Survivin與PLK1在T細胞淋巴瘤中的表達及其臨床意義

賀榮芳，趙 強，謝黎明，龔邵新，胡義艷，張小麗，陽 帥，唐運蓮

(1.南華大學附屬第一醫院病理科，湖南 衡陽 421001；2.南華大學附屬第一醫院腫瘤內科，湖南 衡陽 421001；3.南華大學腫瘤研究所，湖南 衡陽 421001)

淋巴瘤是指來源于淋巴細胞及其前體細胞的惡性腫瘤，在我國占所有惡性腫瘤的3%～4%，且近年來其發病率呈明顯上升趨勢。惡性淋巴瘤種類繁多，T細胞與B細胞淋巴瘤在病理形態、免疫表型、臨床特征、治療方法和預后等方面都有很大差別。T細胞淋巴瘤在西方國家比較少見，而在我國卻比較常見。Survivin是凋亡抑制蛋白家族中分子量最小的一員，被認為是迄今發現最強的凋亡抑制因子。研究表明Survivin在多種腫瘤中異常高表達，且與腫瘤的發生發展及預后密切相關[1-2]。PLK1是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，具有調控細胞周期與凋亡、促進腫瘤發生發展等多種作用。PLK1在多種腫瘤組織中過表達，且與腫瘤的轉移、復發及預后差顯著相關，已成為腫瘤診治的新靶點。最新研究表明皮膚T細胞淋巴瘤中存在PLK1過表達[3]。在其他部位及其他類型的T細胞淋巴瘤中是否也存在PLK1蛋白過表達，尚未見相關文獻報道。Survivin和PLK1因均與細胞周期與凋亡調控有關，且均作用于G2/M期而被學者們所關注。研究發現在肝癌細胞株BEL-7402中用RNA干擾技術抑制PLK1的表達后，細胞中Survivin蛋白表達下調，進而導致細胞G2/M期阻滯[4]。Feng等[5]在食管鱗狀細胞癌中的研究也提示PLK1可能通過Survivin而發揮其抑制細胞凋亡、促進腫瘤發生發展的作用。但二者在T細胞淋巴瘤中的作用及相互關系尚未見文獻報道。本研究旨在探討T細胞淋巴瘤組織中Survivin、PLK1蛋白的表達，并探討其表達與各臨床病理參數之間的關系及二者表達之間的相關性，為進一步闡明T細胞淋巴瘤發生發展的分子機制及預后判斷提供實驗數據和理論依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2000-2011年南華大學附屬第一醫院病理科經病理組織學及免疫組化標記確診為T細胞淋巴瘤的患者50例，男30例，女20例，年齡13～78歲，中位年齡45歲。患者臨床、病理及實驗室資料完整。病理類型和惡性程度按WHO(2008年)的標準分類。臨床分期按AnnArbor分期標準。50例T細胞淋巴瘤患者中按年齡分類，45歲及以上者36例，45歲以下者14例；按發生部位分類，結內16例，結外34例；按惡性程度分類，高侵襲性4例，侵襲性26例，惰性20例；按臨床分期分類，Ⅰ和Ⅱ期者33例，Ⅲ和Ⅳ期者17例。另取30例淋巴結反應性增生(RH)患者作為對照組，男16例，女14例，年齡8～74歲，中位年齡38歲。

1.2 方法 所有病理組織標本經4%甲醛溶液固定，石蠟包埋，4 μm連續切片，每例均行蘇木精-伊紅(HE染色)和SP法免疫組織化學染色。0.01 MPBS(pH 7.4)液代替一抗作陰性對照。所用Survivin、PLK1抗體均為鼠抗人單克隆抗體均購自博奧森生物技術有限公司，通用型SP試劑盒及二氨基聯苯胺(DAB)顯色劑均購自北京中杉生物技術公司，染色步驟按照試劑盒說明書進行。

1.3 統計學方法 應用SPSS13.0統計軟件進行分析，采用χ2檢驗，Survivin及PLK1蛋白表達之間的相關性分析采用Spearman等級相關性分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 Survivin和PLK1在T細胞淋巴瘤及反應性增生淋巴組織中的表達 Survivin蛋白陽性著色主要定位于細胞核中，Survivin在T細胞淋巴瘤中的表達陽性率為70.0%(35/50)，顯著高于反應性增生淋巴組織(43.3%，13/30)(χ2=5.486，P＜0.05)。PLK1蛋白陽性著色定位于細胞漿中。T細胞淋巴瘤中PLK1蛋白表達陽性率為72.0%(36/50)，顯著高于反應性增生淋巴組織40.0%(12/30)(χ2=7.900，P＜0.01)(見圖1、圖2)。

圖1 免疫組化檢測survivin在T細胞淋巴瘤及反應性增生淋巴組織中的表達(×400)

圖2 免疫組化檢測PLK1在T細胞淋巴瘤及反應性增生淋巴組織中的表達(×400)

2.2 T細胞淋巴瘤中Survivin、PLK1的表達與其惡性程度、臨床分期的關系 惰性、侵襲性及高侵襲性淋巴瘤中Survivin蛋白表達陽性率分別為40.0%、88.5%、100.0%，經統計學分析，三組之間的表達差異有統計學意義(P＜0.01)。Ⅰ期和Ⅱ期患者Survivin蛋白表達陽性率為57.6%，而在Ⅲ期和Ⅳ期患者中的表達顯著增高，陽性率為94.1%，經統計學分析，二者之間差異有統計學意義(P＜0.01)。

惰性、侵襲性及高侵襲性淋巴瘤中PLK1蛋白表達陽性率分別為40.0%、92.3%、100.0%，三組之間的表達差異有統計學意義(P＜0.01)。Ⅰ期和Ⅱ期患者PLK1蛋白表達陽性率為60.6%，而在Ⅲ期和Ⅳ期患者中的表達顯著增高，陽性率為94.1%，經統計學分析，二者之間的表達差異統計學意義(P＜0.05)，見表1。

2.3 T細胞淋巴瘤中Survivin，PLK1的表達與性別、年齡、發生部位的關系 Survivin，PLK1蛋白在不同性別、年齡、發生部位中的表達差異均無統計學意義(P＞0.05)，見表1。

表1 T細胞淋巴瘤中Survivin，PLK1的表達與臨床病理參數的關系

2.4 Survivin與PLK1在T細胞淋巴瘤中表達的相關性 經Spearman等級相關分析發現Survivin與PLK1蛋白的表達呈顯著正相關(r=0.467，P=0.001)，見表2。

表2 T細胞淋巴瘤中Survivin與PLK1蛋白表達之間的關系

3 討 論

Survivin是1997年美國耶魯大學的Ambrosini等利用效應細胞蛋白受體-1(EPR-1)cDNA從人類基因組庫中篩選出的一個基因。Survivin與細胞分裂、增殖有關，在成熟分化組織中不表達或弱表達，而在胚胎組織及腫瘤組織中表達。Survivin在細胞周期G2/M期呈高表達,可能通過直接抑制caspase23和caspase27而參與腫瘤的發生發展。研究表明,Survivin在多種腫瘤組織中表達上調,并且與腫瘤的組織學分級、臨床分期、復發、轉移及多藥耐藥密切相關[1-2,6-7]。本研究中Survivin在T細胞淋巴瘤中高表達，且與腫瘤惡性程度、臨床分期顯著相關；而與性別、年齡、發生部位無關。提示，survivin蛋白高表達可能是T細胞淋巴瘤發生發展的重要生物學標志。利用RNA干擾技術抑制Survivin的表達能誘導人HL-60白血病細胞發生凋亡[8]。Cheson等[9]研究建議在彌漫性大B細胞淋巴瘤Ⅱ期患者中可聯合使用Survivin抑制劑YM155與利妥昔單抗。結合本實驗，我們推測在T細胞淋巴瘤中survivin是否也可作為基因靶向治療的目標。PLK1是細胞周期重要調控因子，許多調節細胞周期的重要分子Cdc2、p53、CyclinB1、Bcl-2等都是PLK-1的作用底物。在多種實體腫瘤組織中，如乳腺癌、卵巢癌、子宮內膜癌、膠質瘤等均有過表達，且與這些腫瘤組織學分級、侵襲轉移、臨床分期及患者預后存在密切相關。本研究中，PLK1在T細胞淋巴瘤中顯著高表達，且其高表達與腫瘤惡性程度、臨床分期相關，而與性別、年齡、發生部位無關，提示PLK1蛋白高表達可能與T細胞淋巴瘤的發生發展密切相關。在T細胞淋巴瘤中檢測PLK1蛋白表達情況可能對其診斷、治療及預后判斷具有重要意義。已有研究者以PLK1為靶目標對腫瘤進行治療，結果都能有效抑制腫瘤細胞的增殖[10]。在T細胞淋巴瘤中PLK1也有望成為基因靶向治療的目標。以上推測需進一步研究予以證實。

Survivin和PLK1均作用于G2/M期而調控細胞周期且均能抑制細胞凋亡而發揮促進腫瘤發生發展作用。He等[4]在肝癌細胞中研究發現Survivin蛋白是PLK1的靶基因之一。Feng等[5]發現在食管鱗狀細胞癌中PLK1也可能通過上調Survivin表達而發揮其促進腫瘤發生發展的作用。Colnaghi等[11]也認為PLk1可能通過磷酸化Survivin而調控細胞周期。為此，我們采用了免疫組化方法在T細胞淋巴瘤中進行兩者表達之間的相關性研究；結果顯示Survivin、PLK1在T細胞淋巴瘤中均呈高表達，且兩者的表達呈顯著正相關。因此，我們初步推測，在T細胞淋巴瘤中Survivin蛋白可能是PLK1的靶基因之一，兩者在T細胞淋巴瘤中可能發揮協同作用，相互促進腫瘤的發生發展。

總之，聯合檢測Survivin、PLK1對T細胞淋巴瘤的預后判斷及指導治療具有一定的現實意義，兩者有望成為T細胞淋巴瘤新的預后判定標志物和基因靶向治療的工具。但由于T細胞淋巴瘤的發生發展是多基因參與調節的復雜過程，Survivin、PLK1在T細胞淋巴瘤中的表達及其生物學功能與臨床意義尚待進一步研究。

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