Alarelin免疫綿羊?qū)Υ贵wGnRHR、FSHR和LHR基因表達與生殖激素分泌的作用

魏鎖成，鞏轉(zhuǎn)娣，董江陵，謝 坤，李瓊毅，韋 敏

(西北民族大學1.生命科學與工程學院;2.醫(yī)學院附屬醫(yī)院，甘肅蘭州730030;3.蘭州大學基礎醫(yī)學院，甘肅蘭州， 730000)

促性腺激素釋放激素(Gonadotropin-releasing hormone，GnRH)在垂體前葉特異性地與垂體促性腺細胞上的受體結(jié)合，刺激促黃體素(Luteinizing hormone，LH)和促卵泡素(Follicle-stimulating hormone，F(xiàn)SH)的合成和分泌。然而，下丘腦合成的天然GnRH含量極低微，且不易提取與純化，難以在臨床上推廣應用，目前許多學者提出可用合成的促性腺激素釋放激素類似物(GnRH analogue，GnRH-A)來替代［1］。GnRH-A包括GnRH激動劑(GnRH agonist，GnRHa) 和 GnRH 拮 抗 劑(GnRH antagonist，GnRHant)。GnRH-A具有與天然的GnRH十分相似的生理和生物學作用，而且與GnRH受體(GnRHR)的結(jié)合力增強100～200倍。阿拉瑞林(Alarelin，又名丙氨瑞林)是一種GnRHa，在動物注射外源性的GnRH和GnRH-A后可提高發(fā)情期受胎率、縮短產(chǎn)后發(fā)情時間、提高家畜超排效果和產(chǎn)仔率［2］，但持續(xù)給予GnRH可以導致垂體-卵巢軸的脫敏反應，具有抑制排卵和阻斷發(fā)情周期的抗生育效應［3］。動物注射GnRH-A后，對腺垂體嗜堿性顆粒細胞分泌LH和FSH的活性有無影響，腦垂體、卵巢及子宮器官的組織學結(jié)構(gòu)是否發(fā)生改變等還未見報道［4］，作用機理尚不清楚［5］。有鑒于此，本研究探討GnRHa主動免疫對激素受體的表達與生殖激素分泌的作用，為研究GnRH-A免疫調(diào)節(jié)動物機體發(fā)育和生殖功能的機理及合理應用提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要試劑

醋酸阿拉瑞林(Alarelin)，弗氏不完全佐劑，促性腺激素釋放激素抗體試劑盒(Sigam公司);碳二亞胺鹽酸鹽(DC.HCL，上海源葉生物公司);Trizol，Sybr Green qPCR Master Mix(Qiagen 公司)，M-MLV Rtase，DNA聚合酶(AMERSCO公司);PCR試劑盒和RTPCR試劑盒(Invitrogen公司)。促卵泡素(FSH)檢測試劑盒、促黃體激素(LH)檢測試劑盒和促性腺激素釋放激素(GnRH)檢測試劑盒(ADL公司)。……