辛伐他汀對厄貝沙坦藥代動力學影響的研究

周霞瑾，齊惠珍，牛哲哲，王明霞，常 青

(1.河北醫科大學第四醫院藥劑科，河北石家莊 050011;2.河北醫科大學藥學院，河北 石家莊 050017)

辛伐他汀是HMG-CoA(羥甲基戊二酸單酰輔酶A)還原酶抑制劑，在體內被水解成β-羥基酸代謝物，可降低血總膽固醇和低密度脂蛋白水平。也可中度降低血三酰甘油和升高高密度脂蛋白水平，是臨床常用的調脂藥［1］。高血脂能導致血管結構和功能異常，使血管舒張功能損傷［2］，加重高血壓病的危害，降血脂已成為高血壓的防治原則之一。因此臨床上他汀類降脂藥常與厄貝沙坦等抗高血壓藥聯用。有關二者的相互作用目前多限于藥效學方面，而辛伐他汀對厄貝沙坦藥代動力學的影響，目前尚未見報道，值得我們深入探討。文獻報道，辛伐他汀在肝臟主要經CYP3A4代謝［3］，厄貝沙坦則主要經CYP2C9代謝，幾乎不經CYP3A4代謝［4］。二者雖經不同酶代謝，但藥物代謝酶的作用機制非常復雜。本課題研究了新西蘭大白兔灌胃服用辛伐他汀不同時間后對厄貝沙坦的藥代動力學的影響，旨在為臨床藥物相互作用提供理論參考。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 Waters高效液相色譜儀，515泵，474熒光檢測器，Empower色譜數據工作站;ZH-2渦旋混合器(天津藥典標準儀器廠);800型離心機(上海分析儀器廠);梅特勒AE240電子分析天平(瑞士);SANYO低溫冰箱。

1.2 藥品和試劑 替米沙坦標準對照品(美國Sigma-Aidrich公司，Lot No T-8949);厄貝沙坦標準對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:100607-200301)，乙腈為色譜純，乙醚、二氯甲烷、磷酸為分析純，試驗用水為多效蒸餾水。羧甲基纖維素CMCS(天津市光復精細化工研究所批號:20050815，化學純)，辛伐他汀片(杭州默沙東制藥有限公司，批號:100292，規格:20 mg/片)，厄貝沙坦片［賽諾菲安萬特(杭州)制藥有限公司，批號:0A020，規格:0.15 g/片］。

1.3 動物 新西蘭大白兔24只，均為♂，體質量2.5～3 kg，購于河北醫科大學動物中心，動物合格證號為709198。

2 方法

2.1 動物處置 每只籠子裝1只新西蘭大白兔，稱重，編號，進入動物室，經1周適應性飼養后，隨機分為4組，分別為:3 d對照組、5 d對照組、辛伐他汀(5 mg·kg-1)誘導3 d組和辛伐他汀(5 mg·kg-1)誘導5 d組，每組6只。

3 d對照組:1～3 d每天1次灌胃給予2%羧甲基纖維素溶液，于d 4早8:00灌胃給予厄貝沙坦(50 mg·kg-1)的2%羧甲基纖維素溶液。

5 d對照組:1～5 d每天1次灌胃給予2%羧甲基纖維素溶液，于d 6早8:00灌胃給予厄貝沙坦(50 mg·kg-1)的2%羧甲基纖維素溶液。

辛伐他汀誘導3 d組:1～3 d灌胃給予辛伐他汀(5 mg·kg-1，qd)的2%羧甲基纖維素溶液，于d 4早8:00灌胃給厄貝沙坦(50 mg·kg-1)的2%羧甲基纖維素溶液。

辛伐他汀誘導5 d組:1～5 d灌胃給予辛伐他汀(5 mg·kg-1，qd)的2%羧甲基纖維素溶液，于d 6早8:00灌胃給厄貝沙坦(50 mg·kg-1)的2%羧甲基纖維素溶液。

所有動物于灌胃給予厄貝沙坦的前1 d晚8:00開始禁食不禁水，所有藥物的給藥劑量按人/兔體質量的等效劑量換算。

2.2 取血方法 預先為動物置留置針，分別于給藥前和給藥后 0.25、0.5、1、1.5、2、3、5、7、9、12、24、36 h從新西蘭大白兔的耳中動脈取血2 ml，置肝素管中，3 000 r·min-1離心 10 min，取上清液，放入-80℃低溫冰箱保存，用于測定厄貝沙坦的濃度。

2.3 血漿樣品的處理 取血漿400 μl，置于10 ml具塞玻璃離心管中，精密加入內標工作液40 μl(5 mg·L-1)，渦旋混勻 15 s，加入 100 μl磷酸溶液(1 mol·L-1)，渦旋30 s，使其酸化，加入乙醚-二氯甲烷(7 ∶3)［5］混合液5 ml提取，渦旋振蕩5 min，離心(1 500 r·min-1)5 min，取有機層4.5 ml于潔凈干燥具塞玻璃離心管中，加入200 μl NaOH溶液(0.05 mol·L-1)，渦旋震蕩 3 min，離心(1 500 r·min-1)5 min，于-80℃低溫冰箱中冷凍15 min，棄去上層未凍有機相，待下層融化后，用微量取樣器取150 μl于1 ml的 Ephendroff管中，加入 100 μl磷酸溶液(0.2 mol·L-1)酸化，渦旋混勻 30 s，進樣 50 μl分析。

2.4 色譜條件 色譜柱:Diamonsil C18柱(4.6 mm×200 mm，5 μm)，流動相:水 - 乙腈(57 ∶43)，三乙胺0.1%，磷酸調 pH為 3.00，流速:1.0 ml·min-1，柱溫:室溫;熒光檢測波長:激發波長為254 nm，發射波長為 371 nm［6］;內標物:替米沙坦;進樣量:50 μl;該色譜條件下替米沙坦和厄貝沙坦的保留時間分別為4.2 min和6.0 min，分離效果良好，空白血漿的內源性物質對藥物和內標物無干擾。

2.5 藥代動力學分析

2.5.1 分析軟件和方法 每只新西蘭大白兔的血漿厄貝沙坦濃度值均用DAS version 3.0(Bontz Inc.，Beijing，China)藥代動力學軟件進行智能化數據處理，模擬血藥濃度-時間曲線，并計算非房室模型統計矩參數。Cmax和Tmax為實測值。

2.5.2 數據處理和統計分析 統計分析采用SPSS13.0軟件，計量資料采用±s，多組比較采用ANOVA，P＜0.05時，再用 Dunnett檢驗;Tmax采用秩和檢驗。

3 結果

3.1 各組的平均血藥濃度－時間曲線 見Fig 1和Fig 2。

Fig 1 Mean plasma concentration-time curve of irbesartan in the control and simvastatin(5 mg·kg－1for 3 days)group(±s，n=6)

Fig 2 Mean plasma concentration-time curve of irbesartan in the control and simvastatin(5 mg·kg－1for 5 days)group(±s，n=6)

Tab 1 Mean noncompartment model's pharmacokinetic parameters of irbesartan after oral administration in the four groups(ig，50 mg·kg-1)(±s，n=6)

Tab 1 Mean noncompartment model's pharmacokinetic parameters of irbesartan after oral administration in the four groups(ig，50 mg·kg-1)(±s，n=6)

*P＜0.05 vs control;#P＜0.05 vs simvastatin for 3 d group

Parameter Control(3 d)Simvastatin(5 mg·kg-1for 3 d)Control(5 d)Simvastatin(5 mg·kg-1for 5 d)V/L·kg-1 68.07±24.46 31.41±18.84 68.10±49.56 29.21±20.25 T 12/h 4.37±1.09 6.36±5.70 4.52±2.05 10.53±5.40 Lambda-z/h-1 0.19±0.11 0.20±0.17 0.19±0.11 0.08±0.04 C-last/mg·L-1 0.03±0.03 1.55±3.51 0.03±0.04 0.75±1.14 MRT(0-36)/h 5.09±1.42 5.18±3.58 5.14±1.35 8.83±2.85*#MRT(0-∞)/h 6.04±1.34 7.80±5.65 6.13±1.62 18.94±9.66*#AUC(0-36)/mg·h·L-1 10.03±4.81 11.51±4.81 9.88±9.07 22.65±8.59*#AUC(0-∞)/mg·h·L-1 11.94±5.67 15.43±7.44 10.23±8.99 31.63±14.09*#CL/L·kg-1h-1 10.53±5.29 4.00±1.98 11.48±8.37 1.77±0.53*#Tmax/h 1.33±0.21 1.61±1.14 1.34±0.22 0.83±0.26 Cmax/mg·L-1 2.35±2.18 3.14±0.92 2.38±2.56 6.35±3.50*#

3.2 藥代參數 各組的血藥濃度-時間數據經DAS 3.0軟件處理后的非房室模型統計矩參數見Tab 1。

經單因素方差分析，辛伐他汀誘導3 d組與對照組比較，厄貝沙坦的主要藥動學參數差異無統計學意義;辛伐他汀誘導5 d組的藥代動力學參數，與對照組比較有統計學差異(P＜0.05)，AUC(0-36)、AUC(0-∞)、MRT(0-36)、MRT(0-∞)和Cmax均升高 (P＜0.05)，而CL降低(P＜0.05);辛伐他汀誘導5 d組與3 d組相比，厄貝沙坦的主要藥代動力學參數差異有 顯 著 性 (P＜ 0.05)，AUC(0-36)、AUC(0-∞)、MRT(0-36)、MRT(0-∞)和Cmax均升高(P＜0.05)，而 CL降低(P＜0.05)，各組Tmax變化不大，經秩和檢驗差異無統計學意義。

4 討論

文獻報道，家兔取血多采用耳緣靜脈取血和心臟取血。我們實驗中發現，由于藥代動力學研究中口服給藥吸收相的取血點相對密集，耳緣靜脈血難以滿足要求的取血量。而心臟取血因不能連續取血，不適用于藥動學研究。本實驗中，我們采用在兔耳中動脈埋留置針取血，方法方便、快捷，血量充足，能滿足大多數藥代動力學的研究。

在本實驗中，經辛伐他汀(5 mg·kg-1)誘導5 d 后，厄貝沙坦的 AUC(0-36)、AUC(0-∞)和Cmax均升高，清除率CL則由11.487±8.367降為1.773±0.531，減少了約5倍，具有統計學意義(P＜0.05)，表明辛伐他汀對厄貝沙坦的清除率亦具有明顯影響。而且厄貝沙坦的體內滯留時間MRT亦延長(P＜0.05)，與AUC升高、CL減少一致。辛伐他汀是CYP3A4的特異性底物［3］，而厄貝沙坦主要經CYP2C9氧化，幾乎不被 CYP3A4代謝［4］。因此我們認為辛伐他汀對厄貝沙坦藥代動力學的明顯影響應與CYP2C9無關，而可能涉及CYP3A酶和P-糖蛋白。

眾所周知 P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)是人體藥物處置中最重要的藥物轉運體，它可利用ATP水解釋放的能量將作用底物從細胞內轉運至細胞外。在人體正常組織肝臟、腎臟、腸道、胎盤、血腦屏障、血睪屏障以及淋巴細胞系和心臟內小動脈、毛細血管等部位都有分布。P-gp在人體正常組織內的分布以及對藥物的逆向轉運功能使得P-gp在藥物的吸收、分布、代謝和清除方面具有重要意義［7］。

P-gp的作用底物范圍非常廣泛，底物的親脂性可能是決定它與P-gp結合的最重要參數。厄貝沙坦的脂溶性決定其可能為P-gp底物。Bourrié等［8］在研究中首先發現厄貝沙坦是P-gp的底物。Weiss等［9］在研究血管緊張素受體Ⅰ拮抗劑與ATP結合轉運體的相互作用時，也發現厄貝沙坦對P-gp有弱抑制作用。

已知P-gp和CYP3A4的底物有重疊，辛伐他汀是CYP3A4的底物。Bogman等［10］證實他汀類如辛伐他汀、阿托伐他汀和洛伐他汀在高濃度時抑制P-gp。Wang等［11］也證實辛伐他汀、洛伐他汀和阿托伐他汀直接抑制P-gp。Sieczkowski等［12］發現辛伐他汀可能通過損壞P-gp的糖基化而抑制P-gp的功能，并且損壞程度隨使用時間延長而增加，與本實驗結果一致。即與辛伐他汀誘導3 d組比，辛伐他汀誘導5 d組影響厄貝沙坦的藥代動力學。

綜上所述，辛伐他汀對厄貝沙坦藥代動力學的影響可能與辛伐他汀和厄貝沙坦同為藥物轉運體P-gp的抑制劑有關，二者競爭性抑制P-gp，從而引起厄貝沙坦藥動學參數的改變。有關辛伐他汀對厄貝沙坦的藥代動力學影響的P-gp作用機制有待今后做進一步研究。

總之，本研究結果顯示，辛伐他汀誘導5 d后對兔體內厄貝沙坦的主要藥代動力學參數有明顯影響，其影響機制可能與P-gp有關。

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