河北省灤縣牛梨形蟲的分子檢測

張香齋，陳麗鳳，陳 娟，王秋悅，劉朋朋，石 芳，鄒亞學

(河北科技師范學院動物科技學院，河北省預防獸醫(yī)學重點實驗室，河北秦皇島，066600)

梨形蟲病是一類經(jīng)硬蜱傳播，由梨形蟲綱巴貝斯科或泰勒科原蟲引起的血液原蟲病的總稱。迄今為止，全世界已記載的各種哺乳動物的巴貝斯蟲有67種，泰勒蟲有13種［1］。牛梨形蟲病是世界性分布的嚴重危害養(yǎng)牛業(yè)發(fā)展的一類重要疾病，給畜牧業(yè)和國民經(jīng)濟造成巨大損失。在我國已報道的病原有牛巴貝蟲(Babesia bovis)、雙芽巴貝蟲(B．bigemina)、大巴貝蟲(B．major)、卵形巴貝蟲(B．ovata)、一種尚未命名的巴貝蟲(B．sp．)［2］、環(huán)形泰勒蟲(Theileria annulata)、瑟氏泰勒蟲(T．sergenti)和中華泰勒蟲(T．sinensis)［3］。牛梨形蟲病的傳播媒介蜱有3種:殘緣璃眼蜱(Hyalomma detritum)、長角血蜱(Haemaphysalis longicornis)和微小牛蜱(Boophihismicrophis)。據(jù)FAO統(tǒng)計，世界上有80%的牛遭到蜱的侵襲，僅硬蜱給畜牧業(yè)造成的損失，全球每年就高達70億美元［4］。本試驗應用PCR診斷技術，對采自河北省灤縣某牛場的牛進行梨形蟲檢測，以便了解和分析該地區(qū)梨形蟲自然感染狀況，為更好地防治該病提供一些參考。

1 材料與方法

1．1 試驗材料

1．1．1 牛血液 采自河北省灤縣某牛場。

1．1．2 主要試劑及緩沖液配制 50 ×TAE:取 Tris堿242 g，冰乙酸57．1 mL，0．5 mol/L EDTA(pH 8．0)100 mL加入純水定容至1 L，儲存?zhèn)溆?蛋白酶K(德國Merck公司)、無水乙醇(天津市北方天醫(yī)化學試劑廠)、瓊脂糖(西班牙進口分裝)。PCR相關試劑，2×Taq MasterMix(北京康為世紀生物科技有限公司)，引物(北京賽百盛生物技術有限責任公司)。DL2000(北京博潤德生物科技發(fā)展中心)。

1．1．3 儀器設備 超級恒溫水浴箱(601型、金壇市醫(yī)療儀器廠)、高速臺式離心機(TGL-16G，上海安……