青蒿琥酯誘導食管癌Eca109細胞凋亡

劉 亮，左 靜，左連富*，郭建文

(河北醫科大學第四醫院1.腫瘤研究所流式細胞室，河北石家莊050011;2.腫瘤內科，河北石家莊050011)

食管癌是我國較常見的惡性腫瘤，尤其是河北省的磁縣，食管癌發病率及死亡率較高。抗腫瘤藥物較大的不良反應是導致化療效果下降的主要原因之一，尋找高效低毒的抗腫瘤藥物，是腫瘤學研究者長期從事的工作。中藥治療腫瘤已具有幾千年的歷史，具有低毒、價廉等優點。青蒿琥酯 (Artesunate，Art)化學名為二氫青蒿素-1，2-α-2琥珀酸單酯，是具有倍半萜結構的抗瘧藥青蒿素的衍生物之一，研究發現，青蒿琥酯除了具有抗瘧作用以外還具有抗腫瘤活性［1－2］，但在食管癌中的研究較少。本實驗主要研究青蒿琥酯誘導食管癌細胞凋亡的作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細胞系來源:人食管癌細胞系Eca109細胞為本實驗室傳代培養。

1.1.2 主要實驗儀器及試劑:Epics-XLⅡ型流式細胞儀 (Beckman-Coulter公司);BCL-2抗體(克隆號:sc-7480)及BAX抗體(克隆號:sc-7382)(Santa Cruz公司);青蒿琥酯(批號:ZA070802)(桂林南藥有限公司);胎牛血清(杭州四季青公司)。

1.2 方法

1.2.1 藥物干預實驗:取對數生長期的Eca109細胞以1×106/mL接種至細胞培養瓶中，待細胞貼壁后，加入不同濃度的青蒿琥酯，使終濃度分別達到10、20、40 mg/L，對照組使用0.9%氯化鈉代替青蒿琥酯，作用24 h后，收集細胞，PBS液洗滌2次，部分細胞70%乙醇固定放入4℃冰箱保存用于流式細胞術檢測，部分細胞用于Western blot檢測。每組實驗重復3次。

1.2.2 流式細胞術檢測細胞凋亡率及細胞周期:調整每份樣品的細胞數為1×106/100μL，加入50 mg/L PI染液1 mL，在4℃冰箱中染色30 min，上機檢測DNA含量。……