低氧對結腸癌SW480細胞生存的影響及與細胞自噬的關系

劉雅婷，楊愛軍，楊 麗，李雙明，向 琳，劉燕菲，李 敏，2*

(1.蘭州大學基礎醫學院病理學研究所，甘肅蘭州730000;2.甘肅省新藥臨床前研究重點實驗室，甘肅蘭州730000;3.蘭州軍區總醫院病理科，甘肅蘭州 730000)

腫瘤在宿主中生長，需要宿主提供更多的O2，腫瘤生長的速度遠遠大于支持它的物質［1］。在此過程中雖然有擬態血管的形成，但腫瘤血管的結構及功能都存在異常，因此氧氣和營養物質都相對缺乏，在實體瘤中經常會出現低氧的現象。然而腫瘤細胞卻可以在這種微環境中繼續生存，特別是一群具有干細胞特性的CD133+細胞(cancer stem cells，CSCs)。

自噬的發生會形成雙層膜的自噬體，之后與溶酶體結合，分解胞質中的大分子及細胞器［2］。起初認為自噬同凋亡及細胞壞死一樣作為細胞的死亡形式，之后有研究表明自噬為一種新的細胞保護機制以促進腫瘤細胞存活，尤其是在低氧及缺血的微環境中。自噬會因細胞系的不同及腫瘤生長的不同階段發揮不同的作用。本實驗擬研究低氧微環境對結腸癌細胞生存的影響并觀察其與自噬之間的關系。

1 材料與方法

1.1 細胞培養

結腸癌細胞系SW480由本實驗室提供，常規培養于含有10%胎牛血清的DMEM/F12培養基中，置于37℃、5%CO2飽和濕度下培養，每2天換液傳代。將細胞置于氧氣含量控制在1%，94%N2及5%的CO2。

1.2 免疫磁珠分選

取10瓶對數生長期結腸癌SW480細胞(細胞數為107個)，胰蛋白酶消化并吹打成單細胞懸液，1 500 r/min離心5 min，棄去上清液，加入300 μL的緩沖液緩沖(0.5%BSA 2 mmol/L EDTA 0.01%PBS)重懸，再加入FCR阻斷劑及CD133磁性微珠(Miltenyi公司)各100 μL，充分混勻，置于4 ℃ 暗處避光孵育30 min。……