氣虛體質及CYP2E1基因多態性與抗結核藥物性肝損傷的關系

周 敏 毛敏杰 朱 敏 李鳧堅 尹良勝 李 鋒

杭州市紅十字會醫院結核科 (浙江杭州，310003)

結核病治療的特點是療程長、多種藥物聯合使用，易造成藥物性肝損傷。我國結核病疫情嚴重，抗結核藥物所致肝損傷的發生率高，多篇文獻報道，我國抗結核藥物性肝損傷的發生率居各類藥物性肝損傷的首位［1，2］，嚴重影響結核病的控制，因此，需積極采取有效的防治措施，減少肝損傷的發生，使治療得以順利進行。我們在臨床工作中發現，抗結核治療中是否出現肝損傷，與先天稟賦、體質差異密切相關。另有研究表明CYP2E1基因多態性與抗結核藥物性肝損傷密切相關，其中CI/CI基因型是其獨立危險因素［3］。因此，本研究擬分析抗結核藥物性肝損傷患者常見體質狀況及其CYP 2E1基因多態性分布頻率，以探討該病的早期防治措施。

1 資料與方法

1.1 一般資料 研究對象均為杭州市紅十字會醫院結核科住院患者，以其中抗結核治療出現藥物性肝損傷的100例患者為肝損傷組，以該院同期抗結核病治療無肝損傷的100例患者為對照組。診斷及納入標準：依據藥物性肝病的診斷標準［4］及國際會議 (RUCAM)提供的評價方法［5］，明確診斷抗結核藥物性肝損傷的患者。結核病診斷依據1999年我國制定的結核病分類診斷標準［6］。

1.2 研究方法 ①中醫體質學分型 采用目前較為公認的王琦教授中醫體質辨識量表，劃分為平和質、特稟質、氣虛質、陽虛質、陰虛質、痰濕質、濕熱質、瘀血質和氣郁質9型進行研究。②CYP 2E1基因多態性檢測 DNA提取：分別取外周血標本1ml，采用血基因組DNA小量提取試劑盒 (AXYGEN生物技術有限公司)提取 DNA，按試劑盒說明書操作，-20℃保存。PCR擴展：P450-2E1 Rsa I目的片段上游 引 物 CYP2E1-F1：5'-AGCTGACTCTGCTGCTCTCAA-3'，下游引物CYP2E1-R1：5'-GAGCTCCACATTGACTAGCTTCT-3'。PCR 反應體系 20μl：Taq EX TM(5U/μl)1.25U，模板 200ng，10 × EX Taq Buffer 2μl，dNTP(2.5mM)2μl，上 游 引 物 CYP2E1-F1(20μM)0.15μl，下 游 引 物 CYP2E1-R1(20μM)0.15μl，雙蒸水補足至 20μl。PCR 擴展條件：94℃預變性5分鐘，94℃變性30秒，54℃退火30秒，72℃延伸45秒，30個循環，最后72℃延伸5分鐘。酶切及電泳：PCR產物經PCR清潔試劑盒 (AXYGEN生物技術有限公司)純化后采用Rsa I酶切，酶切體系20μl(10 ×Buffer T 2μl，0.1%BSA 2μl，PCR產物1μg，Rsa I酶 1μl及雙蒸水)，37℃酶切 4小時。酶切樣品經2%瓊脂糖凝膠電泳，5V/cm電壓，EB染色，在凝膠成像系統下觀察。

1.3 統計學方法 數據采用SPSS 16.0統計軟件進行處理。組間比較采用單因素方差分析;組間頻率的比較采用χ2檢驗。

2 結果

2.1 體質類型分布頻率比較 肝損傷組患者氣虛質分布頻率明顯高于對照組 (P＜0.05)，結果見表1。

表1 兩組患者體質類型分布頻率比較

2.2 CYP 2E1基因型在兩組間分布頻率比較 見表2。肝損傷組患者中Rsa I cl/cl基因型65例 (65%)，c1/c2基因型 32例 (32%)，c2/c2基因型 3例(3%)，c1和c2等位基因頻率分別為0.81和0.19;對照組患者Rsa I cl/cl基因型51例 (51%)，c1/c2基因型45例 (45%)，c2/c2基因型4例 (4%)，cl和c2等位基因頻率分別為0.735和0.265。肝損傷組 cl/cl基因型分布頻率明顯高于對照組 (χ2值7.686，P＜0.05);cl/c2和c2/c2基因型的分布頻率在兩組中差異無統計學意義 (P＞0.05)。

表2 兩組患者CYP2E1基因型分布頻率比較［n(%)］

2.3 氣虛體質類型患者CYP 2E1基因型分布頻率比較 見表3。由于9種類型中醫體質在肝損傷組及對照組患者中均有體現，影響不同體質患者樣本量分布，氣虛體質標本量少，與CYP 2E1基因型分布的關聯及其差異不能進行有意義的比較。

表3 氣虛體質患者CYP2E1基因型分布頻率比較［n(%)］

3 討論

3.1 氣虛體質研究現狀 氣虛體質是以體質要素中氣的虛弱、機體臟腑功能狀態低下為主要特征的一種體質狀態。作為常見體質分型的一種，氣虛體質在歷代醫家的論述中可找到諸多依據，葉天士在《臨證指南醫案》中所謂之“虛人”、 “弱質”、 “體質氣弱”、“體質本怯”、“氣虛之質”、“元氣素虧之體質”皆指的是氣虛體質。《靈樞·逆順肥瘦》認為瘦人有“易脫于氣”的體質特點，屬于潛在性氣虛體質。現代亦有許多學者將氣虛體質劃為體質類型的一種，如：王琦將中醫體質分為正常質、陰虛質、陽虛質、痰濕質、濕熱質、氣虛質、瘀血質、氣郁質、特異質9型［7］。本次研究表明，藥物性肝損傷患者氣虛體質分布頻率明顯升高，氣虛體質與肝損傷密切相關，此次體質問卷調查表明，該體質主要體現為氣虛能量不足，患者在肢體活動上表現為不喜歡運動，在心理上表現為對外界事物缺乏興趣，對情緒的控制能力不足，情緒容易波動，影響肝疏泄功能而引起病變。另外，抗結核治療過程中亦可形成氣虛體質。《素問·刺志論》云：“谷盛氣盛，谷虛氣虛。”說明了飲食水谷缺乏，可導致氣的生成減少，是形成氣虛體質的原因之一。《靈樞·壽夭剛柔論》中言：“憂恐忿怒傷氣，氣傷臟，乃病臟”。說明精神刺激也可成為氣虛體質的成因之一。臨床上，抗結核治療過程中常導致胃腸道副反應，出現惡心嘔吐、納食下降，氣血生化不足，且抗結核治療療程長，長期憂愁恐懼，超過了臟腑正常的調控能力，就會耗傷臟腑氣血，形成氣虛體質。本次研究表明，氣虛體質是抗結核藥物性肝損傷形成的內在因素，且兩者相互影響，為抗結核藥物導致肝損傷的防治提供了一定的理論依據。

3.2 基因多態性與體質 人類基因組學研究顯示，在不同人群中存在著基因多態性差異，并且表現為對疾病的不同易感性。而中醫體質學說認為，體質決定著病證種類的傾向性，又是決定病性、病位、病程階段和病變趨勢的重要因素。因此，可從基因表型的定位確定疾病相關基因為切入點，詮釋體質與疾病易感性的有關機理。本研究結果表明，肝損傷組CYP 2El RsaI c1/c1基因型明顯高于對照組，說明CYP2El基因多態性與抗結核藥物性肝損傷密切相關，c1/c1基因型是結核病患者治療過程中出現肝損傷的高危因素。但因受樣本量限制，對氣虛體質與CYP 2El基因型的關聯性不能進行有意義的比較，進一步研究中需增加標本量及比較兩者的差異及關聯，利用基因組學的研究結果從微觀角度探求體質類型產生的遺傳基礎。

3.3 抗結核藥物性肝損傷的防治 體質具有相對穩定性，在一定范圍內通過調治，可使體質狀況趨于正常。氣虛體質是抗結核藥物性肝損傷患者最常見的體質類型，是該疾病形成的內在基礎，針對氣虛體質，給予恰當的體質調養，對預防肝損傷有重要作用。“勞者溫之，損者益之”，為氣虛體質的治療確立了總的原則，醫學大家李東垣創立甘溫除大熱之法及益氣補中之方，亦是對氣虛體質治療學的發展，明代薛己指出“勞傷者，過于勞役，損傷元氣，脾胃虛衰，不任風寒，故昏冒也，用補中益氣湯。”為勞傷日久之氣虛體質提供了治法。我們臨床上針對氣虛體質，重視調理脾胃，運用補氣健脾方法，積極改善患者的氣虛體質，減少藥物性肝損傷的發生率，有利于未病先防，體現“治病求本”的治療原則。另外，氣虛患者情志方面常表現為情緒低沉、抑郁。《素問·上古天真論》云“恬淡虛無，真氣從之”，在養生延壽方面非常重視七情調暢，以促進健康體質的形成。因此，對結核病患者應進行心理調節，多給予關心、開導，增強其對結核病的認識，消除其對結核病的恐懼心理，樹立積極樂觀的治病態度。這有助提高患者接受規范治療的依從性及治愈率，減少藥物副反應發生，有利于結核病疫情的控制。

［1］周世明，賈杰.696例藥物性肝損傷藥物的臨床分析 ［J］.藥物與臨床，2007，4(6)：442-443.

［2］王繼美，張松貞.2942例藥物性肝損傷文獻分析 ［J］.藥物流行病學雜志，2009，12(2)：101-104.

［3］LEE SW，CHUNG LS，HUANG HH，et al.NAT2 and CYP2E1 polymorphisms and susceptibility to first-line anti-tuberculosis drug-induced hepatitis［J］.Int J Tuberc Lung Dis，2010，14(5)：622-626.

［4］中華醫學會消化病學分會肝膽疾病協作組.急性藥物性肝損傷診治建議 (草案) ［J］.中華消化雜志，2007，27(11)：765-767.

［5］DANAN G，RENICHOU C.Causality assessment of adverse reactions to drugs-1.A novel method based on the conclusions of international consensus meetings ：application to drug-induced liver in juries［J］.J Clin E pidemiol，1 993，46：1 323-1330.

［6］葉任高.內科學［M］.第六版.北京：人民衛生出版社，2004：39-57.

［7］王琦.9種基本中醫體質類型的分類及其診斷表述依據 ［J］.北京中醫藥大學學報，2005，28(4)：1-8.