張 哲,鄭清蓮,劉永惠
(西安交通大學醫學院第一附屬醫院中醫科,陜西西安 710061)
近年來發現,卵泡刺激素受體(follicle-stimulating hormone receptor,FSHR)、黃體生成素受體(luteinizing hormone receptor,LHR)可存在于性腺外組織如:脂肪[1]、骨組織[2]、平滑肌細胞、胃的壁細胞[3]、胰腺[4]、頜下腺[5]、某些惡性腫瘤細胞表面[6]等。
本實驗曾發現[7-8]正常大鼠腎臟組織中有FSHR、LHR的表達,且表達量、基因序列與卵巢組織一致,那么是否具有和卵巢組織相似的表達調控特性?本實驗旨在研究腎臟組織中FSHR、LHR的表達調控特性,從而探討腎臟是否具有和卵巢相似的功能和變化。
清潔級SD雌性大鼠54只,未交配,體質量為200~220 g,普通級;孕19~21 d的SD雌性大鼠共100只[西安交通大學醫學院動物中心提供合格證號:SCXK(陜)2008-002]。RNAfast200(廣州飛捷生物有限公司);反轉錄試劑盒(Fermentas公司);RT-PCR反應體(廣州東盛生物科技有限公司);Quantityone分析軟件凝膠分析系統(Bio-Rad公司);放免試劑盒(天津九鼎生物制品公司);苯甲酸雌二醇(西安化學試劑廠)。
1.2.1 動物模型制備及分組:30只行雙側卵巢摘除手術,余24只行假手術。
采用陰道細胞學檢查方法,陰道分泌物進行HE染色,普通光學顯微鏡觀察。證實卵巢摘除成功。
假手術組分為N1、N2和N3組各8只,模型組分為M1、M2和雌激素干預組各10只。N1組術后5日檢測相關指標。N2和M1組術后1月檢測相關指標。N3、M2和E組術后1月開始給藥:E組每周2次肌肉注射苯甲酸雌二醇(0.1 mL/kg),給藥結束即檢測指標。
1.2.2 放免法測各組血清LH、FSH、E2和P水平:常規分離血清,4℃保存備用。加入相應抗體,混勻,37℃溫育1 h,加入分離劑再混勻,4℃放置10 min,吸取上清液,測定放射性計數(counts/min),計算LH、FSH、E2和P含量。……