幽門螺桿菌相關(guān)性胃癌患者局部Th1/Th2細(xì)胞免疫應(yīng)答變化*

江 泳 楊清峰 張 旭 周 磊 張 爽 張群超 張 毅

安徽省蚌埠市第三人民醫(yī)院消化內(nèi)科(233000)

大量流行病學(xué)和病因?qū)W研究證明，幽門螺桿菌(Helicobacter pylori，Hp)感染與胃癌具有部分因果關(guān)系。目前認(rèn)為Hp感染后宿主的免疫病理反應(yīng)是胃癌的主要致病機(jī)制之一，研究宿主免疫反應(yīng)與胃癌之間的關(guān)系，對探明胃癌的發(fā)生機(jī)制具有重要意義［1］。本研究通過檢測Hp相關(guān)性胃癌患者黏膜局部干擾素-γ(IFN-γ)和白細(xì)胞介素-4(IL-4)表達(dá)情況，旨在探討Hp感染時(shí)宿主Th1/Th2細(xì)胞免疫應(yīng)答變化及其在胃癌發(fā)生中的作用。

對象與方法

一、研究對象

連續(xù)收集2011年1～6月因上腹部不適癥狀而接受胃鏡檢查的胃癌患者，診斷符合病理學(xué)檢查。剔除標(biāo)準(zhǔn):過去2周內(nèi)服用過抑酸劑、鉍劑、抗生素、非甾體消炎藥和腎上腺皮質(zhì)激素者;有支氣管哮喘、炎癥性腸病、自身免疫病者。同時(shí)選取同期胃鏡下表現(xiàn)為非特異性黏膜充血水腫者作為對照。

胃癌患者于病灶邊緣或明顯隆起部位取4～5塊組織，對照組于距幽門3 cm的胃竇大彎側(cè)取2塊組織，保存待測。

二、研究方法

1.Hp的檢測:入選者均接受14C-尿素呼氣試驗(yàn)、Hp抗體檢測，其中1項(xiàng)結(jié)果陽性者視為Hp陽性，2項(xiàng)均陰性者視為 Hp 陰性［2］。

2.免疫組化法檢測IFN-γ和IL-4表達(dá):IFN-γ和 IL-4單克隆抗體試劑盒購自北京四正柏生物科技有限公司，具體步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。

結(jié)果判斷:細(xì)胞質(zhì)呈明顯棕黃或棕褐色著色者為陽性細(xì)胞。隨機(jī)選取5個(gè)視野，高倍鏡(×400)下觀察細(xì)胞染色情況，共計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞。根據(jù)陽性細(xì)胞數(shù)判斷表達(dá)情況:-，無細(xì)胞染色;+，陽性細(xì)胞數(shù)1% ～25%;++，26% ～50%;+++ ，51% ～100%［3］。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

結(jié) 果

一、一般情況

共入選55例患者，其中對照組28例，胃癌組27例，兩組一般情況見表1。Hp總體感染率為61.8%，兩組性別構(gòu)成比、平均年齡、Hp陽性率相比差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。

表1 兩組患者一般情況

二、IFN-γ和IL-4表達(dá)情況

1.Hp陽性患者:胃癌組IFN-γ表達(dá)以+、++為主，而對照組IFN-γ表達(dá)以+++為主(見圖1)，達(dá)61.1%;胃癌組IL-4表達(dá)以+++為主(見圖2)，達(dá)43.8%，而對照組IL-4表達(dá)以-、+為主。兩組IFN-γ、IL-4表達(dá)相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05)(見表2)。

2.Hp陰性患者:胃癌組和對照組IFN-γ表達(dá)均以+或++為主;而IL-4表達(dá)均以-或+為主，++、+++少見。兩組IFN-γ和IL-4表達(dá)相比均無明顯差異(P＞0.05)(見表3)。

圖1 Hp陽性對照者IFN-γ表達(dá)(免疫組化染色，×400)

圖2 Hp陽性胃癌患者IL-4表達(dá)(免疫組化染色，×400)

3.胃癌患者:Hp陽性胃癌患者IFN-γ表達(dá)與陰性者無明顯差異(P＞0.05)，而IL-4表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)(見表 2、表 3)。

4.對照組:Hp陽性者IFN-γ表達(dá)與Hp陰性者相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而IL-4表達(dá)無明顯差異(P＞0.05)(見表 2、表 3)。

表2 Hp陽性者中IFN-γ、IL-4表達(dá)情況n(%)

表3 Hp陰性者中IFN-γ、IL-4表達(dá)情況n(%)

討 論

1986年Mosmann等［4］根據(jù)分泌的細(xì)胞因子和生物學(xué)功能的不同，將小鼠CD4+Th細(xì)胞分為Th1和Th2兩個(gè)細(xì)胞亞型。1991年Romagnani［5］證實(shí)，人 Th細(xì)胞亦可分為 Th1和Th2兩個(gè)亞型，產(chǎn)生與小鼠Th細(xì)胞相似的細(xì)胞因子和生物學(xué)功能。Th1細(xì)胞主要分泌IFN-γ、IL-2、IL-12等細(xì)胞因子，通過促進(jìn)自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)、細(xì)胞毒性T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的活化、增殖，介導(dǎo)細(xì)胞免疫;Th2細(xì)胞主要分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10等細(xì)胞因子，刺激 B 細(xì)胞增殖并產(chǎn)生抗體，介導(dǎo)體液免疫［6］。正常生理情況下，Th1、Th2兩類細(xì)胞處于相互抑制、相互轉(zhuǎn)化的平衡狀態(tài)，一旦平衡被打破，機(jī)體會處于Th1細(xì)胞或Th2細(xì)胞優(yōu)勢的漂移狀態(tài)，從而發(fā)生各種病理反應(yīng)，甚至導(dǎo)致腫瘤［7］。Th1/Th2細(xì)胞因子表達(dá)間接反映了Th1、Th2細(xì)胞的功能，IFN-γ和IL-4分別是Th1、Th2細(xì)胞中典型的細(xì)胞因子［8］。

研究表明，機(jī)體對腫瘤的免疫反應(yīng)以Th1型免疫應(yīng)答為主，若機(jī)體Th1和Th2應(yīng)答失衡，形成Th2型免疫應(yīng)答，造成免疫抑制，使機(jī)體的抗腫瘤免疫受到嚴(yán)重削弱，易導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生、發(fā)展［7，9］。本研究采用免疫組化法發(fā)現(xiàn)，Hp總體感染率為61.8%。Hp陽性患者中，胃癌組IFN-γ表達(dá)明顯低于對照組(P＜0.05)，IL-4表達(dá)明顯高于對照組(P＜0.05);Hp陰性患者中，胃癌組IFN-γ、IL-4表達(dá)與對照組均無明顯差異(P＞0.05)。Hp陽性胃癌患者IL-4表達(dá)明顯高于Hp陰性胃癌患者(P＜0.05)，Hp陽性對照組IFN-γ表達(dá)明顯高于Hp陰性對照組(P＜0.05)。說明Hp陽性對照者以Th1細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答為主，Hp陽性胃癌患者以Th2細(xì)胞為主，在與Hp感染相關(guān)的胃部疾病進(jìn)展過程中，病變局部存在由Th1細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答向Th2細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答轉(zhuǎn)化，可能與胃癌的發(fā)生密切相關(guān)。但因本研究入組病例較少，同時(shí)細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)間的相互作用是一個(gè)復(fù)雜的過程，某些細(xì)胞因子的檢測結(jié)果尚不能表明整個(gè)發(fā)病機(jī)制，因此，今后尚需擴(kuò)大樣本行進(jìn)一步研究。

1 蔡英，王晶桐.幽門螺桿菌相關(guān)慢性炎癥和免疫因子在胃癌中的研究進(jìn)展［J］.中國綜合臨床，2009，25(3):331-333.

2 中華醫(yī)學(xué)會消化病學(xué)分會幽門螺桿菌學(xué)組/幽門螺桿菌科研協(xié)作組.第三次全國幽門螺桿菌感染若干問題共識報(bào)告(2007年8月 廬山)［J］.胃腸病學(xué)，2008，13(1):42-46.

3 Wang SK，Zhu HF，He BS，et al.CagA+H pylori infection is associated with polarization of T helper cell immune responses in gastric carcinogenesis［J］. World J Gastroenterol，2007，13(21):2923-2931.

4 Mosmann TR，Cherwinski H，Bond MW，et al.Two types of murine helper T cell clone.Ⅰ.Definition according to profiles of lymphokine activities and secreted proteins［J］.J Immunol，1986，136(7):2348-2357.

5 Romagnani S.Human TH1 and TH2 subsets:doubt no more［J］.Immunol Today，1991，12(8):256-257.

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