抗腫瘤藥物HDZ126016的制劑處方前研究

張建明，任筱青，王 科，沙先誼，方曉玲＊

（1.復旦大學藥學院藥劑學教研室，上海201203；2.上海交通大學醫學院附屬上海精神衛生中心藥劑科，上海201108）

［本文編輯］陽凌燕

惡性腫瘤是威脅人類健康的嚴重疾病。隨著環境污染的日益嚴重和人類生存環境的惡化，癌癥對人類的威脅正在加劇，抗腫瘤藥物的研究意義重大。索拉菲尼（sorafenib）是一種多激酶抑制劑，能夠通過抑制血管內皮生長因子受體而阻斷腫瘤新生血管的形成，間接抑制腫瘤細胞的生長。雖然索拉菲尼能顯著延長晚期肝癌病人生存期［1］，但是研究表明其對大鼠和兔具有致突變性和生殖毒性。因此，基于索拉菲尼結構改造的新藥創制成為當前的研究熱點。HDZ126016是對索拉菲尼進行結構改造而合成的一個新型蛋白激酶抑制劑類抗腫瘤藥物。藥效學研究表明，HDZ126016活性大于索拉菲尼，且毒副作用較低，開發前景廣闊?？紤]到片劑具有很多優點，從實際角度出發，將新化合物HDZ126016制成片劑有很大的可行性。本研究旨在對抗腫瘤藥物HDZ126016進行處方前研究，為其制劑研究提供理論依據。

1 儀器和試藥

1.1 儀器 LC－10AT 高效液相色譜儀，SPD－10A型紫外可見波長檢測器（日本島津株式會社）；XW－80A渦旋混合器（上海醫科大學儀器廠）；BS 210型電子分析天平（德國賽多利斯天平公司）；DSHZ－300多用途水浴恒溫振蕩器（江蘇太倉市實驗設備廠）；TGL－16G臺式離心機（上海安亭科學儀器廠）；DL－360超聲儀（浙江海天電子儀器廠）；Eppendorf離心管（廣州雷得生物技術有限公司）。

1.2 試藥 HDZ126016原料（山東醫藥工業研究院提供，純度99.50%），HDZ126016對照品（復旦大學藥學院藥劑學教研室自制，純度99.90%）；乙腈［色譜純，沃凱（中國）公司］；甲醇、正辛醇、二甲基亞砜（DMSO）、濃鹽酸、磷酸二氫鉀、枸櫞酸、磷酸氫二鈉、十二烷基硫酸鈉（SDS）、聚山梨酯80（吐溫80）均為分析純（國藥集團化學試劑有限公司）；實驗用水為雙蒸水；其他試劑均為市售分析純。

2 方法和結果

2.1 藥物HDZ126016體外分析方法的建立

2.1.1 溶液配制 精密稱取HDZ126016對照品適量，加乙腈溶解，在 DL－360超聲儀中超聲10min，確保樣品完全溶解，得到HDZ126016儲備液；再用流動相稀釋至所需濃度，得到HDZ126016溶液。

2.1.2 色譜條件色譜柱：XtimateTM C18柱（250mm×4.6mm，5 μm）；流動相為乙腈－10mmol／L磷酸二氫鉀（用三乙胺調節pH至7.5）＝60∶40；流速：1.0ml／min；柱溫：40℃；進樣量：20μl；檢測波長：250nm。在該條件下，藥品色譜行為良好（見圖1）。

圖1 HDZ126016的HPLC譜圖Figure 1 HPLC photograms of HDZ126016

2.1.3 標準曲線的制備 精密稱取 HDZ126016對照品50mg，用乙腈配制成濃度為500μg／ml的標準儲備液，再用流動相稀釋成濃度為0.05、0.1、0.5、1、5和10μg／ml的標準溶液，于2.1.2項下色譜條件測定，記錄色譜圖，重復3次。將HDZ126016色譜峰面積（A）對濃度（c）按最小二乘法進行線性回歸，得線性方程：A＝83 686c＋2 713.7，r＝0.999 9（n＝3）。結果表明，HDZ126016在0.05～10μg／ml濃度范圍內，色譜峰面積（A）與濃度（c）呈良好的線性關系。

2.1.4 精密度實驗 分別配制低、中、高（0.1、5、10μg／ml）3種濃度的 HDZ126016對照品溶液，分別連續進樣3次，記錄色譜圖，計算峰面積的RSD值分別為4.5%、0.51%、0.81%（n＝3），表明精密度符合分析要求。

2.1.5 回收率實驗 分別精密稱取 HDZ126016原料藥約2mg于10ml量瓶中，分別精密加入HDZ126016對照品2、3、4mg，各3份，以乙腈稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述溶液各1ml分別置100ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，得低、中、高濃度的供試品溶液，取20μl進樣，記錄色譜圖。另精密稱取HDZ126016對照品適量，以2.1.1項下方法制備成濃度為5μg／ml的溶液為對照品溶液，取20μl進樣，記錄色譜圖，外標法以峰面積計算各樣品的檢出量，計算回收率。結果HDZ126016低、中、高3種濃度的平均回收率分別為100.4%、99.77%、99.94%，RSD 分 別 為0.96%、1.08%、0.91%（n＝3）?？梢娫摲椒ǖ臏蚀_性滿足含量測定的要求。

2.1.6 穩定性實驗 精密稱取HDZ126016原料藥5mg置10ml量瓶中，加乙腈適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取該溶液1ml至100ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，得濃度約為5μg／ml的供試品溶液，并于0、1、2、4、6、8、10、12、24h分別按含量檢測方法進樣測定，記錄色譜圖，計算RSD為0.46%（n＝9）。結果表明供試品溶液在24h內基本穩定。

2.2 HDZ126016基本理化性質的研究

2.2.1 性狀考察 將HDZ126016原料藥粉末平鋪于表面皿中，肉眼觀察它的基本性狀，進行性狀評價，并進行溶解度實驗。結果表明，HDZ126016為白色粉末狀，無臭，味微苦。HDZ126016在乙腈和DMSO中易溶，在甲醇中微溶，在水中難溶。

2.2.2 不同條件下油水分配系數的測定 分別配制0.1mol／L鹽酸溶液和pH 值分別為4.0、5.0、6.8、7.4的磷酸鹽緩沖液，分別加入適量的正辛醇，在37℃恒溫水浴振蕩24h，充分飽和。稱取適量HDZ126016原料藥溶于經蒸餾水飽和的正辛醇中，使其溶解，配制成2mg／ml的溶液。取2ml分別與10ml上述pH值的水溶液混合，37℃恒溫水浴振蕩48h后，分別取出水相和油相，稀釋到適當濃度后，用2.1.2項方法測定HDZ126016的含量，按下列公式計算表觀油水分配系數（P）［2，3］：P＝c正辛醇／c水，c正辛醇和c水分別表示正辛醇和水相中HDZ126016的濃度。HDZ126016的表觀油水分配系數測定結果見表1，表明該藥脂溶性較好。當pH值≤5.0時，HDZ126016的油水分配系數（logP）值隨pH值增大而增大，當pH值＞5.0時，logP值隨pH值增大而減小。

表1 不同pH條件下HDZ126016的油水分配系數Table 1 Oil／water partition coefficients of HDZ126016 under the condition of different pH values

2.2.3 不同溶劑中飽和溶解度的測定 分別取適量過量的HDZ126016對照品于已標記好的4支1.5ml離心管中，分別加入1ml水、0.1mol／L鹽酸、乙醇和吐溫80，渦旋10s，超聲10min，放入水浴恒溫振蕩器中，于室溫振蕩平衡48h。48h后，將離心管從水浴中取出，20×g離心5min，取上清液用乙腈稀釋至適宜濃度后，按2.1.2項方法檢測HDZ126016的含量，分別計算HDZ126016在上述4種溶劑中的溶解度，結果分別為（3.19±0.29）×10－4、（8.84×10－3±0.50×10－4）、（38.01±0.30）和（27.20±0.23）mg／ml，表明 HDZ126016在水和0.1mol／L鹽酸中溶解度極小。

2.3 體外溶出介質的確定 從2.2項的實驗結果可知該化合物在水中的溶解度較低，故溶出介質的選擇是口服給藥制劑溶出實驗的關鍵。配制0.1mol／L鹽酸溶液，在溶液中分別加入0.1%吐溫80、0.5%吐溫80、0.1%SDS、0.5%SDS，再分別加入HDZ126016原料藥，充分溶解使溶液達到飽和，在室溫條件下振蕩48h。按2.1.2項方法進樣檢測，測定HDZ126016在這4種溶出介質中的溶解度，分 別 為（8.80±0.03）、（10.63±0.07）、（441.35±4.23）、（979.24±8.69）μg／ml。結果表明，HDZ126016在含0.5%SDS的0.1mol／L鹽酸溶液中溶解度最大，而且能夠滿足溶出測定時的漏槽條件，故選擇此溶液為體外溶出實驗的溶出介質。

3 討 論

從HDZ126016在不同溶劑中的溶解度可以判斷，HDZ126016與很多激酶抑制劑一樣，是一種水難溶性藥物。如果選擇注射給藥，則較難找到符合注射標準的溶劑系統。同時，在不同的pH條件下，HDZ126016的油水分配系數介于3～6，表明其親脂性較好，提示該藥的體內吸收情況可能較好。因此，可以考慮將HDZ126016制備成口服制劑。

難溶性藥物的口服制劑研制是藥劑學領域的一個熱點?？诜苿┰诘竭_生物膜被吸收之前，都需要經過溶出過程。難溶性藥物由于溶解度較小，因而其溶出速率也較?。?］。因此可以推斷，在HDZ126016口服制劑發揮藥效的過程中，溶出可能為限速步驟。為了增加HDZ126016的溶解性，作者在實驗中將其進行研磨，粉末過100目篩，該法可以在一定程度上增大藥物粉末的比表面積，以增加藥物的溶解度，促進藥物的溶出［4］。另外，為了保證溶出介質在溶出度實驗中達到漏槽狀態，本研究使用幾種表面活性劑增加HDZ126016在0.1mol／L鹽酸溶液中的溶解度。結果顯示，該藥在含0.5%SDS的0.1mol／L鹽酸溶液中溶解度顯著增加，0.5%SDS起到了較強的增溶作用，因此將含0.5%SDS的0.1mol／L鹽酸溶液確定為體外溶出介質。

［1］丁 健.抗腫瘤藥物的研究新進展［J］.中國新藥雜志，2000，9（3）：149－154.Ding Jian.New research approaches in anti－tumor drug［J］.Chin New Drugs J，2000，9（3）：149－154.Chinese with abstract in English.

［2］方大樹，胡思星，張 檢，等.羅格列酮油水分配系數的測定［J］.中國藥房，2010，21（5）：409－411.Fang DaShu，Hu SiXing，Zhang Jian，etal.Determination of oilwater partition coefficients of rosiglitazone［J］.China Pharmacy，2010，21（5）：409－411.Chinese with abstract in English.

［3］楊建宏，孫 磊，羅福國.頭孢氨芐溶解度及表觀油水分配系數測定［J］.中國抗生素雜志，2010，35（9）：S6－S8.Yang JianHong，Sun Lei，Luo FuGuo.Determination of equilibrium solubility of cefalexin in various medium and its apparent oil／water partition coefficient［J］.Chin J Antibiot，2010，35（9）：S6－S8.Chinese with title in English.

［4］江 波，印春華.提高難溶性藥物口服生物利用度的方法［J］.中國醫藥工業雜志，2002，33（7）：358－361.Jiang Bo，Yin ChunHua.Measures of improving oral bioavailability of water－insoluble drugs［J］.Chin J Pharmaceuticals，2002，33（7）：358－361.Chinese with abstract in English.