《中國藥典》、《美國藥典》和《英國藥典》注射用氫化可的松琥珀酸鈉質量控制標準與方法的比較*

張 瑩

(天津市藥品檢驗所，天津 300070)

氫化可的松琥珀酸鈉是腎上腺皮質激素類藥，具有抗炎、抗過敏和抑制免疫等多種藥理作用。目前，注射用氫化可的松琥珀酸鈉收載于《中國藥典》2010年版［1］、《美國藥典》35 版［2］和《英國藥典》2010年版［3］中。通過對三國藥典的比較，對于進一步完善和提高我國藥品質量標準具有指導意義，并指出下一步標準提高的方向。

1 2010年版《中國藥典》與2005年版《中國藥典》的比較

1.1 性狀 外觀描述同《中國藥典》2005年版二部原質量標準［1］，未做修訂。

1.2 鑒別 化學反應、高效液相色譜法及鈉鹽鑒別反應同《中國藥典》2005年二部原質量標準，方法未做修訂。

《中國藥典》2010年版增加了紅外光吸收圖譜鑒別［2］，標準規定樣品的紅外吸收圖譜應與對照的圖譜(光譜集994圖)一致。

1.3 檢查

1.3.1 堿度、溶液的顏色、干燥失重、異常毒性、無菌及其他項目檢查 均同《中國藥典》2005年二部原質量標準，方法未做修訂。

1.3.2 有關物質 《中國藥典》2005年二部原質量標準未制訂此項檢查，只控制游離氫化可的松的限度。由于氫化可的松琥珀酸鈉在合成中主要產物為21－氫化可的松琥珀酸鈉，但也不同程度地存在17－氫化可的松琥珀酸鈉和游離氫化可的松以及未知的其他有關物質，為此，《中國藥典》2010年版增加了有關物質檢查，色譜條件采用含量測定項下的色譜條件，限度規定按外標法以峰面積計算游離氫化可的松不得過標示量的3.0%，其他單個雜質峰面積不得大于對照溶液主峰面積的1/3(1.0%)，其他雜質峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積(3.0%)，該項目的增訂可進一步控制藥品的質量。

1.3.3 細菌內毒素 《中國藥典》2005年二部原標準為熱原檢查，根據有關規定將熱原檢查法修訂為細菌內毒素檢查，限值為每1 mg(以氫化可的松計)中含內毒素的量應小于0.30 EU。

1.4 含量測定 方法及含量限度同《中國藥典》2005年二部原標準，未做修訂，在色譜條件與系統適用性試驗中明確規定了氫化可的松琥珀酸鈉與17－氫化可的松琥珀酸鈉和游離氫化可的松間的相對保留時間，并且氫化可的松琥珀酸鈉峰與氫化可的松峰的分離度由原標準的1.5提高到4.0。見表1。

項目 《中國藥典》2005年版 《中國藥典》2010年版含量限度 含氫化可的松琥珀酸鈉按氫化可的松計算，應為標示量的90.0% ～110.0%含氫化可的松琥珀酸鈉按氫化可的松計算，應為標示量的90.0% ～110.0%性狀 白色或類白色的疏松塊狀物 白色或類白色的疏松塊狀物鑒別 (1)1%的水溶液，加入等體積的堿性酒石酸銅試液，加熱后即產生紅色沉淀。(2)HPLC法。供試液主峰的保留時間應與對照液主峰的保留時間一致。(3)水溶液顯鈉鹽的鑒別反應。(1)1%的水溶液，加入等體積的堿性酒石酸銅試液，加熱后即產生紅色沉淀。(2)HPLC法。供試液主峰的保留時間應與對照液主峰的保留時間一致。(3)取本品適量，直接壓片。本品的紅外光吸收圖譜應與對照的圖譜(光譜集994圖)一致。(4)水溶液顯鈉鹽的鑒別反應。堿度 50 mg/ml的水溶液，pH 值應為7.0 ～8.0 50 mg/ml的水溶液，pH 值應為7.0 ～8.0溶液的顏色0.50 g，加水10 ml溶解后，溶液應無色，如顯色，與黃色4號標準比色液比較，不得更深。0.50 g，加水10 ml溶解后，溶液應無色，如顯色，與黃色4號標準比色液比較，不得更深。游離氫化可的松HPLC法。在含量測定項下所得的對照品溶液和供試品溶液色譜圖中，按外標法以峰面積計算，游離氫化可的松不得過標示量的6.7%有關物質 HPLC法。供試液:0.2 mg/ml的溶液(以氫化可的松計);對照溶液:精密量取供試液3ml，置100ml量瓶中;氫化可的松對照品溶液:6μg/ml，溶劑均為流動相。色譜條件采用含量測定項下的色譜條件。限度規定:按外標法以峰面積計算，游離氫化可的松不得過標示量的3.0%;其他各雜質峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積(3.0%)。干燥失重 不得過2.0%(105℃，3 h) 不得過2.0%(105℃，3 h)熱原 50 mg/3 ml(滅菌注射用水)以氫化可的松計，劑量按家兔體重每1 kg注射1 ml，應符合規定。細菌內毒素每1 mg(以氫化可的松計)中含內毒素的量應小于0.30 EU。異常毒性 10 mg/ml滅菌注射用水(以氫化可的松計)，按靜脈注射給藥，應符合規定。每10 mg/ml的滅菌水溶液(以氫化可的松計)，按靜脈注射給藥，應符合規定。其他 應符合注射劑項下有關的各項規定 應符合注射劑項下有關的各項規定含量測定 HPLC外標法。C18柱，甲醇－磷酸鹽緩沖液(43∶57)為流動相，檢測波長為242 nm。理論板數應不低于3 000，氫化可的松琥珀酸鈉峰與氫化可的松峰的分離度應符合要求。溶劑為流動相。供試品溶液為0.04 mg/ml，對照品溶液為含氫化可的松琥珀酸鈉0.04 mg/ml與氫化可的松0.01 mg/ml，進樣量20μl，出峰順序依次為17－氫化可的松琥珀酸鈉、21－氫化可的松琥珀酸鈉和游離氫化可的松，按外標法以峰面積計算，17－氫化可的松琥珀酸鈉峰和21－氫化可的松琥珀酸鈉峰面積總和，作為氫化可的松琥珀酸鈉峰面積計算，并乘以0.748，折合為氫化可的松的量與氫化可的松的量合并計算。HPLC外標法。C18柱，甲醇－磷酸鹽緩沖液(43∶57)為流動相，檢測波長為242 nm。理論板數應不低于3 000，氫化可的松琥珀酸鈉峰與氫化可的松峰的分離度應大于4.0。溶劑為流動相。供試品溶液為0.04 mg/ml，對照品溶液為含氫化可的松琥珀酸鈉0.04 mg/m l與氫化可的松0.01 mg/ml，進樣量20μl，調節流速使氫化可的松琥珀酸鈉峰的保留時間約為16 min，17－氫化可的松琥珀酸鈉峰相對氫化可的松琥珀酸鈉峰的相對保留時間約為0.7，氫化可的松峰相對氫化可的松琥珀酸鈉峰的相對保留時間約為1.2。按外標法以峰面積計算，17－氫化可的松琥珀酸鈉峰和21－氫化可的松琥珀酸鈉峰面積總和，作為氫化可的松琥珀酸鈉峰面積計算，并乘以0.748，折合為氫化可的松的量與氫化可的松的量合并計算。

2 2010年版《中國藥典》與《美國藥典》35版及《英國藥典》(2010)的比較

2.1 性狀 《中國藥典》2010年二部在外觀上規定應為白色或類白色的疏松塊狀物，《美國藥典》35版及《英國藥典》(2010)未做規定［3，4］。

2.2 鑒別 《中國藥典》2010年版規定要做化學反應、高效液相色譜、紅外光吸收圖譜及鈉鹽的鑒別，方法為:①1%的水溶液，加入等體積的堿性酒石酸銅試液，加熱后即產生紅色沉淀;②HPLC法，供試液主峰的保留時間應與對照液主峰的保留時間一致;③取本品適量，直接壓片。本品的紅外光吸收圖譜應與對照的圖譜(光譜集994圖)一致;④水溶液顯鈉鹽的鑒別反應。《美國藥典》做紅外光吸收圖譜鑒別方法為:①IR法，100 mg，加水10 ml，迅速連續滴加3 N鹽酸1 ml，振搖，棄去水層，用水洗滌沉淀2次，每次10 ml，殘渣在60℃減壓干燥3 h測定，供試品吸收圖譜與對照品圖譜一致;②UV 法，(20 μg/ml，甲醇)242 nm，按干燥品計算吸收系數，差異應不得過3.0%;③鈉鹽的焰色反應。《英國藥典》做紅外光吸收圖譜鑒別及薄層鑒別，方法為:①IR法，供試品吸收圖譜與對照品圖譜一致;②TLC法，GF254板，展開劑:無水甲酸－無水乙醇－二氯甲烷(1∶10∶150)，溶劑為甲醇－二氯甲烷1∶9，溶液(1)供試液為0.1%;溶液(2)對照品液為氫化可的松琥珀酸0.1%;溶液(3)為對照品氫化可的松琥珀酸酯、甲基潑尼松龍松琥珀酸酯各0.1%。點樣5 μl，展開后，空氣中干燥，在日光和UV 365 nm檢視，溶液(1)與溶液(2)主斑點位置一致，溶液(3)應顯兩個清晰分離的斑點。

2.3 檢查

2.3.1 堿度、溶液的顏色和異常毒素、均勻度、微粒、干燥失重、細菌內毒素 堿度:《中國藥典》和《美國藥典》的限度均為7.0 ～8.0，《英國藥典》為6.5 ～8.0。

溶液的顏色、異常毒性:《中國藥典》有做規定，《美國藥典》和《英國藥典》未做規定。《中國藥典》溶液顏色規定為0.50 g，加水10 m l溶解后，溶液應無色，如顯色，與黃色4號標準比色液比較，不得更深。異常毒性規定為10 mg/ml(滅菌注射用水)，靜脈注射給藥，應符合規定。

含量均勻度:《美國藥典》和《英國藥典》對含量均勻度均有做規定，《中國藥典》未做規定。《美國藥典》:應符合制劑單位的均勻度項下有關的各項規定。《英國藥典》:除單個容器的重量應為標示量的85.0% ～110.0%外，10個容器經含量測定，含氫化可的松應為標示量的92.5% ～107.5%。

微粒:《美國藥典》對微粒做了特殊規定:應符合小容量注射劑項下的規定。而《中國藥典》和《英國藥典》未做規定。

干燥失重:《中國藥典》和《美國藥典》均規定不得超過2.0%(105℃，3 h)，《英國藥典》未做規定。

細菌內毒素:《中國藥典》規定，每1 mg(以氫化可的松計)中含內毒素的量應小于0.30 EU，《美國藥典》規定不得大于1.25 USP EU/mg，《英國藥典》未做規定。

其他:《中國藥典》規定應符合注射劑項下有關的各項規定，《美國藥典》規定應符合無菌及注射劑項下有關的各項規定，《英國藥典》未做規定。

2.3.2 有關物質 《中國藥典》2010年版增加了有關物質檢查，色譜條件采用含量測定項下的色譜條件，，供試液:0.2 mg/ml的溶液(以氫化可的松計);對照溶液:精密量取供試液3 ml，置100 ml量瓶中;氫化可的松對照品溶液:6μg/ml，溶劑均為流動相。限度規定按外標法以峰面積計算游離氫化可的松不得過標示量的3.0%，其他單個雜質峰面積不得大于對照溶液主峰面積的1/3(1.0%)，其他雜質峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積的(3.0%)。《英國藥典》采用HPLC法測定有關物質，C18柱(25 cm ×4.6 mm，5 μm)，乙腈－水磷酸(330∶600∶1)，加水稀釋至1 000 ml為流動相，流速為1 ml/min，檢測波長為254 nm。溶液(1)為0.25%(氫化可的松)溶劑為乙腈 －水(1∶1);溶液(2)為取溶液(1)2 ml，加乙腈－水1∶1;溶液稀釋至100 m l;溶液(3)為氫化可的松0.035%(乙腈－水1∶1);溶液(4)為氫化可的松琥珀酸酯、地塞米松各0.04%(乙腈－水1∶1)。氫化可的松琥珀酸酯峰與地塞米松峰的分離度應大于5.0，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的2倍。按外標法計算含游離氫化可的松不得過7%，以自身對照法計算，其他任何雜質不得過2%。《美國藥典》只檢查游離氫化可的松，方法采用HPLC法(含量測定項下)，限度規定按內標法以峰面積計算游離氫化可的松不得過標示量的6.7%。

2.4 含量測定 《中國藥典》2010年二部采用HPLC外標法，C18柱，甲醇－磷酸鹽緩沖液(43∶57)為流動相，檢測波長為242 nm。理論板數應不低于3 000，氫化可的松琥珀酸鈉峰與氫化可的松峰的分離度應大于4.0。溶劑為流動相。供試品溶液為0.04 mg/ml，對照品溶液為含氫化可的松琥珀酸鈉0.04 mg/ml與氫化可的松0.01 mg/ml，進樣量20 μl，調節流速使氫化可的松琥珀酸鈉峰保留時間約為16 min，17－氫化可的松琥珀酸鈉峰相對氫化可的松琥珀酸鈉峰的相對保留時間約為0.7，氫化可的松峰相對氫化可的松琥珀酸鈉峰的相對保留時間約為1.2。按外標法以峰面積計算，17－氫化可的松琥珀酸鈉峰和21－氫化可的松琥珀酸鈉峰面積總和，作為氫化可的松琥珀酸鈉峰面積計算，并乘以0.748折合為氫化可的松的量與氫化可的松的量合并計算。《美國藥典》采用HPLC內標法，硅膠柱，氯代正丁烷－水飽和的氯代正丁烷－四氫呋喃－甲醇－冰醋酸(95∶95∶14∶7∶6)為流動相，檢測波長為254 nm，內標為氟米龍(3 mg/ml，四氫呋喃);對照品液為氫化可的松琥珀酸半酯32.5 mg，加內標液5 ml與氫化可的松(0.30 mg/ml)5 m l，用冰醋酸－氯仿(3→100)稀釋至50 ml;供試品液為10個容器的內容物，混勻，取約相當于氫化可的松50 mg，加內標液10.0 ml，用冰醋酸－氯仿(3→100)稀釋至100 ml，振搖5 min，放置分層，棄去上層液。進樣量4～8μl，氫化可的松琥珀酸半酯與內標峰的分離度應不小于2.0，重復進樣的變異系數應不大于2.0%，出峰順序依次為內標、氫化可的松琥珀酸半酯、游離氫化可的松和17－氫化可的松琥珀酸半酯，相對保留時間分別為1.0、1.5、2.0 和2.5，按內標法以峰面積計算，氫化可的松琥珀酸半酯，17－氫化可的松琥珀酸半酯峰面積總和，作為氫化可的松琥珀酸半酯的峰面積，并乘以0.784折合為氫化可的松的量與游離氫化可的松的量合并計算。《英國藥典》采用紫外分光光度法在248 nm的波長處測定，按氫化可的松的A值(1%，1 cm)為449計算，取10個容器的內容物，分別用水稀釋制成0.001%(w/v)的溶液測定，取平均值為含量測定值。《中國藥典》和《美國藥典》限度均為90.0% ～110.0%，《英國藥典》限度為 95.0% ～105.0%。

3 討論

3.1 2010年版《中國藥典》與2005年版《中國藥典》比較，增訂了紅外光譜鑒別，有關物質檢查以及細菌內毒素檢查，進一步完善了質量標準，更有效控制藥品使用的安全性和有效性。通過與《美國藥典》35版和《英國藥典》(2010)比較，2010年《中國藥典》還可以在均一性與純度方面進一步完善。

3.2 2010年版《中國藥典》執行過程中，其中有關物質檢查一項，由于氫化可的松琥珀酸鈉對色譜柱固定相有較強的選擇性，造成不同型號色譜柱及不同的流動相配比對注射用氫化可的松琥珀酸鈉的分離效果影響極大［5］，在流動相為磷酸鹽緩沖液(8 mmol/L磷酸二氫鉀溶液，用8 mmol/L磷酸氫二鉀溶液調節pH值為5.0±0.1，臨用前新配)－甲醇(57∶43)的條件下Scienhome Kromasil ODS－2和Zirchrom Kromasil C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5μm)和在流動相為磷酸鹽緩沖液(8 mmol/L磷酸二氫鉀溶液，用8 mmol/L磷酸氫二鉀溶液調節pH值為5.0±0.1，臨用前新配)－甲醇(49∶51)的條件下PHENOME C18Kromasil色譜柱(250 mm×4.6 mm，5μm)均可使有關物質如17－氫化可的松琥珀酸鈉、游離氫化可的松與21－氫化可的松琥珀酸鈉峰分離良好，出峰順序為17－氫化可的松琥珀酸鈉、21－氫化可的松琥珀酸鈉和游離氫化可的松，且主峰的保留時間在15 min左右，均符合《中國藥典》2010年版的要求;在流動相為磷酸鹽緩沖液(8 mmol/L磷酸二氫鉀溶液，用8 mmol/L磷酸氫二鉀溶液調節pH值為5.0±0.1，臨用前新配)－甲醇(49∶51)的條件下Agilent ZorbaxSB－C18;AgelaVenusilXBPC18雖可使17－氫化可的松琥珀酸鈉、游離氫化可的松與21－氫化可的松琥珀酸鈉峰得到良好分離，并將主峰的保留時間調整在13 min左右，但其出峰順序不符合《中國藥典》2010年版的要求，原因是出峰時間與填料的粒度、孔徑、鍵合量及填充的工藝、技術有關。綜上所述，從主峰的保留時間和分離的選擇性來看，Scienhome Kromasil ODS －2、Zirchrom Kromasil C18(250 mm ×4.6 mm，5 μm)和 PHENOMEC18Kromasil(250 mm×4.6 mm，5μm)色譜柱更適合于注射用氫化可的松琥珀酸鈉的分離，故建議使用Kromasil填料的色譜柱。

1 中國藥典.二部.2005:404

2 中國藥典.二部.2010:552

3 美國藥典.35版:3442

4 英國藥典.2010:1059

5 張瑩，李海生.不同型號色譜柱對注射可的松琥珀酸鈉與相關物質分離效果的考察.藥物分析雜志，2012，32(1):163