瑞舒伐他汀鈣對冠心病患者外周血內皮前體細胞水平的干預作用

郭文靜，李曉燕，張紅明，韓淑芳，康 玲

1遼寧醫學院 濟南軍區總醫院研究生培養基地，濟南 250031；2濟南軍區總醫院，濟南250031；3泰山醫學院附屬醫院，泰安 271000

機體在正常生理情況下，外周循環血中的內皮前體細胞含量較少、數目趨于穩定，在組織缺血、缺氧等刺激下骨髓中的內皮前體細胞被大量動員到外周血中，使外周血的內皮前體細胞數目增多，參與內皮、血管的再生。在高脂血癥等心血管危險因素存在時，會出現內皮前體細胞數量減少和遷移能力下降，導致血管損傷增強及修復能力降低[1]，因此外周血內皮前體細胞的變化可能間接反應內皮細胞損傷與修復的情況[2]。他汀類藥物除有調脂作用外，還有包括減少血管炎癥、減少血小板聚集和血栓形成等非調脂的心血管保護作用。本研究旨在觀察他汀類藥物干預后CD34+/VEGFR-2+EPCs數量的變化，進一步探討他汀類藥物對延緩冠狀動脈粥樣硬化過程中的作用。

材料和方法

1 研究對象 選取2011年1月-2011年10月在濟南軍區總醫院心內科住院且經冠脈造影確診為冠心病患者112例，男性63例，女性49例。排除標準：先前3個月內發生過急性心肌梗死、不穩定型心絞痛、腦血管疾病；美國紐約心臟病學會(NYHA)分級Ⅲ或Ⅳ級的心力衰竭；嚴重肝腎功能損害、各種急慢性感染性疾?。粚υ煊皠┻^敏患者；近期有外傷、潰瘍、外科手術、炎癥、腫瘤；近期服用過干細胞因子、粒系集落刺激因子、粒系巨噬系集落刺激因子、他汀類調脂藥物；其他心臟病。

2 分組 對冠狀動脈造影顯示管腔直徑狹窄≥50%的病變支進行定量分析，左前降支、回旋支或右冠狀動脈1支狹窄者為單支病變；2支狹窄者為雙支病變；3支均狹窄者為三支病變；如左主干病變并累及左前降支或回旋支均為雙支病變，若同時伴右冠狹窄則為三支病變。所有入選對象分為單支病變組(37例)、雙支病變組(36例)、三支病變組(39例)，入選對象除服用冠心病常規藥物外，均服用瑞舒伐他汀鈣片(商品名：可定，由阿斯利康制藥有限公司提供，劑量：10mg 1/晚)。

3 試劑與儀器 Alexa Fluor 647 anti-human VEGFR-2(CD309)(購置Becton dickinson公司)，FITC antihuman CD34(購置Becton dickinson公司)，溶血素，Lysing Solution(購置Becton dickinson公司)，流式細胞分析儀(購置Becton dickinson公司)，低速臺式離心機(購置上海醫用分析儀器廠公司)。

4 生化指標檢測 總膽固醇(CH)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-CH)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)和甘油三酯(TG)、空腹血糖(GLU)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)等，入院第2天抽血檢測。

5 外周血EPCs水平測定 患者禁食8-10h后，次日清晨于肘靜脈抽取空腹血3ml，新鮮肝素鈉抗凝，采標本血后即刻送檢，行直接免疫熒光標記法，移液槍取100μl全血，加胞膜抗體(5μl Alexa Fluor 647 anti-human CD309(VEGFR-2)，10μl FITC anti-human CD34)，以同型抗體作對照，孵育30min，室溫保存，避光；加2ml 1×Lysing Solution，混勻5-10min，室溫保存，避光；1 500r/min離心5min；懸浮細胞，加1×PBS(含0.5% BSA，0.1%疊氮鈉)洗滌，1 500r/min離心5min；懸浮細胞，補足0.5ml PBS，并以流式細胞儀計算CD34+/VEGFR-2+EPCs在全血中所占百分比。

6 統計學方法 應用SPSS16.0統計學軟件進行統計處理，數值變量用-x±s表示，用藥前后數據采用配對t檢驗，三組之間采用單因素方差分析。P<0.05為差異有統計學意義。

結 果

1 入選對象基線資料比較 各組一般資料間均無統計學差異(各組指標兩兩比較P>0.05)，見表1。2 干預前后血脂水平比較 干預1個月后，TC、LDL-CH與干預前相比顯著下降(P<0.001)，TG與干預前相比亦呈下降趨勢(P<0.05)，HDL-C變化無統計學意義(P>0.05)，見表2。

3 不同組外周血CD34+/VEGFR-2+EPCs間的關系在應用瑞舒伐他汀鈣干預前，對單支、雙支、三支病變組進行單因素方差分析，各組均值間均有統計學差異(P<0.01)；單支、雙支、三支病變組CD34+/VEGFR-2+EPCs分別為0.121 6±0.019 1、0.085 5±0.011 3、0.043 1±0.012 8，即隨著冠脈病變程度加重，外周血中EPCs數量逐漸下降。

4 瑞舒伐他汀鈣片對CD34+/VEGFR-2+EPCs水平的影響 給予瑞舒伐他汀鈣片干預1月后，三組與用藥前相比，冠心病患者外周血中CD34+/VEGFR-2+EPCs數量明顯升高(P<0.05)。見表3。

表1 三組患者基線資料Tab 1 Baseline data about patients in 3 groups(-x±s)

表2 瑞舒伐他汀鈣片干預前后三組的血脂變化Tab 2 Lipid level in 3 groups before and after rosuvastin treatment(-x±s, mmol/L)

表3 瑞舒伐他汀鈣片對CD34+/VEGFR-2+EPCs水平的影響Tab 3 Effect of rosuvastin on CD34+ and VEGFR-2+marked EPC(-x±s, %)

討 論

血管內皮細胞損傷，發生慢性炎癥反應，會導致并加速動脈粥樣硬化進展，故內皮前體細胞在內皮細胞損傷后的修復過程中發揮著關鍵作用[3-4]，各種心血管危險因素(如高脂血癥)均可導致內皮前體細胞數量下降[5]。正常情況下，內皮的損傷與內皮祖細胞的修復之間存在著動態平衡，以維持血管內膜功能結構的完整。

冠心病患者心肌缺血區釋放各種炎癥介質、細胞因子，動員骨髓內皮前體細胞遷移至外周血，歸巢到病損內皮，當冠脈病損支數逐漸增多時，心肌缺血面積便會增大，三支病變者內皮損傷修復所需的內皮祖細胞數目遠遠超過兩支、單支病變者，外周血中內皮前體細胞數量減少，內皮自我修復能力下降，更加重冠脈粥樣斑塊的形成及進展。我們的研究結果發現：隨著冠脈病變程度加重，外周血中內皮祖細胞數目逐漸降低，其水平與冠狀動脈病變支數呈顯著負相關，多支病變患者相對較單支病變者其內皮祖細胞有下降趨勢，具體表現為：三支病變組小于兩支病變組、單支病變組，兩支病變組小于單支病變組。外周血中內皮前體細胞含量較多的單支病變組會比雙支病變組及三支病變組其心源性死亡的發生率低[6]。

動脈粥樣硬化患者均伴有內皮前體細胞數量減少和遷移能力下降，可歸因于心血管危險因素的聚集導致內皮細胞修復能力下降[7]。目前已有多個證據表明高脂血癥患者外周血循環內皮前體細胞數量減少和功能受損，且其數目與膽固醇、低密度脂蛋白水平呈負相關[8]。對于冠心病患者來說，強化降脂能夠起到穩定粥樣斑塊、延緩動脈硬化的進展[9]，這顯得尤為重要；他汀類藥物除具有調脂作用外，還可以改善血管內皮、保護心血管，包括減少血管炎癥發生、減少血小板聚集和血栓形成、抑制體內過度的免疫激活、減少免疫反應對機體的破壞、改善內皮功能等；本實驗經給予瑞舒伐他汀鈣片10mg 1/晚干預后，三組的上述指標顯著上升，這說明他汀類藥物還可以促進骨髓內皮祖細胞的動員，增加外周血中循環內皮細胞數量，冠心病患者應用瑞舒伐他汀鈣藥物后外周循環血中的CD34與VEGFR-2共同標記的血管內皮祖細胞數目增加，冠心病患者內皮前體細胞數量均較1個月前有所升高，從而有效修復損傷的內皮，延緩動脈粥樣硬化繼續發展，改善冠心病患者的預后。

1 Bai X，Wang X，Xu Q. Endothelial damage and stem cell repair in atherosclerosis［J］. Vascul Pharmacol，2010，52（5-6）：224-229.

2 Miranville A，Heeschen C，Sengenès C，et al. Improvement of postnatal neovascularization by human adipose tissue-derived stem cells［J］. Circulation，2004，110（3）：349-355.

3 Briguori C，Testa U，Riccioni R，et al.Correlations between progression of coronary arter disease and circulating endothelial progenitor cells［J］.FASEBJ，2010，24（6）：1981-1988.

4 Briguori C，Testa U，Riccioni R，et al. Correlations between progression of coronary artery disease and circulating endothelial progenitor cells［J］. FASEB J，2010，24（6）：1981-1918.

5 Esper RJ，Vilari?o JO，Machado RA，et al. Endothelial dysfunction in normal and abnormal glucose metabolism［J］. Adv Cardiol，2008，45：17-43.

6 Zhou Z，Shi S，Song M，et al. Development of transgenic endothelial progenitor cell-seeded stents［J］. J Biomed Mater Res A，2009，91（2）：623-628.

7 Pompilio G，Capogrossi MC，Pesce M，et al. Endothelial progenitor cells and cardiovascular homeostasis：clinical implications［J］. Int J Cardiol，2009，131（2）：156-167.

8 Pirro M，Bagaglia F，Paoletti L，et al. Hypercholesterolemiaassociated endothelial progenitor cell dysfunction［J］. Ther Adv Cardiovasc Dis，2008，2（5）：329-339.

9 Nicholls SJ，Borgman M，Nissen SE，et al. Impact of statins on progression of atherosclerosis：rationale and design of SATURN（Study of Coronary Atheroma by InTravascular Ultrasound：effect of Rosuvastatin versus AtorvastatiN）［J］. Curr Med Res Opin，2011，27（6）：1119-1129.