腺苷酸激活蛋白激酶在大鼠酒精性肝病中的表達減少

周東方，魏 峰，周俊英

(河北醫科大學第三醫院感染科，河北石家莊 050051)

酒精性肝病(alcoholic liver disease，ALD)是長期大量飲酒所致的肝臟損害性病變，其病理改變包括酒精性脂肪肝、酒精性脂肪性肝炎、酒精性肝纖維化及酒精性肝硬化［1］。ALD發病過程中存在脂質代謝紊亂，脂肪在肝臟堆積［2］。腺苷酸激活蛋白激酶(AMP-activated protein kinase，AMPK)被稱為細胞的“代謝感受器”，參與多種代謝過程［3］。本研究擬通過觀察AMPK及其相關下游激酶在肝臟中的表達情況，探討AMPK在ALD發病過程的意義。

1 材料與方法

1.1 材料

清潔級雄性Wistar大鼠，體質量200±20 g(由河北醫科大學動物實驗中心提供，合格證號708020)。AMPK-α2羊多克隆抗體(Santa Cruz生物技術有限公司);乙酰輔酶A羧化酶(Acetyl-CoA carboxylase，ACC)兔多克隆抗體(Abcam生物技術有限公司);固醇調節原件結合蛋白(sterol regulatory element-binding proteins，SREBP)1c兔多克隆抗體(北京博奧森生物技術有限公司);Taq DNA聚合酶(北京天根生物科技有限公司);AMV反轉錄酶(Promega公司);AMPK、ACC、SREBP、β-actin引物由上海捷瑞生物工程有限公司合成。

1.2 方法

1.2.1 動物模型的建立及分組:隨機分出10只為正常對照組，其余動物采用逐漸增加乙醇濃度和劑量的方法每日上午9時灌胃(乙醇濃度30% ～60%，劑量5～9 g/kg)，分別于 4、8、12和16 周末禁食12 h后股動脈放血處死動物10、9、8和8只，分離血清低溫保存，新鮮肝組織冰凍切片;取部分肝臟左葉以10%中性甲醛固定;另取肝組織立即－80℃冰凍備檢［4］。

1.2.2 檢測指標:1)生化指標:測定肝功能ALT、AST、CHE 及血脂 TG、TC、HDL、LDL、VLDL 水平，應用OLYMPUS AU-600全自動生化分析儀檢測。2)病理學檢查:新鮮肝組織冰凍切片行蘇丹Ⅳ染色，余肝組織標本常規蘇木素-伊紅染色，光鏡下觀察肝組織普通病理變化。……