電項針干預對老年性癡呆大鼠5－HT及CHATmRNA的影響

霍 金，韓 數

(黑龍江中醫藥大學附屬第二醫院，黑龍江哈爾濱150001)

老年性癡呆(Senile Dementia)，即阿爾茨海默病(Alzheimer＇s disease，AD)是一種發生于老年前期或老年期，以進行性認知障礙和記憶能力損害為主的中樞神經系統退行性疾病。主要臨床表現為進行性認知功能障礙和記憶力減退、性格和行為改變、社交障礙、生活自理能力喪失，最終死亡。目前我國正逐漸步入老齡化社會，因而研究老年性癡呆的防治方法已成為社會迫切需要[1]。本實驗應用免疫組化及原位雜交法觀察電項針干預對AD大鼠海馬區5－hydroxytryptamine(5－HT)及乙酰膽堿轉移酶(CHATmRNA)的影響，探討電項針治療AD的作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

健康雄性Sprague－Dawley(SD)大鼠40只，體重(350±50)g，由黑龍江中醫藥大學動物實驗中心提供。按組編號分籠，自由飲水進食。

1.2 藥品及試劑

無水氯化鋁(天津市永大化學試劑開發中心)，D－半乳糖(上海源聚生物科技有限公司)，兔抗多克隆抗體(武漢博士德生物工程有限公司)。

1.3 主要實驗儀器

德國菜卡2135型切片機，美國moticam3000顯微攝影成像系統，上海一恒電熱恒溫箱，針灸針用華佗牌直徑0.40 mm、長25 mm無菌針灸針，電針采用DJ－6805型脈沖電針儀。

1.4 實驗方法

1.4.1 動物分組及造模方法

將40只大鼠隨機分為空白組、假損傷組、模型對照組、電項針治療組，每組10只。空白組給予常規飲水飼食;假損傷組給予常規飲食飼料，并胃飼及腹腔注射與模型對照組等容量之生理鹽水;模型對照組每只大鼠每日胃飼 20 mg·ml－1的 AlCl3水溶液 2 ml，腹腔注射D－半乳糖(48 mg·kg－1)，連續8周;電項針治療組造模處理同模型對照組。

1.4.2 治療方法

穴位與針具常規消毒，按照中國針灸學會學術部提供的大鼠穴位圖譜及比較解剖學取穴[2]，取大鼠項部雙側的“風池穴”、“供血穴”(頸4夾脊，深層布有椎動脈);使用0.40 mm×25 mm毫針直刺3 mm，后接DJ－6805型脈沖電針儀，導線分別上下連接針柄，正極連“風池穴”，負極連“供血穴”。采用疏密波，頻率為5～30 Hz，疏密周期6 s，強度以項部肌肉出現輕微抽動為度，持續刺激20 min，每日1次，每針刺6天，休息1天，連續治療4周。

空白組、假損傷組、模型對照組不進行針刺治療，4組同步飼養。

1.4.3 陽性表達分析

使用美國motica3000顯微攝影成像，于400倍鏡下選取海馬CA1－CA3區攝影，每組選取10例照片，在Motic image 3.2圖像分析軟件下進行分析，計算陽性表達的灰度平均值和平均光密度進行數據分析。

1.4.4 統計學處理

2 結果

2.1 電項針對AD大鼠5－HT活性的影響

模型對照組較空白組、假損傷組5－HT灰度平均值增高，平均光密度值下降(P＜0.05)，表明造模后5－HT陽性表達降低;電項針治療后較模型對照組5－HT灰度平均值降低，平均光密度值增高(P＜0.05)，說明5－HT陽性表達有所恢復。見表1、圖1。

表1 電項針對AD大鼠5－HT陽性表達的影響

圖1 各組大鼠海馬區5－HT的陽性表達

圖2 各組大鼠海馬區CHATmRNA的陽性表達

2.2 電項針對AD大鼠CHATmRNA的影響

模型對照組較空白組、假損傷組CHATmRNA灰度平均值增高，平均光密度值下降(P＜0.05)，表明造模后CHATmRNA陽性表達降低;電項針治療后較模型對照組CHATmRNA灰度平均值降低，平均光密度值增高(P＜0.05)，說明CHATmRNA陽性表達增強。見表2、圖2。

表2 電項針對AD大鼠CHATmRNA陽性表達的影響

3 討論

老年性癡呆常見的病因病機為年老體衰、腎精不足、痰瘀阻絡、髓海空虛，而其病性特點則以“本虛標實，督脈不通，瘀血阻脈”為要。督脈“起于下極之俞”，為元氣之源，“入絡腦”將臟腑精微輸注入腦，充溢腦髓，奉養元神，督脈不通則臟腑精微輸布受阻，髓海失養，元神失調，引起“善忘”、“失智”等癡呆病的典型表現。針對于此本實驗采用針刺雙側“風池穴”及“供血穴”，輔以電針儀的電項針療法治療本病。“風池穴”屬于足少陽膽經，其經筋在額角與陽蹺脈并行進行左右交叉，而陽蹺脈又從風府入腦，因此選取風池穴可使清陽得升，腦髓得補，其神自明[3]。“供血穴”為“新穴”，從其定位(風池穴下1.5寸，平下口唇處)上來說，足太陽、足少陽、督脈，三陽經皆縱貫與旁，而頭為“諸陽之會”，陽經皆上參入腦，因而供血穴對“脈絡瘀滯，髓海失養”所致的癡呆具有很好的治療效果。“風池穴”及“供血穴”位于督脈兩側，針刺兩穴符合“近部選穴”和“對癥選穴”的選穴原則，通過電針可促使督脈輸布順暢，精微上達髓海奉養元神，元神得養，則癡呆對腦造成的損害均可得到改善。

5－HT作為單胺類神經遞質，在腦內參與多種生理功能和病理狀態調節，并與情緒智能密切相關。有研究證實，大部分AD患者腦內伴有5－HT系統損害，在額葉5－HT含量僅為原有的39%[4]。CHAT為膽堿能神經元的標志酶，在中樞神經系統內參與合成Ach，也可作為Ach含量的間接指標及膽堿能標志[5]。大量實驗發現，AD患者常伴有膽堿能神經元缺失和變性，ChAT、AChE和Ach多功能在AD的發病中均有不同程度的損害[6]。在本實驗模型對照組中，5－HT及ChATmRNA在復合損傷造模后均出現陽性表達減弱，與空白組及假損傷組差異顯著(P＜0.05)。經過治療后，5－HT及ChATmRNA的陽性表達均有不同程度的增強，與模型對照組有明顯差異(P＜0.05)。

綜上所述，本實驗證明電項針治療能夠提高中樞單胺類神經遞質代謝，并通過增強CHAT的陽性表達改善AD大鼠海馬內膽堿能系統功能，從而發揮防治老年性癡呆的作用。

[1]陳可冀.老年性癡呆基礎和臨床研究進展思考[J].中國中西醫結合雜志，1998，18(6):324 －326

[2]包新民，舒斯云.大鼠腦立體定位圖譜[M].北京:人民衛生出版社，1991:44－45

[3]王麗娟，王亞麗.獨一味對小鼠學習記憶能力的影響[J].時珍國醫國藥，2009，20(7):1761 －1762

[4]馬滌輝，劉曉亮，張昱，等.實驗性Alzheimer模型鼠腦組織5－羥色胺含量改變的研究[J].中風與神經疾病雜志，1996，13(3):150

[5]Bisaglia M，Venezia V，Piccioli P，et al.Acetaminophen protects hipp－ocampal neurons and PC12 cultures from amyloid beta－peptides induced oxidative stress and reduces ChAT activation[J].Neurochem Int，2002，41(1):43 －54

[6]望廬山，周麗莎.電針治療對阿爾茨海默病大鼠Ach、ChAT、AchE的影響[J].針灸臨床雜志，2009，25(6):40－42