四種維藥對常見呼吸道病毒作用的體外實驗研究

李際強 王懷振 買買提艾力·吐爾遜 李 黎 劉 妮 張奉學

(1.廣州中醫藥大學第二附屬醫院，廣東 廣州 510120;2.新疆喀什地區第一人民醫院，新疆 喀什 844000;3.廣州中醫藥大學熱帶醫學研究所，廣東 廣州 510405)

維吾爾醫藥是祖國醫藥學不可分割的組成部分，也是伊斯蘭醫藥學的重要組成部分。幾千年來維吾爾族人民在防病治病的過程中，積累了豐富的經驗，尤其是其在治療感冒方面，現已有多種維藥成藥上市，應用于臨床顯示了較好的療效。隨著呼吸道傳染病的多發與流行，該類維藥是否可以用于治療病毒性呼吸道傳染病，除臨床研究外，尚需進一步提供實驗室依據。本文選取4種維藥進行體外抗常見呼吸道病毒的研究，現將研究結果報道如下。

1 材料

1.1 藥物來源:復方祖帕糖漿由喀什地區維吾爾醫院提供，為院內制劑，產品批號:201201006;西帕依固齦液由新疆奇康哈博維藥有限公司提供，產品批號:11148;祖卡木顆粒由新疆奇康哈博維藥有限公司，產品批號:111053;感通丹(史秘感通丹)由新疆薩達凱特生物科技有限公司、奇康哈博制藥有限公司提供，產品批號:110906。實驗時將復方祖帕糖漿、西帕依固齦液取原液進行稀釋，祖卡木顆粒2.55g加純水5ml，史秘感通丹稱5.09g加純水5ml。煮沸半小時進行滅菌處理，1.5ml管分裝4℃冰箱，祖卡木顆粒冷卻后有大量黃色沉淀析出，再加熱不能溶解。

1.2 毒株與細胞:甲1型流感病毒、鼻病毒、腺病毒3型、呼吸道合胞病毒，均為廣州中醫藥大學熱帶醫學研究所病毒室凍存。甲1型流感病毒FM1株于狗腎細胞(MDCK)傳代，以細胞病變及雞紅血球血凝法來判斷其滴度;呼吸道合胞病毒long株引自美國典型培養物收藏中心(ATCC，VR-26)，并于人肺癌細胞(A549)中傳代擴增，并進行測定;腺病毒3型引進自ATCC(VR-3);鼻病毒R14型引進自ATCC(VR-284)均于人肺二倍體細胞(HEL)細胞上傳代，滴定與檢測，以上4種病毒均在35℃，5%CO2條件下培養。MDCK、HEL、A549等細胞均由廣州中醫藥大學熱帶醫學研究所病毒室凍存。

2 方法［1］

2.1 藥物毒性試驗:在96孔培養板內，每96孔培養板內，每孔加入(5×104～2×103/ml)的細胞(HEL、MDCK、A549)，37℃ 5%CO2培養，待細胞長成單層后，分別加入不同濃度的4種藥物。逐日觀察細胞病變，培養4 d后則終止實驗，以細胞不出現病變的最小稀釋度為該藥對細胞無毒界限。試驗時設陽性藥對照、正常細胞對照。

2.2 藥物對病毒致細胞病變的體外抗病毒作用:分別加入無毒濃度下的4種藥物，分4個濃度，每濃度4孔。其中2孔作為藥物對照，2孔攻擊100 TC ID50的病毒，100μl/孔。33℃5%CO2培養，每天在倒置顯微鏡下觀察細胞病變(CPE)并記錄。試驗時設陽性藥對照、正常細胞對照及病毒對照。當病毒對照出現“++”時終止實驗。細胞出現病變的程度按以下6級標準記錄:一為細胞生長正常，無病變出現;±為細胞病變少于整個單層細胞的10%;+為細胞病變約占整個單層細胞的25%;++為細胞病變約占整個單層細胞的50%;+++為細胞病變約占整個單層細胞的75%:++++為細胞病變約占整個單層細胞的75%以上。

3 結果

3.1 藥物的細胞毒性試驗結果見表1:藥物在以下表中濃度時對細胞無毒性，在該濃度以上表現為細胞空泡，破碎等毒性特征。

表1 藥物在不同細胞上最大無毒濃度結果

3.2 藥物對病毒致細胞病變的體外抗病毒作用:史秘感通丹在無毒濃度50mg/ml下能完全抑制流感病毒甲型FM1株，西帕依固齦液在無毒濃度1:200倍稀釋時能完全抑制腺病毒3型所致病變，復方祖帕糖漿、祖卡木顆粒分別在無毒濃度1:300、15.94mg/ml下能完全抑制呼吸道合胞病毒。其中抗流感病毒A型FM1株、腺病毒實驗重復2次，結果與表2一致。

表2 4種維藥不同濃度對4種呼吸道病毒致病變的抑制作用

4 討論

維吾爾族醫藥在治療感冒等常見病方面積累了較豐富的經驗，目前已出現較多的上市藥物。為了明確該類維藥是否具有抗常見呼吸道病毒作用，我們對多種維藥進行了體外抗病毒篩選，結果表明部分維藥顯示了較好的體外抗病毒作用。

感通丹，全稱為史秘感通丹，由甘草根、神香草、薄荷、大葉破布木等藥物組成，用于寒、熱引起的各種普通感冒、流行性感冒，臨床癥狀表現為頭痛、發熱、噴嚏、流涕、鼻塞、咽喉痛、全身酸痛乏力、食欲不振、咳嗽等。感通丹在無毒濃度50mg/ml下能完全抑制流感病毒A型FM1株，表明了其良好的抗流感病毒作用。

西帕依固齦液是新疆維吾爾醫學研究所在維吾爾醫學傳統秘方基礎上研制的漱口制劑，主要成分為沒食子。該藥物在臨床及實驗室研究中均表現出較好的抗細菌及抗真菌的作用［2-3］，但未見其抗病毒方面的研究，我們研究發現，西帕依固齦液在無毒濃度1:200倍稀釋時能完全抑制腺病毒3型所致病變，因此，該藥具一定的抗菌、抗病毒作用。

復方祖帕糖漿為新疆喀什地區維吾爾醫醫院的院內制劑，由神香草、新疆園棗、鐵線厥、葫蘆巴、甘松、香沒藥樹子、茴香根皮、芹菜根、騖尾根、小茴香等藥物組成，具有潤肺、納氣、止咳等作用，應用于肺炎、支氣管炎及感冒等。本研究表明，復方祖帕糖漿在1:300無毒濃度下能完全抑制呼吸道合胞病毒。

祖卡木顆粒由山柰、睡蓮花及罌粟殼等藥味的提取物組成，具有調節異常氣質、清熱、發汗、通竅等作用，用于感冒咳嗽，發熱無汗，咽喉腫痛，鼻塞流涕等。臨床報道表明，其治療兒童普通感冒快速有效，而且安全［4］。本研究表明，祖卡木顆粒在15.94mg/ml無毒濃度下能完全抑制呼吸道合胞病毒。

以上維藥顯示了一定的體外抗病毒作用，尤其是史秘感通丹抗流感病毒甲1型作用明顯，需進一步深入探討該藥物的抗流感病毒的作用機理。

［1］富杭育，盧長安，賀玉琢，等.清肺飲抗小鼠流感病毒性肺炎的實驗研究［J］.中華實驗和臨床病毒學雜志，1996，10(4):381

［2］李婷，吳佩玲，閆亮.含漱西帕依固齦液或H202對牙體治療中細菌性氣霧的影響［J］.實用口腔醫學雜志，2010，26(4):556-557

［3］李澤慧，聶晶，鐘良軍，等.西帕依固齦液和沒食子體外抗白色念珠菌的活性測定［J］.中華老年口腔醫學雜志，2010，8(3):148-149

［4］楊錫明.祖卡木顆粒治療兒童感冒的臨床療效及安全性［J］.中國當代醫藥，2010，17(3):79