HPLC 法測定前列安通膠囊中鹽酸小檗堿的含量

王 媛，崔 彥

前列安通膠囊由黃柏、赤芍等八味中藥組成，具有清熱利濕，活血化瘀的功效，用于濕熱瘀阻證，癥見:尿頻、尿急、排尿不暢，小腹脹痛等癥，臨床療效確切。處方中黃柏為君藥，鹽酸小檗堿為活性成分。目前文獻報道測定方法有薄層掃描法[3]和HPLC法[2]。由于薄層掃描法存在準確性低、重現性差等缺點，因此，本實驗采用HPLC 法測定黃柏中的鹽酸小檗堿，為有效地控制復方制劑的質量標準提供依據。

1 儀器與試藥

儀器:Agilent 1100高效液相色譜儀;MWD紫外檢測器;Sartorius BP211D型電子天平;HENGAO-HU10260B型超聲儀。試藥:鹽酸小檗堿對照品購自中國藥品生物制品檢定所(批號:110713–200208);乙腈(色譜純);水(超純水);其余試劑勻為分析純。前列安通膠囊由連云港市第一人民醫院藥房提供。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱:X– Terra C18(250×4.6 mm，5 μm)，WATERS公司;流動相:乙腈 －0.5‰磷酸水溶液(27∶73);檢測波長265 nm;柱溫30℃。

2.2 系統適應性試驗 在上述條件下，測定樣品中鹽酸小檗堿的含量，以鹽酸小檗堿峰計算理論塔板數大于6 000，分離度大于2，已達到基線分離。為確保定量分析的準確，在系統實驗中鹽酸小檗堿的理論塔板數不得低于4 000。

2.3 對照品溶液的制備 取鹽酸小檗堿對照品適量，加甲醇制成每1 ml含35 μg的溶液，即得。液相圖譜見圖1。

2.4 供試品溶液的制備 取本品內容物，研細，取約0.1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，密塞，精密加入50%甲醇50 ml，稱定重量，超聲(功率250 W，頻率40 KHz)處理30 min，放冷，稱定重量，加50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續濾液作為供試品溶液。液相圖譜見圖2。

2.5 陰性供試品溶液的制備 按處方比例，除去黃柏藥材，相同制備方法制得陰性供試品溶液。進樣，記錄，結果其他藥材對鹽酸小檗堿含量測定無干擾。液相圖譜見圖3。

2.6 標準曲線的制備 精密稱取鹽酸小檗堿對照品8.94 mg，置50 ml量瓶中，加50%甲醇溶解并定容至刻度，搖勻。得濃度為0.1788 mg/ml的標準品儲備液，分別精密吸取上述溶液1 ml，2 ml，4 ml，6 ml，10 ml，置100 ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。分別取10 μl注入液相色譜儀，記錄相應的峰面積。以進樣濃度為橫坐標(X)，峰面積為縱坐標(Y)，繪制標準曲線，得回歸方程 Y=35.949X －15.135，r=0.9998。結果表明，鹽酸小檗堿在 17.88 ～178.8 μg/ml范圍內呈良好線性關系。

2.7 精密度試驗 精密吸取對照品溶液(35.76 μg/ml)10 μl，重復進樣6次，測得峰面積，計算 RSD為0.22%(n=6)。

2.8 穩定性試驗 取本品(批號:090615)內容物0.1 g，精密稱定，按正文含量測定項下黃柏的供試品溶液制備方法制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液 10 μl，分別第 0、1、2、3、6、12 h進樣1次，共進樣6次，測定峰面積，計算RSD為1.66%(n=6)。結果表明鹽酸小檗堿峰面積在12 h內基本穩定。

2.9 重復性試驗 取本品(批號:090615)內容物0.1 g，精密稱定5份，按正文含量測定項下黃柏的供試品溶液制備方法制備供試品溶液，測定，結果鹽酸小檗堿平均含量為17.01 mg/g，RSD 為 0.31%(n=5)。

2.10 加樣回收率試驗 取已知含量的本品內容物(批號:090615;含量:17.01 mg/g)0.05 g，精密稱定 5 份，分別精密加入鹽酸小檗堿對照品溶液(36.8 μg/ml，50%甲醇溶解)25 ml及50%甲醇25 ml，超聲處理30 min，放冷，稱重，50%甲醇補足減失的重量，搖勻，過濾，取續濾液作為供試品溶液，進樣，測定。結果鹽酸小檗堿平均加樣回收率為99.74%，RSD為0.96%。結果見表1。

表1 加樣回收率試驗結果

2.11 樣品含量測定 取5批前列安通膠囊，按正文含量測定項下黃柏的供試品溶液制備方法制備供試品溶液。分別精密吸取供試品溶液、對照品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，測定，計算含量，結果見表2。

表2 樣品中鹽酸小檗堿的含量測定結果(n=5)

3 討論

3.1 提取方法的選擇 分別采用甲醇、50%甲醇、乙醇、50%乙醇、水，超聲、回流的不同方法對樣品進行提取考察，以選擇合適的提取方法，結果幾種提取方法中以50%甲醇超聲提取效果最佳，方法簡便可靠。

3.2 流動相的選擇 參考中國藥典標準[3]對乙腈-磷酸的不同比例進行考察，結果表明乙腈–0.5‰磷酸水溶液(27:73)對樣品的分離效果最佳，保留時間適宜。

3.3 結果評價 試驗結果表明，本實驗所采用測定方法測定鹽酸小檗堿，重現性良好，回收率較高，且在該色譜條件下，鹽酸小檗堿進樣精密度良好，故該法結論可靠，可作為前列安通膠囊的質量控制標準。

[1]甄麗萍，張 波.薄層掃描法測定胃消渴膠囊中鹽酸小檗堿的含量[J].黑龍江醫藥，2004，17(5):321-322.

[2]陳曉軍，曹新榮，郭五保，等.HPLC測定胃舒泰膠囊中鹽酸小檗堿的含量[J].西北藥學雜志，2005，20(6):251-252.

[3]中國藥典二部[S].北京:中國醫藥科技出版社，2010:640.