P38 MAPK抑制劑對神經(jīng)病理性疼痛大鼠脊髓TNF-α合成的影響

許 力，虞雪融，黃宇光

(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)院麻醉科，北京 100730)

痛覺過敏和觸誘發(fā)痛是神經(jīng)病理性疼痛的突出特點(diǎn)，現(xiàn)有的治療方法效果十分有限［1］。大量研究發(fā)現(xiàn)，前炎性細(xì)胞因子如腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)可能在神經(jīng)病理性疼痛中發(fā)揮重要作用。例如，TNF-α作用于坐骨神經(jīng)后可造成傷害性初級傳入纖維自發(fā)性興奮，并呈劑量依賴;外周神經(jīng)損傷后脊髓背角中 TNF-α表達(dá)增加［2］。此外，TNF-α抑制劑可以緩解慢性壓迫性損傷(chronic constrictive injury，CCI)引發(fā)的痛覺過敏［3］。然而，參與脊髓TNF-α合成過程的信號傳導(dǎo)精確細(xì)節(jié)，尚未明確。體外培養(yǎng)的小膠質(zhì)細(xì)胞在脂多糖誘導(dǎo)下可以產(chǎn)生大量TNF-α，而這一過程是通過脂多糖激活P38 MAPK通路完成的［4］。小膠質(zhì)細(xì)胞是神經(jīng)系統(tǒng)中的巨噬細(xì)胞，能夠產(chǎn)生釋放多種細(xì)胞因子，包括TNF-α。以往通過多種神經(jīng)病理性疼痛模型證實(shí)，外周神經(jīng)損傷后脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞中P38將被激活(激活的 P38形式為磷酸化-P38 MAPK，即 p-P38)［5］。由此可見，TNF-α 與 P38 之間可能存在著重要聯(lián)系，并且在神經(jīng)損傷后的神經(jīng)病理性疼痛形成過程中發(fā)揮重要作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物和試劑材料

SPF級雄性SD大鼠，體質(zhì)量160～200 g(北京維通科華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司，合格證SCXK京2003220043)，12 h亮、暗間隔，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，開始進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。P38抑制劑:4-(4-氟苯)-2-(4-甲磺酰苯)-5-(4-吡啶基)-1 氫-咪唑(SB203580)、抗β-actin抗體(Sigma公司)，蛋白酶和磷酸酶抑制劑的緩沖液、辣根過氧化物酶標(biāo)記二抗、辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素、抗TNF-α抗體和ECL發(fā)光試劑盒(Santa Cruz公司)，SDS-PAGE凝膠和醋酸纖維素膜(Bio-Rad公司)，抗磷酸化-P38抗體和抗總-P38抗體(Cell Signaling公司)生物素-親和素 SP試劑盒(Zymed公司)。……