虎藻脂肝消膠囊對非酒精性脂肪性肝病大鼠脂質過氧化及胰島素抵抗的影響*

蘇娟萍 馮瑪莉 靳桂春

山西省中醫院脾胃病科 (山西太原，030012)

非酒精性脂肪性肝病 (non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)是指除外酒精和其他明確的損肝因素所致的，以彌漫性肝細胞大泡性脂肪變、伴或不伴炎癥為主要特征的臨床病理綜合征。NAFLD雖通常被認為是一種良性及靜止的病變，但可在較短期內發展為不可逆的肝損害，同時還可能是代謝綜合征的原發疾病。近年來，NAFLD的發病率和檢出率日漸增多，其肝纖維化的發生率高達25%，且約1.5% ～8%的患者可進展為肝硬化［1］，在總人群中的患病率為15% ～30%左右，已成為一種全球性的疾病［2］。目前西藥治療以降脂及保肝藥為主，但缺乏針對性治療藥物。虎藻脂肝消膠囊為筆者臨床經驗方，多年的臨床應用顯示其具有良好療效。為進一步評價該藥物治療NAFLD的作用，為其臨床用藥提供依據，特對此復方制劑進行了實驗研究。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥物 虎藻脂肝消膠囊 (由虎杖、海藻、黃芪、決明子、黃柏、赤芍等藥物組成)，山西省中醫藥研究院制劑室提供。用時以蒸餾水分別配制成濃度為0.188g/ml、0.375g/ml、0.75g/ml的混懸液。多烯磷脂酰膽堿膠囊 (易善復)，購自賽諾菲安萬特 (北京)制藥有限公司，批號D9098，用時以蒸餾水配制成濃度為11.4mg/ml的溶液。

1.1.2 試劑 花生油為市售，山東魯花集團生產;脫氧膽酸鈉、膽固醇購自天津大茂化學試劑廠 (批號：20090928、20100126);SOD、MDA試劑盒購自南京建成生物工程研究所，批號：20100302、20100302;葡糖糖試劑盒購自北京北化康泰臨床試劑有限公司，批號：200910628;胰島素試劑盒購自北京普爾偉業生物科技有限公司，批號：20100326。

1.1.3 動物 大鼠，SD種，清潔級，雌雄各半，體重 (200±10)g，山西省中醫藥研究院實驗動物室提供，合格證號：SXCK(晉)-0002。

1.1.4 主要儀器 KDC-1044低速離心機 (科大創新股份有限公司中佳分公司);HH-W21電熱恒溫水箱 (上海醫用恒溫設備廠);BP310P電子天平 (德國賽多利斯公司生產);UV3000紫外可見光分光光度計 (日本島津);DXC-800全自動生化分析儀 (美國貝克曼庫爾特有限公司);XTL-2000光學顯微鏡 (上海宙山精密儀器廠)。

1.2 實驗方法

1.2.1 動物分組及模型建立 取大鼠62只，適應性喂養1周后，隨機分為正常對照組、模型對照組、陽性 (多烯磷脂酰膽堿)對照組、虎藻脂肝消膠囊低劑量組、中劑量組、高劑量組 (簡稱治療低、中、高劑量組)共6組，除模型對照組12只外，其余每組10只。上述分組中正常對照組10只大鼠給予正常飼料，自由飲水。其余52只大鼠給予180g/L濃度的蔗糖水自由飲用，第1周每日以10ml/kg高脂乳劑灌胃，從第2周調整至20ml/kg，正常對照組大鼠每日以等量蒸餾水灌胃。高脂乳劑的制備參考文獻報道［3］，其主要成分質量分數為0.17的花生油、0.07的膽固醇、0.07的蔗糖、0.04的全脂奶粉及0.004的膽酸鹽。持續12周后，隨機取模型對照組大鼠兩只行肝臟病理組織學檢查，證實其發生輕～中度脂肪變性，造模完成。

1.2.2 給藥 造模完成后，低、中、高劑量組大鼠每日分別以0.188g/ml、0.375g/ml、0.75g/ml濃度的虎藻脂肝消膠囊混懸液各20ml/kg灌胃。陽性對照組大鼠每日給予11.4mg/ml濃度多烯磷脂酰膽堿20ml/kg灌胃。模型對照組和正常對照組每日以等量蒸餾水灌胃。均自由飲用自來水，共持續6周。

1.2.3 指標檢測 動物殺檢前禁食12小時稱體重，10%的烏拉坦溶液麻醉后腹主動脈取血，離心分離血清，-4℃保存用于生化指標檢測。按照試劑盒說明書要求，采用TBA法測定MDA，氧化酶法測定SOD、FBG，放免法測FINS。以空腹血糖 (FBG) ×空腹胰島素 (FINS)/22.5計算胰島素抵抗指數 (HOMA-IR)［4］。

1.3 統計學方法 采用SPSS 11.5進行數據分析。計量資料采用t檢驗，等級資料采用秩和檢驗。以P＜0.05為具有統計學意義。

2 結果

2.1 虎藻脂肝消膠囊對大鼠血清SOD、MDA的影響 模型組SOD較正常組顯著降低而MDA顯著升高 (P＜0.01)，提示模型組大鼠體內清除自由基的能力下降，且機體細胞受到自由基的攻擊。中、高劑量組大鼠SOD與模型組相比顯著升高，(P＜0.05和P＜0.01);而陽性對照組及低、高劑量組大鼠MDA與模型組相比顯著降低 (P＜0.05)。虎藻脂肝消膠囊對大鼠體內自由基的清除有顯著改善作用。見表1。

表1 各組大鼠血清SOD、MDA檢查結果比較(±s)

表1 各組大鼠血清SOD、MDA檢查結果比較(±s)

與模型對照組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;與正常對照組比較，△P ＜0.05，△△P ＜0.01; 與陽性對照組比較，●P ＜0.05

組別 n SOD(U/ml) MDA(nmol/L)正常對照組 10 163.226±8.851＊＊● 4.760±2.000＊＊模型對照組 9 141.541 ±18.645△△● 7.300 ±2.343△△●陽性對照組 9 152.957±14.353△ 5.333±2.095*治療低劑量組 10 154.958 ±24.464 5.220 ±2.662*治療中劑量組 10 159.677 ±19.291* 5.660 ±2.690治療高劑量組 9 162.437±11.330＊＊ 5.333±2.435*

2.2 虎藻脂肝消膠囊對大鼠血糖、血清胰島素及胰島素抵抗指數的影響 模型組大鼠在FBG、FINS及HOMA-IR 3項指標上與正常對照組比較差異均有顯著性意義 (P＜0.01)，提示存在胰島素抵抗。低劑量組大鼠FBG與模型組比較顯著降低 (P＜0.05);FINS改善以陽性對照組及高劑量組明顯 (P＜0.01);而陽性對照組、低劑量組、高劑量組大鼠在HOMA-IR的改善上，與模型組比較差異具有顯著性意義 (P＜0.01)，提示對模型大鼠的胰島素抵抗有較好的改善作用。見表2。

表2 各組大鼠血清FBG、FINS、HOMA-IR檢查結果比較(±s)

表2 各組大鼠血清FBG、FINS、HOMA-IR檢查結果比較(±s)

與模型對照組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;與正常對照組比較，△P＜0.05，△△P ＜0.01; 與陽性對照組比較，●P ＜0.05，●●P ＜0.01

組別 n FBG(mmol/L)FINS(mmol/L)HOMA-IR正常對照組 10 3.164 ±0.870＊＊●●23.659 ±1.855＊＊●●3.336 ±0.991＊＊●模型對照組 9 4.687 ±1.497△△33.333 ±6.334△△●●6.722 ±1.586△△●●陽性對照組 9 5.180 ±1.177△△19.542 ±3.662＊＊△△4.558 ±1.656＊＊△治療低劑量組 10 3.497±1.142＊●●31.916 ±6.276△△●●4.818 ±1.321＊＊△治療中劑量組 10 4.440±1.047△△28.847 ±6.357△●●5.689 ±1.764△治療高劑量組 9 4.687±1.471△△21.326 ±6.286＊＊4.325 ±1.536＊＊

3 討論

由于NAFLD影響因素眾多，發病機制不明確，目前尚無治療NAFLD的特效藥物。1998年Day［5］提出了著名的“二次打擊”學說，認為胰島素抵抗 (IR)在NAFLD的發病機制中占有重要地位。研究提示，NAFLD可能是促炎和抑炎因子在IR初次打擊的基礎上觸發或抑制氧化應激和肝內脂質過氧化不平衡，對細胞進行二次打擊的結果［6］。

氧自由基有較強的生物學活性，能與生物膜上的多價不飽和脂肪酸作用，發生脂質過氧化反應，造成細胞及亞微結構的損害。自由基造成生物體系損傷的重要因素是產生脂質過氧化物，其中最主要的是MDA。脂質過氧化終產物MDA可形成蛋白加合物，刺激機體產生抗體，介導免疫損傷。SOD通過歧化作用清除體內氧自由基，減少脂質過氧化反應，維持生物膜的正常結構和功能，在自由基的產生與清除平衡中起著重要作用。

Mattews等［4］認為，基礎狀態下血糖和胰島素的自我平衡是胰島β細胞、肝臟、外周組織三者相互作用的結果，從而提出評估IR的數學模型-自我平衡模型分析法 (Homeostasis model assessment，HOMA)：IR=(FBG × FINS)/22.5。有研究結果顯示，其與公認的評價IR的“金指標”C-葡萄糖胰島素鉗夾技術 (glucose insulin clamp technique，CLAMP)相關性好［7］。

在前期的研究中，已證實虎藻脂肝消膠囊可降低大鼠血清中TG、TC、LDL-C水平，改善大鼠肝細胞脂肪變性程度，減輕脂肪對肝細胞造成的水腫以及炎癥損害［8］。本實驗提示其治療NAFLD的作用可能與其減輕NAFLD患者胰島素抵抗水平、增強機體氧自由基清除能力有關，但其具體機制尚需進一步深入研究。

［1］曾民德.脂肪肝［J］.中華消化雜志，1999，19(2)：120-122.

［2］石繡江，王曉忠，曾斌芳.非酒精性脂肪肝的研究進展 ［J］.新疆中醫藥，2010，28(2)73-75.

［3］張蕾，戴敏，陳禮明，等.高脂高糖誘導脂肪肝胰島素抵抗大鼠模型的建立［J］.中國藥理學通報，2009，25(6)：825-828.

［4］MATTEWS DR，HOSKER JP，RUDENSKI AS，et al.Homeostasis model assessment：insulin resistance and beta-cell function form fasting plasma.glucose and insulin concentrations in man［J］.Diabetologia，1985，28(7)：412-419.

［5］DAY C，JAMES O.Steatohepatitis：A tale of two “hits”? ［J］.Gastoenterology，1998，114(4)：842-845.

［6］YCON D，LEE SH，PARK HS，et al.Hypoadipo-ncctincmia and insulin resistance arcassociated with nonalcoholic fatty liver disease［J］.Korean Med Sci，2005，20(3)：421-426.

［7］程瑩，薛剛，胡曉莉，等.幾種簡易胰島素抵抗檢測方法的探討［J］.第三軍醫大學學報，2004，26(3)：261-262.

［8］蘇娟萍，馮瑪莉，靳桂春，等.虎藻脂肝消膠囊對大鼠非酒精性脂肪肝的實驗研究.山西中醫，2011，27(11)：45-48.