ＝１．３３０×１０４ｘ－４．０２４，Ｒ２＝０．９９９ ０。以７份樣品分析結果的標準偏差的３倍計算，方法的檢出限為１２．６ ｎｇ／ｍＬ。磺胺二甲基嘧啶標準色譜圖見圖１。

２．４ 方法的精密度和回收率

在選定的色譜條件下進行樣品添加回收試驗，取柑橘樣品３份，按０．１０、０．５０和１．００ ｍｇ／ｋｇ ３個添加水平進行回收試驗，計算回收率和相對標準偏差（表１）。

２．５ 實際樣品測定

應用本方法對市場上購買的１８個柑橘樣品進行分析，結果表明， ６個樣品中檢出磺胺二甲基嘧啶， 含量在１．２５～３．７８ μｇ／ｋｇ之間。柑橘樣品色譜圖見圖２。

３ 結論

建立了符合農藥殘留分析要求的柑橘中的磺胺二甲基嘧啶殘留的分析方法，本方法簡單、快速，具有很高的靈敏度與精密度，重現性好，回收率穩定。

參考文獻：

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