預灌封注射器密封系統完整性研究

摘 要 目的：通過微生物侵入挑戰性試驗，確認采用預灌封注射器包裝的小容量注射劑產品的密封完整性。方法：按無菌生產要求在預灌封注射器內灌裝胰胨大豆肉湯培養基，培養14 d后，置于大腸埃希菌菌懸液中浸泡4 h。浸泡后樣品繼續培養7 d，觀察細菌侵入情況。結果：培養7 d后，注射器內培養基均無細菌生長。結論：預灌封注射器密封系統能滿足密封完好性的要求，可保證產品不受細菌侵入。

關鍵詞 預灌封注射器 細菌侵入 密封系統

中圖分類號：TQ469; R944.1 文獻標識碼：B 文章編號：1006-1533(2012)07-0036-02

Study on the integrity of the prefilled syringes with sealing system

FAN Su-jun，XIA Jie-min

（Shanghai Haohai Biological Technology Co.， Ltd.， Shanghai， 201613）

ABSTRACT Objective: Seal integrity of the prefilled syringes containing small volume of injection product was confirmed by the bacterial challenging test. Methods: According to production requirements， the pre-casting sterile syringe filling trypticase soy broth was incubated for 14 days， soaked in a suspension containing Escherichia coli for 4 hours. Bacterial contamination was observed after samples were incubated for 7 days. Results: The syringes were not contaminated by the tested E.coli. Conclusion: Prefilled syringes with sealing system can meet the requirements of integrity and protect the products from bacterial invasion.

KEY WORDS prefilled syringes; bacterial invasion; integrity

預灌封注射器是國內外20世紀90年代開發的一種新型藥品包裝形式，主要用于小容量注射劑的包裝儲存并直接用于注射或用于眼科、耳科、骨科等手術沖洗。預灌封注射器由玻璃針管（中性玻璃）、活塞（鹵化丁基橡膠）、針帽（異戊丁基橡膠）、推桿（PS）和/或注射針組成(圖1)。

藥液直接裝入針管內，通過活塞將藥液密封儲存，使用時用推桿推出。對于無菌產品，抽樣檢驗的無菌檢查存在的局限性是很明顯的[1]，從統計學上說，一個陽性的無菌測試結果不是結論性的；同樣，陰性的無菌測試結果并不證明封閉體系已起到了它應起的作用[2]。預灌封注射器密封系統的完好性，有必要通過細菌侵入挑戰性試驗，確認密封性的完整程度，防止細菌入侵以確保產品質量安全可靠[3]。

1 試驗材料與儀器

預灌封注射器（美國BD公司）；SV122V型全自動灌裝機（德國INOVA）；SHP-250型生化培養箱；胰胨大豆肉湯培養基（上海博微生物科技有限公司）；菌株：大腸埃希菌（Escherichia coli）（上海技標藥檢器材有限公司）。

2 方法與結果

2.1 試樣制備

選用胰胨大豆肉湯培養基，按每30 g加1 L純化水的比例配制，121 ℃20 min滅菌后無菌條件下灌封于預灌封注射器中。試樣先在較低溫度（20~25 ℃）下培養7 d，然后在較高溫度（30~35 ℃）下培養7 d[4，5]，無細菌生長且陽性對照符合要求后，進行細菌侵入挑戰性試驗。

2.2 挑戰菌懸浮液的制備

從大腸埃希菌[6]的新鮮斜面上取一整環培養物，分別接入含10 ml無菌胰胨大豆肉湯培養基的試管中，在30~35 ℃下靜止培養16~18 h，將每管的培養物分別接入含1 000 ml相同培養基的容器內，于30~35 ℃下培養22~24 h。在培養結束時，能明顯見容器內培養基出現渾濁。培養結束后的菌懸液即可用來做試驗。

2.3 細菌侵入挑戰性試驗

將經平板計數的新鮮菌懸液倒入合適的容器中，取50支灌裝試樣的預灌封注射器完全浸沒于上述高濃度（大于106個/ml）的菌懸液中持續浸泡4 h[6]。將預灌封注射器從容器中取出，擦干注射器外殘余菌懸液，然后用0.1%~0.2%洗必泰或新潔爾滅消毒劑消毒外表面。浸泡結束時，再用平板計數菌懸液的濃度，檢查活菌數，確認試驗的有效性。挑戰性試驗用菌懸液經滅菌后丟棄。

陽性對照：取未經菌懸液浸泡的裝有培養基的預灌封注射器兩個，接種入10~100 CFU/ml的大腸埃希菌并培養。陰性對照：另取已制備的不長菌的試樣2個，不經菌懸液浸泡，作陰性對照。將挑戰試驗用的試樣置30~35 ℃培養7 d。肉眼觀察細菌生長情況，如有細菌生長，需記錄長菌的試樣數，并進一步仔細檢查預灌封注射器膠塞和護帽是否由于傾斜或松動而造成細菌侵入。如挑戰試驗用的試樣均不長菌，則取10支試樣，接種大腸埃希菌后培養，確認培養基營養沒有問題。

2.4 結果

本試驗陽性對照均有細菌生長，陰性對照均無細菌生長，試驗樣品均無細菌生長，試樣培養基營養檢查均有細菌生長（表1）。以上結果說明本次試驗有效，預灌封注射器密封系統能滿足密封完好性的要求，可保證產品不受細菌的侵入。

3 討論

在細菌侵入挑戰性試驗中，陽性對照和陰性對照都合格，試樣挑戰試驗才有效。在挑戰試驗開始時，挑戰用菌懸液濃度（活菌數）必須達到1×106 CFU/ml。挑戰試樣中如有細菌生長，需記錄長菌的試樣數，并進一步鑒定確認生長菌為挑戰細菌——大腸埃希菌。如果任何挑戰試驗中長菌的預灌封注射器不是由于容器封口明顯的物理性缺損所致，則預灌封注射器密封系統挑戰試驗作失敗論處。

注射器包裝密封系統的完好性，直接影響產品的質量。為控制預灌封注射器密封完整性對產品質量的風險，應盡量采用符合國際通行標準的密封構件，防止為節約成本而隨意變更膠塞和針管的尺寸，從而增加泄漏風險；供應商需要定期審計，保證其質量穩定可靠；在密封系統的部件發生變更或灌封系統發生變更時，必須評估其對密封系統完整性的影響，必要時重新進行密封完整性驗證[6]。密封完整性驗證的方法除細菌侵入試驗法外，也可以通過飽和鹽水法測試密封性，或者通過亞甲基藍溶液法進行驗證[7]。對無菌制劑，注射器包裝密封系統的完好性，還影響著產品在貯存期內細菌侵入的風險。無菌產品有效期的確定，除了在藥物研發階段，進行影響因素試驗、加速試驗和長期留樣的穩定性試驗外，還應進行容器密封性挑戰試驗，以確保產品在有效期內達到無菌要求[8]。因此，在進行密封系統的細菌侵入挑戰性試驗時，在首次試驗成功的基礎上，還應多準備一些灌裝培養基的樣品，在與產品相同的貯存條件下貯存。在貯存一定時間間隔（如12、24、36和48個月等），取出部分樣品，按細菌侵入試驗操作步驟進行檢測，以確定預灌封注射器密封系統在貯存期內的有效性，為合理制定預灌封注射器包裝的產品有效期提供可靠保障。

參考文獻

[1] 霍秀敏.注射劑無菌安全存在的問題及對策思考[J].中國執業藥師，2009，6（10）：37-39.

[2] Carleton FJ， Agalloco JP. 無菌制藥工藝的驗證 [M].上海醫藥行業協會譯.上海：上海科學普及出版社，2000：399-400.

[3] 柯茂琴，張新.注射劑容器密封系統完整性研究[J].亞太傳統醫藥，2010，6(4)：154-155.

[4] 梁玉儀，梁勇坤，盧喆勝.注射劑車間無菌灌裝的驗證方法[J].中國藥業，2004，13（14）：25-26.

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[6] 張愛萍，孫咸澤. 藥品GMP指南——無菌藥品[M].北京：中國醫藥科技出版社，2011： 258-259.

[7] International Standard. ISO 11607-2 Packaging for terminally sterilized medical devices-Part 2:Validation requirements for forming， sealing， and assembly processes[S].Brussels:ISO， 2006.

[8] 霍秀敏.穩定性試驗與藥品的有效期[J].藥事管理，2007，4（1）：56-58.

（收稿日期：2012-01-19）