抗著絲點抗體在肝病患者中的檢測及其意義

馮 霞，閆惠平，劉燕敏，廖慧鈺，張海萍，馬胤雪

（首都醫科大學北京佑安醫院，北京100069）

自1980年首次發現抗著絲點抗體［1］（anti－centromere antibodies，ACA）ACA是系統性硬化癥局限性的標志性抗體。但隨著自身抗體檢測的普及和檢測水平的不斷提高，在其他疾病中也可檢出抗著絲點抗體，尤其是近年來我們發現在肝功能異常的患者中間常見到ACA陽性。為探討抗著絲點抗體在肝功異常患者中檢出情況及這部分患者的臨床及生化特征，收集10000例肝功異常患者的血清進行抗著絲點抗體檢測，現將結果報道如下。

1 材料與方法

1.1 血清采集 收集2004年7月－2008年7月住院肝功能異常患者10000例清晨空腹不抗凝血2 ml，離心后吸取血清，20℃冰箱保存。

1.2 間接免疫熒光法 （IFA，德國Eurolmmun公司試劑）檢測血清中抗核抗體（ANA）、抗線粒體抗體（AMA）、抗平滑肌抗體（S MA）抗細胞骨架抗體。采用HEp－2細胞和5種組織（猴肝臟和心肌組織、大鼠肝、腎和胃組織）的冰凍切片作為抗原，以生物薄片技術將帶有細胞和組織的6種切片組成一個反應區。待檢血清自1∶100起稀釋，與各種組織共同孵育30分鐘，加入異硫氰酸熒光素標記的抗體孵育30分鐘，洗片、封片后熒光顯微鏡下觀察結果。組織或細胞內出現特征性綠色熒光，血清稀釋度≥1∶100為陽性。

1.3 免疫印跡法檢測抗著絲點抗體 將各種高度純化的各種抗原平行包被于檢測膜條上，固定后，將膜置室溫孵育槽內，加入緩沖液震蕩孵育30分鐘，棄緩沖液，加入稀釋待檢血清，孵育震蕩30分鐘，洗片，加入ALP標記的第二抗體，再震蕩洗片，顯色。檢測膜條上出現藍紫色條帶為陽性，以試劑公司提供的陽性條帶位置標準圖判斷結果。

1.4 應用EL ISA法檢測各種肝炎病毒 （包括HAV、HBV、HCV、HDV、HEV、CMV、EBV）標記物。

1.5 應用全自動生物化學分析儀檢測 ALT、AST、TBil、DBil等肝功能指標及IgG、IgA、IgM。

1.6 診斷標準 PBC的診斷參照2000年美國肝病學會“PBC診斷治療指南”，AIH的診斷參照1999國際自身免疫性肝炎工作組制定的診斷標準，病毒性肝炎及肝硬化參照2000年病毒性肝炎防治指南。

1.7 統計學方法 計量資料正態分布采用均值±標準差表示，非正態分布計量資料以中位數M表示，采用配對秩和檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 肝病患者中抗著絲點抗體的檢出 10000例肝功異常患者血清中檢測出抗核抗體陽性、著絲點型134例，占1.34%。其中男性30例，女性104例，平均年齡55.73±14.16（16－86）。除 ACA以外，部分患者同時檢出伴有一種或兩種其他自身抗體，主要的比例分布見表1。

表1 ACA陽性患者的情況

2.2 臨床診斷

134例ACA陽性患者，診斷為硬化型肝病的有83例，包括PBC、PBC和AIH重疊癥、肝炎肝硬化以及原發性肝癌硬化型。診斷為非硬化型肝病的有51例，包括病毒性乙型肝炎、自身免疫性肝炎、藥物性肝炎和病毒性丙型肝炎等。其分布如表2。134例ACA陽性的患者中有83例的臨床診斷為肝硬化或肝硬化基礎上的進一步病變，86例ACA大于等于1：320的患者中，有61例患者有肝硬化的表現，合并滴度為1∶320和1∶1000的患者為ACA高滴度組，采用Pearson Chi－square檢驗，P＝0.004＜0.05，兩組的差異有顯著性意義，即ACA高滴度組患者肝硬化的發生率明顯高于低滴度組。

表2 ACA陽性患者的臨床診斷情況

2.3 實驗室檢查 134例患者按照抗著絲點抗體滴度分為2組：低滴度組（滴度1∶100）組和高滴度組（滴度大于等于1∶320）。兩組的實驗室檢查結果分別如表3。

3 討論

抗著絲點抗體是系統性硬化癥局限性（CREST綜合征）的診斷特異性抗體［2］。著絲點是細胞分裂期的重要結構之一，在細胞分裂前，兩條染色體單體通過著絲點相連在一起，在細胞分裂過程中，紡錘體纖維附著在著絲點包含的著絲粒上，將染色單體向他們相應的中心粒方向牽拉，平均分配到兩個子細胞中。抗著絲點抗體是針對著絲點結構相關蛋白而產生的自身抗體，它可分為三種不同的蛋白質：著絲點蛋白A（分子量17KD）、著絲點蛋白B（分子量80KD）和著絲點蛋白C（分子量140 KD）［3］，其中主要抗原為著絲點蛋白B，它能與含有各種著絲點抗體的血清起反應。采用蛋白質印跡法（免疫印跡法）檢測染色質提取物，發現其主要靶抗原為CENP－A、CENP－B、CENP－C。關于 ACA的致病機制目前并不清楚。然而，當ACA直接注入真核細胞時，對細胞分裂有明顯影響，從而提示CENP抗原在細胞周期中的重要作用。遺傳學研究發現［1］ACA陽性患者DQBl第一區域26位上疏水性亮氨酸殘基被谷氨酸或酪氨酸殘基替代，提示HLADQBl 26位上非亮氨酸殘基是產生ACA的必要條件。

表3 低滴度組和高滴度組生化指標比較

近年來，隨著對ACA研究的深入進行，發現也出現在PBC、SS、RA等其他的疾病中。王雪松等［4］報道，ACA陽性率在原發性膽汁性肝硬化（PBC）約為12.14%。閆惠平等研究表明［5］，大約50%PBC患者有ANA，以著絲點型、核膜型和核點型多見。本研究中，ACA在肝病患者中的檢出率約為1.34%。女性為主，占76.8%，高滴度的ACA中女性占到89.5%。ACA陽性患者多伴有其他自身抗體，以AMA、anti－SMA多見。ACA陽性不僅見于PBC，也可見于病毒性肝炎、酒精性肝肝硬化、藥物性肝炎等各種肝病中。但是高滴度的ACA多見于各種原因引起的肝硬化患者。

李玲等［6］報道，在SS患者，ACA陽性組肝損害頻率高于ACA陰性組，差異有顯著性，說明ACA與SS合并肝臟損害相關。我們的研究結果顯示，在肝病患者中，雖然ALT、AST在ACA高滴度組和ACA低滴度組沒有明顯的差別，但是ACA高滴度組AST／ALT比值的差別明顯高于ACA低滴度組，而ALB和PA明顯低于低滴度組，說明ACA高滴度組肝實質的損傷更為嚴重。進一步分析表明，ACA陽性組肝硬化的發生率較高，提示ACA與肝臟硬化有明顯的相關性，這一現象還未見報道。

總之，ACA在肝病患者中并不少見，ACA與肝硬化密切相關，提示臨床上患者出現ACA，尤其是高滴度的ACA時，應該考慮肝硬化的發生，予以高度重視。

［］Tan EM.Antiunclear antibodier in scleroderma［J］.Intern J Dermatol，1981，20：569.

［2］Yutaka Okano.Antiunclear antibody in systemic sclerosis［J］.Rheum Dis Clin N Am，1996，22（4）：709.

［3］Earmshaw W，Bordwell B，Marino C，et al.Three human chromosomal autoantigens are recognized by sera from patients with anticentromerere antibodies［J］.J Clin Invest，1986，77（2）：426.

［4］王雪松，李永哲.原發性膽汁性肝硬化自身抗體譜研究進展［J］.世界華人消化雜志，2006，14：245.

［5］閆惠平，莊 輝，劉燕敏，等.原發性膽汁性肝硬化患者的免疫學特點分析［J］.中華肝臟病雜志，2005，13：12.

［6］李 玲，張 烜，李永哲，等.抗著絲點抗體在干燥綜合癥中的臨床意義［J］.中華內科雜志，2004，43：778.