特異siRNA下調卵巢癌H08910細胞NAC-1基因表達并抑制生長

桂 玲，王 靜，祝愛珍，劉成成，劉革修

(1.湖南省腫瘤醫院婦瘤科，湖南長沙410006;2.暨南大學醫學院血液病研究所，廣東廣州 510632)

最近研究發現，卵巢癌中存在卵巢癌干細胞(cancer stem cells，CSCs)［1］，且與卵巢癌發生發展及其多藥耐藥密切相關［2］。這些研究結果提示，卵巢癌干細胞是卵巢癌防治過程中重要靶細胞。

NAC-1(nucleus accumbens-1)蛋白屬于BTB/POZ轉錄因子家族成員，通過BTB/POZ結構域形成二聚體，與一些核蛋白相互作用，調節細胞生物學活性，參與胚胎干細胞的自我更新和多能性分化。在漿液性卵巢癌組織和細胞系中NAC-1表達和紫杉醇體外耐藥相關，NAC-1通過部分抑制Gadd45gip1的表達、負向調節 Gadd45腫瘤抑制途徑的組成，包括Gadd45α及其結合蛋白Gadd45gip1，從而促進腫瘤的生長和存活［3］。所以，本研究探究增強卵巢癌治療效果的輔助方法，為提高臨床卵巢癌治療效果提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 材料和試劑:人卵巢癌細胞系HO8910(中國科學院上海細胞生物研究所，由暨南大學生命科學技術學院生殖研究室保存);RPMI-1640培養液(Gibco公司);新生胎牛血清(杭州四季青生物工程科技有限公司);MTT(Sigma公司);脂質體轉染試劑盒LipofectamineTM2000(Invitrogen公司);Trizol、反轉錄試劑盒和SYBR GreenⅠMix試劑盒(Tiangen公司)、MTT試劑盒、蛋白裂解液和電化學發光(electrochemilum-inescence，ECL)試劑盒(碧云天生物技術有限公司);特異性siRNA和陰性對照siRNA(廣州市銳博生物科技有限公司)。

1.2 靶向NAC-1基因寡核苷酸的設計:根據NAC-1基因的序列號NM 052876.21設計2條特異性siRNA序列:NAC-1 siRNA-1 為5'-UGACAGGCACCAACGUGUACA-3'，NAC-1 siRNA-2為5'-GAACUCGGUGCCCUUCUCCAU-3';另外設計一條陰性對照，與已知的人類基因無同源性，序列為5'-GACTT CATAAGGCGCATGC-3'。

1.3 細胞培養和轉染:將人卵巢癌細胞系HO8910細胞以1×106個/孔接種于6孔板，用含10%胎牛血清的 RPMI 1640培養液培養于CO2體積分數為5%的37℃培養箱中。……