HPLC法測定其格日木湯中梔子苷的含量

王曉娟

(錫盟藥檢所，內蒙古錫林浩特026000)

HPLC法測定其格日木湯中梔子苷的含量

王曉娟

(錫盟藥檢所，內蒙古錫林浩特026000)

目的:HPLC法測定其格日木湯中梔子苷的含量。方法:以C12柱(250mm×4.5mm，5μm)，乙腈-水-甲醇(12:88:1)為流動相，檢測波長為238nm，流速為1mL·min-1，柱溫為40。C。結果:線形范圍0.1993～1.1960μg(r=0.9993)，平均含量為2.6234 mg·g-1，RSD為1.1%。結論:本法可作為其格日木湯中梔子苷含量測定的一種準確、靈敏、可行的方法。

其格日木湯;蒙藥;梔子苷;HPLC法;含量測定

蒙成藥其格日木湯由五靈脂、紅花、梔子、川木通、瞿麥、訶子、川楝子、丹參、苦地丁、黃連、五味子、豬膽粉、甘草等13味藥組成，主要用于肝熱，肝久熱，肝血昔日相江，肝膽“粘”熱等。處方中梔子為主藥成分，梔子苷可作其格日木湯中含量指標。本文采用HPLC方法對梔子苷進行測定。

1 儀器、材料與試劑

島津SIL-20A高效液相色譜儀。梔子苷對照品由中國藥品生物制品檢定所提供;其格日木湯由東烏旗蒙醫院提供，其格日木湯模擬樣品自制。乙睛、甲醇為色譜純，水為高純水，其他試劑均為分析純。

2 含量測定

2.1 色譜條件:色譜柱天河C18(250mm×4.5mm，5μm);乙腈-水-甲醇(12:88:1)為流動相，檢測波長為238nm，流速為1mL·min-1，柱溫為40。C。

2.2 提取時間考察與樣品制備:參照《中國藥典》2005年版一部“三子散”項下梔子苷含量測定的方法，選用甲醇作為提取溶劑精密稱取0.3g，至具塞錐形瓶中，精密加入甲醇溶液25ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率300W，頻率40kHz)50min，放冷，稱定重量，甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，制得供試品溶液，進行測定。

實驗中考察了超聲提取10、20、30、40、50、60和70min不同超聲提取時間對提取效率的影響，結果見表1。

表1提取效率的考察表

從表中數據可見，超聲處理50、60和70min梔子苷的含量基本一致，故超聲提取時間定為50min。

2.3 專屬性:梔子苷對照品的HPLC圖的測定:精密稱取梔子苷對照品14.94mg，置50mL量瓶中，加甲醇(色譜純)溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5mL于50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成對照品溶液，精密量取10μL注入液相色譜儀測定。

其格日木湯HPLC圖的測定:取本品，研細，稱取約0.3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇(分析純)25mL，密塞，稱定重量，超聲處理50min，放冷，再稱定重量，用甲醇(分析純)補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液10μL注入液相色譜儀測定。

陰性對照液的HPLC圖的測定:按處方配比取處方中除主藥外的12味藥混勻，制成模擬陰性對照。取上述模擬陰性對照約0.3g，精密稱定，制成陰性對照液，同法測定。

測定結果:陰性對照色譜圖在與梔子苷對照品以及供試品色譜相對應的保留時間處無色譜峰出現，表明處方中其它組分對梔子苷的測定無干擾。

2.4 線性關系考察:取梔子苷對照品15mg，精密稱取為14.95mg，置150mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取0.5、1、2、3、4、5、6mL，分別置10mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，各取20μL進樣，按上述色譜條件測定，以峰面積對濃度進行回歸分析，結果梔子苷在0.1993～1.1960μg范圍內呈良好的線性關系。

回歸方程為:Y=1379109.7X+1331.10，R2=0.9993

表2梔子苷的標準曲線數值表

2.5 穩定性試驗:取同一份供試品溶液(批號:20090604)，分別在0、2、4、8、12、24(h)進行測定，結果見表3。

表3不同時間測定樣品中梔子苷的峰面積積分值

從表中數據可見，梔子苷在24h內的峰面積積分值基本穩定不變。

2.6 精密度:取同一批號供試品(批號:20090604)6份，研細，精密稱取0.3g，按2.2項下的方法制得供試品溶液;另精密稱取梔子苷對照品14.94mg依法制成每1mL含梔子苷29.88μg的溶液作為對照品溶液。分別精密吸取上述溶液各10ul注入色譜儀測定每份供試品含量。按外標法計算含量。平均含量(2.6234mg·g-1)，RSD為1.1。

2.7 回收試驗:梔子苷對照品溶液的制備:精密稱取梔子苷對照品14.94mg，置50m量瓶中，加甲醇制成每1ml含梔子苷0.2988mg的溶液，再分別精密吸取5mL、10mL、15mL分別至200mL量瓶中制成7.47、14.94和22.41μg·mL-1梔子苷對照品溶液。

加樣回收試驗:取供試品(批號:20090604含量2.6234mg·g-1)9份，各約0.15mg，精密稱定，分別置9個具塞錐形瓶中，在1～3、4～6、7～9號分別精密加入濃度為0.00747、0.01494、0.02241 mg·mL-1的梔子苷對照品甲醇溶液25mL，按2.2項下的方法制得供試品溶液，分別精密吸取上述溶液各10uL注入液相色譜儀進行測定。平均回收率分別為101.1、101.9、98.8，RSD為1.0、0.8、1.0。

3 樣品含量測定

取本品2.0g，按2.2項下方法制備，取10μL注入液相色譜儀，按2.1項下色譜條件測定。結果見表4。

表4樣品中梔子苷含量測定結果

從表中2批樣品及1批模擬樣品測定的數據可見，梔子苷的含量在2.4960mg·g-1以上。

4 小結

4.1 實驗結果表明:梔子苷的檢測保留時間為9.75min;而陰性對照溶液在此處未出現檢測峰。說明樣品中的其他藥材不干擾梔子苷的測定。

4.2 參照《中國藥典》2005年版一部“三子散”項下梔子苷含量測定的方法，含量測定項下的流動相和檢測波長，進行實驗，分離效果不好，故采用現在的流動相進行實驗。

［1］國家藥典委員會編.中國藥典2005年版一部［S］化學工業出版社，3、173、324

［2］內蒙古衛生廳編.內蒙古蒙藥材標準［S］.內蒙古科學技術出版社，1986，448、498

［3］內蒙古食品藥品檢驗所.內蒙古蒙藥制劑規范［M］.內蒙古人民出版社，2007，26、226

2012年6月18日收稿

R291.2

A

1006-6810(2012)09-0043-02

王曉娟，聯系電話:13947938396電子郵箱:970445182@qq.com。