核桃葉抗氧化成分的動態(tài)分析

何麗波，高海合，尹正仙，李 花，何麗仙

（大理學(xué)院藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院，云南大理 671000）

核桃葉含有很多種營養(yǎng)物質(zhì)，如除含有維生素B、C、D、E及胡蘿卜素外，還含有豐富的核桃醌、黃酮等生物活性物質(zhì)〔1-2〕，核桃葉提取物對油脂的氧化有一定的抑制作用〔3〕。現(xiàn)在已有許多關(guān)于提取方法的報道，大孔樹脂分離提取法〔4〕、微波法〔5〕都是以水、乙醇、丙酮等為提取溶劑。提取工藝比較成熟，但其動態(tài)分析尚沒人做過，本課題組擬對其進(jìn)行動態(tài)分析，以更好的為其利用提供依據(jù)。

1 工作原理

食用植物油中的過氧化物在氯仿一冰乙酸介質(zhì)中，與KI反應(yīng)生成碘，生成的碘用純水稀釋后，與淀粉反應(yīng)顯藍(lán)色。在λ=580 mn處，用分光光度計測定，由測得的吸光度，查工作曲線，算出碘含量，以測得樣品的過氧化值。

2 儀器與材料

2.1儀器722型可見光分光光度計（上海菁華科技有限公司）；電子天平（北京賽多科斯儀器系統(tǒng)有限公司）。

2.2材料核桃葉粉末：采自大理漾濞縣境內(nèi)，6、7、8、9月各月份陰干后核桃葉粉碎品；氯仿-冰乙酸混合劑（2∶3）；飽和碘化鉀溶液（14 g碘化鉀溶于10 mL水中）；10 g/L淀粉溶液，碘標(biāo)準(zhǔn)溶液（3.936×10-3mol/L）；硫代硫酸鈉溶液0.103 3 mol/L，臨用時稀釋10倍。

3 試驗(yàn)方法

3.1丙酮提取核桃葉中抗氧化物質(zhì)稱取6月份采摘的陰干后核桃葉粉碎樣品15 g，70%丙酮為溶劑，按固液比1∶20的比例加入到500 mL圓底燒瓶中。在恒溫水浴鍋中稍低于溶劑的沸點(diǎn)溫度下回流提取3 h。過濾，濾液經(jīng)減壓濃縮蒸發(fā)后在真空干燥箱中于60℃以下真空干燥，再用乙酸乙酯萃取多次，合并萃取液，回收溶劑，干燥，得提取物并放入干燥器中備用，其余月份的提取同此法操作〔6〕。

3.2工作曲線于一系列干燥的25 mL容量瓶中，分別加入40∶60的氯仿一冰乙酸溶液2.5 mL，再分別加入碘標(biāo)準(zhǔn)溶液0.00、0.10、0.30、0.40、0.50、0.60、0.80 mL，搖勻，各加入0.5 mL 10 g/L淀粉溶液，加水稀釋至刻度，加塞輕輕搖勻，靜置5 min，待分層后，取上清液在1 cm玻璃比色皿中，以零管作參比。在波長為580 nm條件下測定其吸光度，根據(jù)對應(yīng)濃度，繪制工作曲線。

3.3樣品測定用可見光分光光度法測定樣品。精密稱取油樣于干燥的25 mL容量瓶中，加入2.5 mL 40∶60的氯仿一冰乙酸溶液，加入飽和碘化鉀溶液0.25 mL混勻，暗處放置5 min，取出加水稀釋，加入淀粉溶液0.5 mL，加水至刻度，輕輕搖勻，靜置，取上清液于l cm比色皿，在波長為580 nm以空白作參比，測定吸光度。

計算公式：過氧化值（%）=樣品中含碘（mg）量×100/樣品量（g）/1000。

4 結(jié)果與分析

4.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制按3.2的步驟，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，將吸光度-濃度進(jìn)行回歸，發(fā)現(xiàn)碘濃度在0.1～0.9 mg/L范圍內(nèi)符合比爾定律，吸光度與濃度呈線性關(guān)系，其回歸方程為：A=0.309 9C+0.124 5，R2=0.992 8，R=0.996 4。

4.2不同月份提取物相同添加量的抗氧化性比較采用可見光分光光度法對添加有不同月份丙酮提取物的食用植物油在保存期間的過氧化值進(jìn)行測定，并與相同添加量的BHA/BHT進(jìn)行比較，BHA/BHT添加量采用文獻(xiàn)值0.02%，見表1。可以看出，核桃葉的不同月份提取物均有一定的抗氧化作用，核桃葉中含有較多的鞣質(zhì)類、黃酮類等化合物，其中黃酮類化合物含量可達(dá)7.26%。這些化合物分子結(jié)構(gòu)中的酚羥基團(tuán)，具有明顯地清除氧自由基的作用〔6〕，核桃葉提取物的抗氧化作用可能與帶有酚羥基有關(guān)〔7-9〕。

表1 不同月份提取物相同添加量的抗氧化性比較

5 結(jié)論

不同時間采摘核桃葉提取物均對油脂的氧化有一定的抑制作用，其中以9月份采摘的效果最好，與相同濃度BHT和BHA比較，其抗氧化作用強(qiáng)于BHT，比BHA稍弱。結(jié)論：不同月份采集核桃葉提取物均可作為天然抗氧化劑使用，其中以9月份采集的效果最好。

〔1〕翟梅枝，韋虹.核桃葉利用初探〔J〕.中國水土保持，1992（8）：40-41.

〔2〕高紹堂.核桃豐產(chǎn)栽培技術(shù)〔M〕.北京：科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社，1989：22-25.

〔3〕尉芹，馬希漢，韓學(xué)文.核桃葉抗氧化作用的研究〔J〕.食品科學(xué)，2001，22（7）：81-83.

〔4〕郭琪，翟梅枝，賈彩霞，等.大孔樹脂分離純化核桃葉總黃酮的研究〔J〕.西北林學(xué)院學(xué)報，2008，23（3）：168-172.

〔5〕翟梅枝，張鳳云，高紹棠.核桃葉總黃酮提取方法研究〔J〕.陜西林業(yè)科技，2000（1）：5-8.

〔6〕劉慎，鄧煜，魯雙.核桃葉黃酮微波輔助提取及抗氧化性研究〔J〕.食品研究與開發(fā)，2009，30（6）：21-23.

〔7〕高岳芳，張麗，韓穎.核桃屬植物葉的化學(xué)成分及生物活性研究進(jìn)展〔J〕.西北林學(xué)院學(xué)報，2010，25（4）：165-169.

〔8〕于冬梅，蓋素芬.核桃葉中主要營養(yǎng)元素含量的年動態(tài)變化規(guī)律〔J〕.農(nóng)產(chǎn)品加工，2009，182（8）：53-56.

〔9〕呂玉年，柴玉霞.核桃花絮與核桃葉所含揮發(fā)性成分的對比〔J〕.中國社區(qū)醫(yī)師·醫(yī)學(xué)專業(yè)，2011，23（13）：7.