促進(jìn)大鼠傷口愈合中藥組方的篩選

于文會(huì)，張 潔，陸子音，韓名書(shū)，康 欣

（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，哈爾濱 150030）

中藥外用治療創(chuàng)傷，具有控制局部感染、保護(hù)創(chuàng)面、加快創(chuàng)傷愈合和增加創(chuàng)口愈合強(qiáng)度的作用[1]。中藥在治療疾病時(shí)，使用復(fù)方，很少用單味中藥，這是傳統(tǒng)的用藥方法，臨床效果顯著。為了篩選中藥復(fù)方制劑促進(jìn)創(chuàng)傷愈合的作用，試驗(yàn)選取血竭、乳香、沒(méi)藥等13味中藥，根據(jù)活血化瘀、防腐生肌、消腫止痛、燥濕斂瘡等組成原則，組成三個(gè)藥方，根據(jù)其對(duì)創(chuàng)傷的愈合率、外周血液及抑菌等指標(biāo)的影響，篩選出適合臨床應(yīng)用的中藥方劑，為獸醫(yī)臨床外用中藥的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 中藥

血竭、乳香、沒(méi)藥、紫草、冰片、煅石膏等13味藥物（購(gòu)自哈爾濱藥材公司），象皮生肌膏（由天津達(dá)仁堂京萬(wàn)紅有限公司生產(chǎn)）。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

Wistar大鼠60只，體重（250±25）g，購(gòu)自哈爾濱醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁殖中心。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 中藥組方及制劑

Ⅰ號(hào)藥方：血竭、乳香、紫草、冰片、煅石膏等；Ⅱ號(hào)藥方：血竭、乳香、沒(méi)藥、大黃、冰片、煅石膏等；Ⅲ號(hào)藥方：血竭、乳香、沒(méi)藥、黃柏、冰片、煅石膏等。

生肌膏的制備參考創(chuàng)傷膏的加工工藝[2]。滅菌后4℃冰箱保存。

1.2.2 試驗(yàn)分組及用藥方法

Wistar大鼠（250±25）g 50只，隨機(jī)分五組，每組10只，中藥組分為A組、B組、C組，陽(yáng)性對(duì)照組（D）和空白對(duì)照組（E）。用乙醚麻醉后，在大鼠背部?jī)蓚?cè)剃毛，用自制打孔器造圓形缺損創(chuàng)，缺損創(chuàng)損傷至筋膜深層。傷口直徑2 cm。造模后的大鼠分籠飼養(yǎng)，A組、B組、C組分別在傷口上涂Ⅰ號(hào)藥膏、Ⅱ號(hào)藥膏、Ⅲ號(hào)藥膏，每天1次；D組在傷口涂象皮生肌膏，每天1次；E組在傷口涂2%碘酊，每天1次。

1.2.3 一般觀察

用藥后1、3、7、14 d，觀察大鼠的傷口愈合情況，并計(jì)算傷口的愈合率。

1.2.4 外周血白細(xì)胞、血小板的檢測(cè)

用藥后各組大鼠斷尾采血50 μL，用全自動(dòng)血球計(jì)數(shù)儀計(jì)檢測(cè)白細(xì)胞數(shù)、血小板的數(shù)量。

1.2.5 血液中透明質(zhì)酸（HA）含量的檢測(cè)

用藥后1、3、7、14 d，大鼠眼球采血，分離血清。采用放射免疫分析法，以第二抗體作為分離劑。按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作方法檢測(cè)血清中透明質(zhì)酸的含量。

1.2.6 體外抑菌試驗(yàn)

將Ⅰ號(hào)藥膏、Ⅱ號(hào)藥膏、Ⅲ號(hào)藥膏、象皮生肌膏分別均勻地涂于直徑為1.0 cm的滅菌的濾紙片上。用無(wú)菌鑷子取藥敏紙片貼在接種細(xì)菌平板表面。每個(gè)平板分別貼上涂有Ⅰ號(hào)藥膏、Ⅱ號(hào)藥膏、Ⅲ號(hào)藥膏、象皮生肌膏濾紙片，濾紙片每張紙片間距不少于25 mm，紙片中心距平皿邊緣不少于15 mm。在37℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。以抑菌環(huán)直徑（cm）評(píng)定其抗菌作用（根據(jù)K-B瓊脂法，加以改良）。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同中草藥組方對(duì)大鼠傷口愈合影響

由表1可見(jiàn)，創(chuàng)傷后的3d，各組之間愈合率差異不顯著；但在7d、14d，Ⅰ號(hào)藥膏、Ⅱ號(hào)藥膏、Ⅲ號(hào)藥膏、象皮膏與未給中藥（空白對(duì)照）組相比，創(chuàng)傷愈合率均有顯著增加，Ⅰ號(hào)藥膏、Ⅱ號(hào)藥膏與未給中藥（空白對(duì)照）組相比，差異顯著（P＜0.05）；Ⅲ號(hào)藥膏、象皮膏與未給中藥（空白對(duì)照）組相比，差異極顯著（P＜0.01）。表明在創(chuàng)傷愈合率方面，Ⅲ號(hào)藥膏、象皮膏優(yōu)于Ⅰ號(hào)藥膏、Ⅱ號(hào)藥膏。

表1 不同組在3、7、14 d創(chuàng)面愈合率比較Table 1 Wound healing rate in different groups （%）

2.2 不同中草藥組方對(duì)大鼠外周血液白細(xì)胞的影響

由表2可見(jiàn)，實(shí)驗(yàn)1 d，各組之間白細(xì)胞數(shù)量差異不顯著（P＞0.05）。3～14d，大鼠外周血白細(xì)胞，Ⅰ號(hào)藥膏、Ⅱ號(hào)藥膏、Ⅲ號(hào)藥膏、象皮膏與不給中藥（空白對(duì)照）組相比，均差異顯著（P＞0.05）或差異極顯著（P＜0.01）。表明Ⅰ號(hào)藥膏、Ⅱ號(hào)藥膏、Ⅲ號(hào)藥膏及象皮膏均能誘導(dǎo)外周血白細(xì)胞增加，有利于創(chuàng)口的炎性凈化。

2.3 不同中草藥組方對(duì)大鼠外周血液血小板的影響

由表3可見(jiàn)，在試驗(yàn)1 d，各中藥組的大鼠外周血小板數(shù)與未給中藥（空白對(duì)照）組相比，血小板數(shù)差異不顯著（P＞0.05）。但在試驗(yàn)3～14 d， Ⅲ號(hào)藥膏、象皮膏優(yōu)于Ⅰ號(hào)藥膏、Ⅱ號(hào)藥膏。表明Ⅲ號(hào)藥膏和象皮膏更利于創(chuàng)傷愈合過(guò)程的止血。

表 2 外周血液白細(xì)胞數(shù)量的動(dòng)態(tài)變化（n=5）（X±S）細(xì)胞數(shù)（×109個(gè)·mL-1）Table 2 Dynamic changes of white blood cell count in the peripheral blood

表 3 外周血液血小板數(shù)量的動(dòng)態(tài)變化（n=5）（X±S）細(xì)胞數(shù)（×1012個(gè)·mL-1）Table 3 Dynamic changes of blood platelet count in the peripheral blood

2.4 不同中草藥組方對(duì)血清中透明質(zhì)酸含量影響

由表4可以看出，試驗(yàn)1 d，各中藥組的大鼠血液透明質(zhì)酸含量與未給中藥（空白對(duì)照）組相比，血小板數(shù)差異不顯著（P＞0.05）。但用藥后3～14 d，透明質(zhì)酸含量變化是：Ⅲ號(hào)藥膏、象皮膏優(yōu)于Ⅱ號(hào)藥膏；Ⅱ號(hào)藥膏優(yōu)于Ⅰ號(hào)藥膏。表明Ⅲ號(hào)藥膏和象皮生肌膏更有利于創(chuàng)傷發(fā)生后肉芽組織的增生。

2.5 不同中藥組方的抑菌效果

從表5抑菌結(jié)果看，Ⅰ號(hào)藥膏、Ⅱ號(hào)藥膏、Ⅲ號(hào)藥膏、象皮生肌膏對(duì)常見(jiàn)的化膿菌大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌、綠膿桿菌均有不同的抑菌效果，抑菌效果最好的是Ⅲ號(hào)藥膏。

表5 不同中藥組方的體外抑菌效果Table 5 Effect on vitrro bacteriostasis experiment of various Chinese medicines complex prescription

3 討論與結(jié)論

創(chuàng)傷愈合是目前獸醫(yī)外科領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)、難點(diǎn)，中藥在促進(jìn)創(chuàng)傷愈合方面有獨(dú)特效果。方中的紫草、當(dāng)歸、白芷蒲、公英、三七等中藥在一些促進(jìn)創(chuàng)傷愈合的方中出現(xiàn)[3-4]。通過(guò)試驗(yàn)，Ⅰ號(hào)藥膏、Ⅱ號(hào)藥膏、Ⅲ號(hào)藥膏與象皮生肌膏在創(chuàng)面治療過(guò)程中，均具有保持創(chuàng)面濕潤(rùn)、肉芽組織出現(xiàn)的早、生長(zhǎng)快等現(xiàn)象；14 d創(chuàng)面完全愈合，留下疤痕的僅小，傷口愈合的周?chē)行旅L(zhǎng)出。三組藥方中均有血竭，血竭能顯著促進(jìn)成纖維細(xì)胞的增殖，促進(jìn)創(chuàng)傷愈合[5]。通過(guò)三個(gè)中藥組方療效比較，效果最好的為Ⅲ號(hào)藥膏。

在創(chuàng)傷修復(fù)過(guò)程中，創(chuàng)傷感染是影響創(chuàng)傷修復(fù)的重要因素。體外抑菌試驗(yàn)，Ⅲ號(hào)藥膏對(duì)綠膿桿菌抑菌效果最好，對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌有抑菌效果；而象皮生肌膏僅對(duì)金黃色葡萄球菌有明顯的抑菌效果。這與連翹對(duì)金黃色葡萄球菌、化膿性鏈球菌均有顯著抑菌作用有關(guān)[6]，與蒲公英對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌抑菌作用有關(guān)[7]。外周白細(xì)胞增多是最常見(jiàn)的炎癥反應(yīng)。外周血白細(xì)胞的聚集，能夠促進(jìn)創(chuàng)傷的炎性凈化。三組藥膏均有不同程度的誘導(dǎo)高白細(xì)胞和血小板向外周血集聚的作用。

透明質(zhì)酸在創(chuàng)傷修復(fù)中能夠促進(jìn)組織快速生長(zhǎng)重要的細(xì)胞外基質(zhì)，透明質(zhì)酸有利于細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)和增殖，具有提高修復(fù)組織中Ⅲ型膠原含量的作用，而Ⅲ型膠原含量越高，瘢痕形成越少[8]。透明質(zhì)酸具有高粘彈性，通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞的通透性，降低血管異常高通透性，阻止病原微生物的入侵[9]。肉芽組織基質(zhì)中富含透明質(zhì)酸，這種富含透明質(zhì)酸的基質(zhì)可促進(jìn)細(xì)胞遷移到暫時(shí)性受損的基質(zhì)中，促進(jìn)細(xì)胞增殖和肉芽組織基質(zhì)的形成[10]。從空白對(duì)照組和各用藥組創(chuàng)面滲液中透明質(zhì)酸含量的動(dòng)態(tài)變化看，各組均呈先上升繼而下降的趨勢(shì)。Ⅰ號(hào)藥膏、Ⅱ號(hào)藥膏、Ⅲ號(hào)藥膏與象皮生肌膏的透明質(zhì)酸含量繼續(xù)上升且上升明顯，下降緩慢。表明用藥組均能提高透明質(zhì)酸含量并維持較高水平的作用趨勢(shì)，能夠有效地促進(jìn)肉芽組織的增生，調(diào)節(jié)炎性反應(yīng)，促進(jìn)創(chuàng)傷愈合。

試驗(yàn)通過(guò)對(duì)A組、B組、C組、D組大鼠的外周雪白細(xì)胞、血小板、透明質(zhì)酸及體外抑菌試驗(yàn)進(jìn)行綜合分析，表明Ⅲ號(hào)藥膏對(duì)創(chuàng)傷愈合效果最好。

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