正交試驗法研究酸牛奶制石決明的炮制工藝△

陳少麗 王磊磊 張志杰 張艷玲* 朝格圖

(1.內蒙古大學化學化工學院，呼和浩特 010021; 2.中國中醫科學院中藥研究所，北京 100700)

石決明為鮑科動物雜色鮑Haliotis diversicolor Reeve、皺紋盤鮑H.discus hannai Ino、羊鮑H.ovina Gmelin、澳洲鮑H.ruber(Leach)、耳鮑H.asinina Linnaeus或白鮑H.laevigata(Donovan)的貝殼［1］，其性寒，味咸，歸肝經，具有平肝潛陽、清肝明目的功能，主要用來治療頭痛眩暈、目赤翳障、視物昏花、清盲雀目等癥［2－4］。由于石決明為動物的貝殼，質地堅硬，難于粉碎和煎出有效成分，因此多炮制后使用。2010年版藥典收載的為明煅法。然而煅法溫度太高，使石決明含有的多種氨基酸及其他少量的有機成分部分或完全損失。因此，需要更好的炮制方法，使之既能易于粉碎和煎出有效成分，又不會使其所含成分有太多損失［5－7］。牛奶炮制石決明是我國民族醫在長期醫療實踐過程中形成的獨特的炮制方法。牛奶不僅含有豐富的營養價值，而且牛奶是一種膠體溶液，具有一定的特殊性。牛奶用于石決明的炮制，可以起到凈化藥材、便于粉碎、易于吸收、提高臨床療效的作用［8］。然而，牛奶炮制石決明的工藝缺乏科學的規范，而且牛奶炮制石決明的作用機理并不清楚。

牛奶炮制石決明的過程涉及諸多因素，如牛奶用量、煎煮時間、干燥溫度和干燥時間等。本論文擬利用正交實驗設計方法，以酸牛奶用量、煎煮時間、干燥溫度和干燥時間為考察因素，利用原子吸收分光光度法測定Ca2+含量，以石決明酸牛奶各炮制品中總Ca2+含量、水煎液Ca2+含量以及人工胃液Ca2+溶出量為評價指標，對酸牛奶炮制石決明工藝進行優化，以期對酸牛奶炮制石決明的機理進行初步闡釋，并為規范蒙藥石決明的炮制工藝提供參考依據。

1 實驗儀器與材料

1.1 藥材:石決明(購于呼和浩特市京遠大藥房)，挑出雜質，用篩子過濾，選出10～40目的樣品，備用。

1.2 儀器:AA7003型原子吸收分光光度計(北京東西電子);DF－101XP集熱式測速磁力攪拌器(金壇正基);QE－200克萬能粉碎機(浙江屹立);AR224CN電子天平(美國奧豪斯);電熱恒溫干燥箱(天津華北)。

1.3 試劑:鈣單元素溶液標準物質(GBW(E)080118，標準值1000μg/mL，中國計量科學研究院);胃蛋白酶(豬源，規格型號1:3000，瓶裝25g，上海晶純實業有限公司)。

2 試驗方法

2.1 炮制工藝考察因素及水平:選擇酸牛奶用量、煎煮時間、干燥溫度和干燥時間4個因素，每個因素各選3個水平，見表1。

2.2 試驗方法

2.2.1 炮制方法:取10～40目石決明樣品，稱取。根據表1設計的實驗條件，分別將石決明和酸牛奶按一定的質量比混合，放入錐形瓶中，在集熱式水浴加熱，溫度為80℃，。隨后將樣品按一定的溫度和時間在烘箱中進行干燥。

表1 酸牛奶制石決明正交實驗因素水平設計

2.2.2 石決明生品與制品中總Ca2+含量的測定

2.2.2.1 分別移取 300、400、500、600、700、800μL 的 Ca2+標準溶液，定容至25mL，配置系列濃度Ca2+標準溶液，測定其吸光度值，建立標準曲線，線性回歸方程:Y=40.0729X+1.3868，r=0.9994。

2.2.2.2 分別稱取石決明各酸牛奶炮制品約1g，置于100mL燒杯里，先加入5mL蒸餾水，再加入10mL稀鹽酸，固體表面起泡沫，不斷攪拌。待反應完畢后，用漏斗過濾至25mL比色管里，再向燒杯內加入2次5mL蒸餾水洗滌燒杯內剩余固體后，過濾至比色管里，定容至25mL。

2.2.2.3 分別移取上述溶液各 25μl，定容至 25mL。測定各樣品的吸光度值，根據上述建立的標準曲線得到各樣品中Ca2+的含量(表2)。

表2 酸牛奶炮制石決明正交實驗Ca2+含量測定結果

2.2.3 石決明生品與制品水煎液Ca2+含量的測定

2.2.3.1 分別移取 0、100、200、300、400、500μl的 Ca2+標準溶液，定容至25mL，配置系列濃度Ca2+標準溶液，測定其吸光度值，建立標準曲線，線性回歸方程:Y=140.7537X－29.0038，r=0.9997。

2.2.3.2分別稱取石決明各制品約1g，置于100mL燒杯中，加入20mL蒸餾水，水浴加熱40min，適時加入蒸餾水，然后冷卻過濾至25mL比色管里。再加入10mL蒸餾水，條件不變，繼續加熱20min.冷卻，過濾，用適量蒸餾水洗滌小燒杯，將比色管內液體定容至25mL。

2.2.3.3 分別移取上述水煎液各10mL，定容至25mL。測定各樣品的吸光度值，根據上述建立的標準曲線得到各樣品中Ca2+的含量(表2)。

2.2.4 石決明生品與制品人工胃液Ca2+溶出量的測定

2.2.4.1 分別移取 0、50、100、150、200、250μl的 Ca2+標準溶液，定容至25mL，配置系列濃度Ca2+標準溶液，測定其吸光度值，測得線性回歸方程:Y=33.0035X –0.2377，r=0.9987。

2.2.4.2 分別稱取石決明各制品約 2.5g，用 15mL 人工胃液在36.5℃左右的恒溫水浴箱里反應20分鐘，過濾至25mL比色管，定容。

2.2.4.3 分別移取100μL液體樣品，定容至25mL。測定各樣品的吸光度值，根據上述建立的標準曲線得到各樣品中Ca2+的含量(表2)。

3 結果與討論

3.1 石決明酸牛奶制品中總Ca2+含量分析。石決明酸牛奶制品中總Ca2+含量見表2所示。從表2可以直觀看出各因素的影響規律是:D＞A＞C＞B，最佳炮制工藝為:A1B3C3D1。可知，在酸牛奶炮制樣品與稀鹽酸反應的實驗中，對實驗影響最大的因素依次是干燥時間、酸牛奶用量、干燥溫度、煎煮時間。又由A、D組的P ＜0.05(表3)，可知酸牛奶用量和干燥時間對實驗結果有顯著性影響。

3.2 石決明酸牛奶制品水煎液Ca2+含量分析。石決明酸牛奶制品水煎液Ca2+含量結果如表2所示。從表2可以直觀看出各因素的影響規律是:A＞D＞B＞C，最佳炮制工藝為:A3B1C3D2。可知，在水煎液蒸煮實驗中，對實驗影響最大的因素依次是酸牛奶用量、干燥時間、煎煮時間、干燥溫度。又由方差分析表，A、B、C、D 組的P ＞0.05(表3.5)，可知酸牛奶用量、煎煮時間、干燥溫度、干燥時間對實驗結果沒有顯著性影響。

3.3 石決明酸牛奶制品人工胃液Ca2+溶出量分析。石決明酸牛奶制品人工胃液Ca2+溶出量如表2所示。從表2可以直觀看出各因素的影響規律是:D＞A＞B＞C，最佳炮制工藝為:A1B2C3D3。可知，在酸牛奶炮制樣品與人工胃液反應的實驗中，對實驗影響最大的因素依次是干燥時間、酸牛奶用量、煎煮時間、干燥溫度。又由方差分析表，A、B、C、D組的P ＞0.05(表3.7)，可知酸牛奶用量、煎煮時間、干燥溫度、干燥時間對實驗結果沒有顯著性影響。

表3 酸牛奶炮制石決明工藝方差分析表

4 結論

本研究利用正交試驗法，對酸牛奶炮制石決明的4個因素(牛奶用量、煎煮時間、干燥溫度、干燥時間)進行了考察，以石決明酸牛奶制品中總Ca2+含量、水煎液Ca2+含量、人工胃液Ca2+溶出量作為評價指標，利用原子吸收分光光度法對其分別進行了測定。對測定結果分別進行直觀分析和方差分析，結果顯示，在酸牛奶炮制石決明的工藝條件中，酸牛奶用量A、干燥時間D對結果會產生主要的影響。尤其是石決明樣品與稀鹽酸的反應中，A、D為顯著性因素，相對而言，在整個實驗中，煎煮時間B、干燥溫度C對測定Ca2+含量的影響比較小。從而，確定酸牛奶炮制石決明的最佳工藝條件為:石決明與酸牛奶用量(g:g)為1:1，煮制6h，于 180℃烘干 1h。

石決明主含碳酸鈣，尚含氨基酸等其他多種有機和無機成分。本研究只考察了酸牛奶炮制前后石決明中主成分Ca2+含量的變化。酸牛奶炮制前后石決明的其他有機和無機成分發生了哪些變化，其藥理作用和臨床效果又有了哪些改變，這些都有待我們進一步探索。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版第一部［S］.北京:中國醫藥科技出版社，2010，84－85.

［2］肖培根.新編中藥志 (第四卷)［M］.北京:化學工業出版社，2002，48－55.

［3］國家中醫藥管理局《中華本草》編委會.中華本草 (第25卷)［M］.上海:上海科學技術出版社，1999，36－39.

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［8］田華詠.中國民族藥炮制集成［M］.北京:中醫古籍出版社，2000，130－131.