ERCC-1和COX-2在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其臨床意義

樊志明，黃超紅，鄭宏瑩，賀鴻桂

(解放軍第422醫(yī)院腫瘤科，廣東湛江524009)

ERCC-1和COX-2在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其臨床意義

樊志明，黃超紅，鄭宏瑩，賀鴻桂

(解放軍第422醫(yī)院腫瘤科，廣東湛江524009)

目的探討ERCC-1和COX-2在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)水平，分析兩者與非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的相關(guān)性。方法采用免疫組織化學(xué)法檢測96例非小細(xì)胞肺癌組織中的ERCC-1和COX-2表達(dá)水平，分析兩者與臨床病理參數(shù)間的相關(guān)性。結(jié)果ERCC-1與NSCLC的病理相關(guān)性分析顯示，病理類型、TNM分期及預(yù)后與ERCC-1的陽性表達(dá)密切相關(guān)(P＜0.05)。COX-2與NSCLC的病理相關(guān)性分析顯示，病理類型、分化程度與COX-2的陽性表達(dá)密切相關(guān)(P＜0.05)。ERCC-1蛋白表達(dá)與COX-2蛋白表達(dá)的相關(guān)性分析顯示ERCC-1和COX-2蛋白表達(dá)不相關(guān)。結(jié)論COX-2蛋白及ERCC-1在NSCLC中均有不同程度的表達(dá)，檢測COX-2及ERCC-1表達(dá)對NSCLC預(yù)后的判斷具有一定價值。

ERCC-1；COX-2；非小細(xì)胞肺癌

肺癌是最常見的肺原發(fā)性惡性腫瘤，其發(fā)病率及死亡率均居全球各類腫瘤的首位，肺癌患者5年生存率低于15.7%[1]，其中非小細(xì)胞肺癌(Non-small cell lung cancer，NSCLC)占肺癌發(fā)病率的80%[2]。環(huán)氧合酶-2(Cyclooxygnase-2，COX-2)是一種過度表達(dá)可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖的誘導(dǎo)酶。DNA切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因-1(Excision repair cross-complementation group 1，ERCC-1)為DNA修復(fù)密切相關(guān)的基因，多數(shù)作者認(rèn)為其與腫瘤分化密切相關(guān)。有關(guān)ERCC-1和COX-2表達(dá)在非小細(xì)胞肺癌中的臨床意義并不清楚，為此，本文著重探討ERCC-1和COX-2在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)及相關(guān)性，現(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料收集我院2004年6月至2008年 12月行手術(shù)治療的非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)患者96例，其中男63例，女33例。年齡37～81歲，平均(58.2±8.9)歲。病理類型中腺癌56例，鱗癌29例，粘液表皮癌5例，腺鱗癌6例。分化程度中低分化55例，高分化41例。所有患者術(shù)前均給予放療、化療以及免疫治療，術(shù)后隨訪36個月。

1.2 方法腫瘤組織標(biāo)本于術(shù)后收集，石蠟包埋后制成蠟塊，4μm切片后行SP法免疫組織化學(xué)染色。石蠟切片脫蠟至水后磷酸鹽緩沖液(PBS)液洗兩次，每次5 min。高壓鍋抗原修復(fù)后PBS液洗兩次，每次5 min。滴加血清封閉液20 min，甩去多余液體分別滴加ERCC-1(福州邁新公司)、COX-2一抗(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)，放置1 h后PBS洗3次，每次2 min。滴加試劑SABC 20 min，PBS洗4次，每次5 min。DAB試劑盒顯色，蒸餾水清洗后采用蘇木素復(fù)染，酒精分化、脫水、透明、封片并鏡檢。

1.3 評估方法根據(jù)染色細(xì)胞比例及染色強(qiáng)度對ERCC-1和COX-2表達(dá)進(jìn)行分析，其中ERCC-1和COX-2染色中細(xì)胞核染色呈棕黃色顯示陽性，細(xì)胞核無著色或者細(xì)胞漿無著色顯示陰性。在陽性表達(dá)較為集中的切片中選取5個高倍鏡視野，每視野計數(shù)200個細(xì)胞，取平均數(shù)，其中＜5%：0分，5%～30%：1分，31%～70%：2分，≥71%：3分。著色強(qiáng)度中，陰性：0分；弱陽性：1分；陽性：2分；強(qiáng)陽性：3分。兩組數(shù)據(jù)相乘，其中0～1分為(-)，1～2分為(+)，3～4分為(++)，5分以上為(+++)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件分析，計量資料采用t檢驗(yàn)；計數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)；等級資料比較采用Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)，兩者之間的相關(guān)性采用Pearson檢驗(yàn)，其中P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各指標(biāo)中ERCC-1與NSCLC病理特征相關(guān)性病理類型、TNM分期及預(yù)后與ERCC-1的陽性表達(dá)密切相關(guān)(P＜0.05)。腺癌患者(++～+++)程度表達(dá)39.3%，鱗癌表達(dá)17.2%，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。預(yù)后≤3年患者(++～+++)程度表達(dá)15.4%，預(yù)后＞3年患者表達(dá)為40.4%，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。TNM分期方面，Ⅰ～Ⅱ期患者(++～+++)程度表達(dá)40.0%，Ⅲ～Ⅳ期表達(dá)13.9%，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。具體見表1。

表1 各指標(biāo)中ERCC-1與NSCLC病理特征相關(guān)性(例)

2.2 各指標(biāo)中COX-2與NSCLC病理特征相關(guān)性病理類型、分化程度與COX-2的陽性表達(dá)密切相關(guān)(P＜0.05)。腺癌患者(++～+++)程度表達(dá)64.3%，鱗癌表達(dá)37.9%，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜ 0.05)。分化程度中，高分化肺癌患者(++～+++)程度表達(dá)為43.9%，中低分化表達(dá)為60.0%，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，具體見表2。

組別分類例數(shù)P值性別男女＞0.05年齡＞0.05病理類型＜0.05分化程度＜0.05預(yù)后＞0.05 TNM分期≤60歲＞60歲鱗癌腺癌高分化中低分化≤3年＞3年Ⅰ～Ⅱ期Ⅲ～Ⅳ期＞0.05淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有無63 33 54 42 29 56 41 55 39 57 60 36 44 52 COX-2 -～+(n=45) 29 16 26 19 18 20 23 22 17 28 26 19 20 25 ++～+++、(n=51) 34 17 28 23 11 36 18 33 22 29 34 17 24 27＞0.05

2.3 ERCC-1和COX-2蛋白表達(dá)的相關(guān)性非小細(xì)胞肺癌中的ERCC-1蛋白表達(dá)與COX-2蛋白表達(dá)進(jìn)行配對卡方檢驗(yàn)(χ2＝2.683，P=0.132)，顯示兩組蛋白表達(dá)不存在相關(guān)性。具體見表3。

表3 ERCC-1和COX-2蛋白表達(dá)的相關(guān)性分析(例)

3 討論

肺癌是惡性腫瘤患者死亡的主因，我國肺癌的發(fā)病率及死亡率占據(jù)惡性腫瘤的首位。肺癌根據(jù)生物學(xué)行為不同分為小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌，其中非小細(xì)胞肺癌占80%左右。肺癌患者生存率較低、預(yù)后相對較差，因此，我們需對肺癌具體機(jī)制進(jìn)行深入研究，以期提高肺癌患者診斷率及治愈率。COX是催化花生四烯酸轉(zhuǎn)移成為內(nèi)源性前列腺素中的關(guān)鍵性限速酶，包括結(jié)構(gòu)型COX-1和誘生型COX-2兩種亞型，正常情況下COX-2在多數(shù)正常組織中不表達(dá)或者呈低表達(dá)，而在幾乎所有的腫瘤組織中均可表達(dá)COX-2[3]，其主要通過對腫瘤細(xì)胞增殖、分化，抑制腫瘤細(xì)胞凋亡及促進(jìn)腫瘤血管生成等，在腫瘤發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移等多個過程中均起著較為重要的作用[4-5]。Cianchi等[6]研究中顯示，COX-2在結(jié)直腸癌腫瘤上皮細(xì)胞中呈現(xiàn)陽性表達(dá)，而正常結(jié)腸上皮中呈陰性表達(dá)。王魯建等[7]研究表明COX-2在NSCLC中呈現(xiàn)過度表達(dá)，其表達(dá)水平與NSCLC的侵襲、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及臨床分期密切相關(guān)。本組研究表明，腺癌患者(++～+++)程度表達(dá)64.3%，鱗癌表達(dá)37.9%，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。分化程度比較中顯示，高分化肺癌患者(++～+++)程度表達(dá)43.9%，中低分化表達(dá)60.0%，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。研究結(jié)果表明COX-2表達(dá)陽性程度高的NSCLC患者主要表現(xiàn)為腺癌及分化程度相對較低，COX-2表達(dá)表達(dá)與NSCLC患者的預(yù)后呈一定關(guān)系。

ERCC-1位于19號染色體中，是核苷酸剪切修復(fù)家族中具有特異性的重要成員之一，其為編碼297個氨基酸的蛋白，在DNA單鏈?zhǔn)軗p處5’端進(jìn)行剪切后發(fā)揮作用，ERCC1的表達(dá)具有防止腫瘤的發(fā)生、發(fā)展的作用[8]。ERCC-1在NSCLC組織中表達(dá)意義因不同腫瘤的臨床分期以及化療與否具有不同的相關(guān)性。研究表明，ERCC-1陽性患者的生存期顯著高于陰性表達(dá)患者，而晚期接受化療的NSCLC患者中，ERCC-1的高表達(dá)患者生存期相對短于低表達(dá)的患者[9-10]。而本組研究結(jié)果表明，腺癌患者(++～+++)程度表達(dá)39.3%，鱗癌表達(dá)17.2%，腺癌患者ERCC-1陽性表達(dá)顯著高于鱗癌。在生存期分析中，預(yù)后≤3年患者(++～+++)程度表達(dá)15.4%，預(yù)后＞3年患者表達(dá)40.3%，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。研究結(jié)果表明ERCC-1高表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后密切相關(guān)，陽性表達(dá)高患者生存期顯著提高。在TNM分期比較方面，Ⅰ～Ⅱ期患者(++～+++)程度表達(dá)40.0%，Ⅲ～Ⅳ期表達(dá)13.9%，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)果顯示，ERCC-1陽性表達(dá)患者TNM分期分期較低，表明ERCC-1陽性表達(dá)高的患者分期較好、患者預(yù)后較佳。而在相關(guān)性研究方面，ERCC-1蛋白表達(dá)與COX-2蛋白表達(dá)的配對卡方檢驗(yàn)結(jié)果(χ2=2.683，P=0.132)表明ERCC-1和COX-2蛋白表達(dá)不相關(guān)，顯示兩組蛋白表達(dá)不存在相關(guān)性。

綜上所述，筆者認(rèn)為COX-2蛋白及ERCC-1在NSCLC中均有不同程度的表達(dá)，檢測COX-2及ERCC-1表達(dá)對NSCLC預(yù)后的判斷具有一定價值。

[1]錢貴生.肺癌流行病學(xué)與啟示[J].中國臨床醫(yī)生,2009,37(9):3-4.

[2]Sonoda R,Naomoto Y,Shirakawa Y,et al.Preferential up-regulation of heparanase and cyclooxygenase-2 in carcinogenesis of Barrxett's oesophagus and intestinal-type gastric carcinoma[J].Histopathology,2010,57(1):90-100.

[3]陳裕生,李解方.前列腺癌與COX-2的研究進(jìn)展[J].海南醫(yī)學(xué), 2008,19(4):175-178.

[4]趙曉鴻,陳照麗,趙守華,等.COX-2及其轉(zhuǎn)錄因子NFAT3和c-Fos在非小細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義[J].中國肺癌雜志,2010,13 (11):1035-1040．

[5]Krysan K,Reckamp KL,Sharma S,et al.The potential and rational for COX-2 inhibitors in lung cancer[J].Anti-cancer Agents Med Chem,2006,6(3):209.

[6]Cianchi F,Cuzzocrea S,Vinci MC,et al.Heterogeneous expression of cyclooxygenase-2 and inducible nitric oxide synthase within colorectal tumors:Correlation with tumor angiogenesis[J].Dig Liver Dis,2010,42(1):20.

[7]王魯建,孫麗梅.肺癌組織中Cox-2和Bcl-2蛋白的相關(guān)性及對預(yù)后的影響[J].中國組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志,2007,16(3): 308-312.

[8]Gandara DR,Kawaguchi T,Crowley J,et al.Japanese-US commonarm analysis of paclitaxel plus carboplatin in advanced non-small-cell lung cancer:a model for assessing population-related pharmacogenomics[J].Clin Oncol,2009,27(21):3540-3546．

[9]Rosell R,Cobo M,Isla D,et al.ERCC1 mRNA-based randomized phaseⅢtrial of docetaxel(doc)doublets with cisplatin(cis)or gemcitabine(gem)in stageⅣnon-small-cell Lung cancer(NSCLC)patients[J].J Clin Oncol,2005,23(suppl1):7002.

[10]Olaussen KA,Ariane D,Fouret P,et al.DNA repair by ER-CCl in Non-small-cell lung cancer and cisplatin-based adjuvant chemotherapy[J].N Engl J Med,2006,355(10):983-991.

Expression of ERCC-1 and COX-2 in non-small cell lung cancer and their clinical significance.

FAN Zhi-ming, HUANG Chao-hong,ZHENG Hong-ying,HE Hong-gui.The 422thHospital of PLA,Zhanjiang 524009,Guangdong, CHINA

ObjectiveTo investigate the expression of ERCC-1 and COX-2 in non-small cell lung cancer (NSCLC),and to analyze their correlation with the prognosis of NSCLC.MethodsImmunohistochemistry methods were used to detect the expression levels of ERCC-1 and COX-2 in 96 patients of NSCLC.The correlation between the expression of the two proteins and the clinical pathology were analyzed.ResultsThe pathologic correlation analysis between ERCC-1 and NSCLC revealed that the pathological types,TNM staging and the prognosis were related closely with the positive expression of ERCC-1 protein(P＜0.05).The pathologic correlation analysis between COX-2 and NSCLC showed that the pathological types and differentiation degree were related closely with the positive expression of COX-2 protein,P＜0.05.No correlation was found between the expression of ERCC-1 protein and COX-2 protein.ConclusionCOX-2 and ERCC-1 proteins have different degree of expression in NSCLC.Detecting the expression levels of COX-2 and ERCC-1 is of certain value in the prognosis of NSCLC.

ERCC-1;COX-2;Non-small cell lung cancer

R734.2

A

1003—6350(2012)12—001—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2012.12.001

2012-02-11)

樊志明(1971—)，男，湖北省咸寧市人，主治醫(yī)師，學(xué)士。