飼料中添加不同油脂對奧尼羅非魚生長發育、體內抗氧化能力和血液生化指標的影響

韓春艷 鄭清梅 馮麗娜

眾所周知，脂肪除了作為生命活動的重要能量來源外，還可為動物提供必需的脂肪酸和磷脂，參與細胞膜構成，促進脂溶性維生素的吸收和運輸等。研究表明，飼料中的不同脂肪來源不僅直接影響魚類的生長發育及體內脂肪酸的組成[1－3]，還會影響魚類體內的免疫機能，包括特異性免疫和非特異性免疫[4－5]。但目前不同脂肪源對魚類的抗氧化機能影響的研究鮮有報道。

本研究以目前我國廣泛養殖的奧尼羅非魚為養殖對象，研究富含高不飽和脂肪酸的魚油、富含飽和脂肪酸的豬油、富含亞油酸（n－6）的豆油以及富含油酸（n－9）的茶油對其體內抗氧化酶的活性以及對血液相關指標的影響，以期為深入研究羅非魚的營養生理、生化的理論基礎研究，研制優質飼料配方，進一步提高羅非魚的產量和質量提供依據。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

試驗選用的奧尼羅非魚幼魚，從廣東省梅州市水產研究所購得，試驗前暫養于水泥池中。用商品配合飼料馴食14 d，然后選擇體重基本一致的健康魚180尾，隨機分為4組，每組設3個重復，每個重復15尾分養于長×寬×高為1.5 m×1 m×1 m的水族箱中。各處理組的初始體重無顯著差異，平均體重約(4.60±0.5)g。

1.2 試驗飼料

飼料的蛋白水平設計約為30%，能量11 kJ/g左右。飼料中分別添加4.5%豬油、魚油、豆油和茶油（設為豬油組、魚油組、豆油組和茶油組）。對所需飼料一次性配合好，并對飼料進行制粒，自然風干后置于4℃下進行保存。試驗飼料配方及營養水平見表1。

表1 試驗飼料配方及營養水平

1.3 飼養管理

飼養試驗在廣東省嘉應學院生命科學學院實驗室進行。飼料每日飼喂量按魚體重的3%～5%進行飼喂，以魚飽食為準。每天分2次(9:00、16:00投喂)，每次投料60 min后，將每個水族箱中沒有被采食的飼料用尼龍網撈出，曬干后稱重。正式試驗期為70 d，試驗開始及結束時稱重，測定增重率（WGR）。每天記錄水溫、pH值以及魚的尾數，并觀察魚體活動是否正常。

1.4 樣品采集與分析

70 d的養殖試驗結束后，稱取各水族箱內魚體總重，每箱取3尾，每個試驗組共取9尾，小心取其肝臟樣品，并迅速置于液氮中保存。之后轉移至－80℃冰箱中以待分析。

肝臟的抗氧化指標測定：肝臟組織樣品在4℃下解凍，剪碎，按質量體積比1：9(w/v)加入預冷的生理鹽水，玻璃勻漿器勻漿，勻漿經3500 r/min離心10 min取上清備用。總抗氧化能力(T－AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶 (GSH－Px)和丙二醛(MDA),均用南京建成生物工程研究所試劑盒測定。

組織勻漿蛋白質含量用蛋白質測定試劑盒（考馬斯亮藍法）測定。

血清樣品的制備：采用尾動脈采血法，將魚固定在冰盤上，將注射器在臀鰭后部插入椎體回血即可采血，血樣于4℃冰箱靜置24 h，3000 r/min、4℃離心10 min得血清樣品。每個水族箱中取4～6尾魚血清樣品合并，保存于－20℃冰箱中以待分析。

血液生化指標：血清總甘油三酯(TG)、血清總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL)含量均使用梅州市中醫院自動生化測定儀測定。

1.5 統計分析

采用SPSS 16.0軟件對所得相關數據進行單因素方差分析(One－Way ANOVA)，并進行 Duncan's法多重比較，P＜0.05表示具有顯著性差異。所有結果以平均值±標準差(Mean±SD.)表示。

2 結果與分析

2.1 飼料中不同的油脂來源對奧尼羅非魚生長發育的影響(見表2)

由表2可知，豆油組、魚油組及茶油組的增重率均顯著高于豬油組（P＜0.05），且豆油組、魚油組及茶油組之間差異不顯著（P＞0.05）。

表2 飼料中不同的油脂來源對奧尼羅非魚生長發育的影響

2.2 飼料中不同的油脂來源對奧尼羅非魚抗氧化性能的影響(見表3)

由表3可知，豆油組、魚油組和茶油組魚體肝臟超氧化物歧化酶(SOD)的活性無明顯差異，但均顯著高于豬油組(P＜0.05)；各組魚體肝臟谷胱甘肽過氧化物酶(GSH－Px)活性依次為：魚油組＞豬油組＞茶油組＞豆油組，魚油組顯著高于茶油組、豆油組(P＜0.05)，豬油組分別與茶油組和魚油組之間差異不顯著(P＞0.05)；各組魚體肝臟總抗氧化力(T－AOC)依次為：茶油組＞魚油組＞豬油組＞豆油組，茶油組顯著高于豬油組和豆油組；魚體肝臟內丙二醛(MDA)含量依次為：豬油組＞豆油組＞魚油組＞茶油組，豬油組顯著高于其它各組(P＜0.05)。

2.3 飼料中不同的油脂來源對奧尼羅非魚血清生化指標的影響(見表4)

表3 飼料中不同的油脂來源對奧尼羅非魚抗氧化能力的影響

表4 飼料中不同的油脂來源對奧尼羅非魚血清生化指標的影響

由表4可知，飼料中不同的油脂來源對各血清生化指標除血清總膽固醇（TC）外均會產生明顯影響。其中，血清中總甘油三酯（TG）的含量依次為：豆油組＞豬油組＞魚油組＞茶油組，魚油組與茶油組之間差異不顯著(P＞0.05)；魚油組、茶油組血清中高密度脂蛋白膽固醇（HDL）明顯高于豆油組和豬油組（P＜0.05），魚油組與茶油組之間，豆油組與豬油組之間差異不顯著；血清中低密度脂蛋白膽固醇（LDL）濃度依次為：茶油組＞魚油組＞豆油組＞豬油組，魚油組、豆油組和茶油組之間差異不顯著(P＞0.05)。魚油組和茶油組的高、低密度脂蛋白濃度比值(HDL/LDL)顯著高于豬油組和豆油組(P＜0.05)，其中魚油組和茶油組、豬油組和豆油組之間差異不顯著(P＞0.05)。

3 討論

3.1 不同油脂對奧尼羅非魚生長及抗氧化能力的影響

一般來說，魚類對魚油的利用率較高，對豬油和植物油的利用率較低[6－8]。研究表明[8]，在奧尼羅非魚的飼料中添加亞麻籽油、亞麻籽油與棕櫚油混合的油脂（2：1、3：2）、魚油以及谷物油對其生長發育不會產生明顯的影響。在對其它淡水魚的研究中也有類似結果。Noffs等[9]研究發現，豬油、豆油代替飼料中的魚油對鴨嘴鯰的存活率、終末體重、特定生長率及飼料轉化效率均無明顯影響。本研究經過10周的養殖試驗，各組試驗魚生長狀況良好，均未出現明顯的脂肪酸缺乏的癥狀。本研究發現魚油組、豆油組及茶油組試驗魚的終體重及增重率均無明顯差異，說明奧尼羅非魚能可以充分利用以上油脂作為其生長的能量來源，但豬油組的相關生長指標卻顯著降低說明其在一定程度上對豬油的利用有限制。

動物細胞生存要求適當的氧化與抗氧化平衡。魚體內抗氧化酶的缺乏會導致體內原有的自由基代謝平衡遭到破壞[10]。自由基可與細胞膜、細胞器膜上的不飽和脂肪酸發生脂質過氧化反應，產生醛、酮、醇和環氧化物（如典型代表產物MDA），從而影響機體的物質代謝，危及正常的生命活動[11]。正常情況下，體內產生的自由基即活性氧可被非酶性或酶性抗氧化系統清除掉。其中SOD和GSH－Px是魚體內的主要抗氧化酶，SOD能催化超氧陰離子(O2－·)產生歧化反應，清除超氧陰離子(O2－·)，保護細胞免受損傷。GSH－Px能特異的催化還原型谷胱甘肽(GSH)對H2O2的還原反應，保護細胞膜結構和功能的完整性。

王朝明等[12]研究表明，飼料的脂肪水平直接影響胭脂魚幼魚的抗氧化能力。同時n－3 PUFA可明顯改善體內的脂質過氧化作用[13－14]。楊小軍等[15]研究發現，多不飽和脂肪酸對肉仔雞抗氧化指標有一定影響，日糧中添加魚油和玉米油后均使21日齡肉仔雞脾臟中SOD活性得到提高，但在42日齡時均未表現顯著影響。尹彩娜等[16]對小鼠的研究發現，在飼料中添加茶油與豬油比較，茶油組明顯提高小鼠肝臟的抗氧化能力（T－AOC、SOD 和 GSH－Px），并降低 MDA 的含量。

本研究表明，飼料中不同的油脂來源對魚類的抗氧化性能產生明顯的影響。茶油組、魚油組及豆油組魚體肝臟內SOD的活力均顯著高于豬油組，而魚油組GSH－Px活力顯著高于豆油組和茶油組，豆油組GSH－Px活力最低，說明不同油脂對抗氧化酶的作用具有特異性。從T－AOC及MDA指標看，茶油和魚油更適合奧尼羅非魚的健康。

3.2 不同油脂對奧尼羅非魚血液指標的影響

魚類的血液生理和生化指標被廣泛地用來反映魚類機體的新陳代謝水平和生理狀況，一定程度上可以更準確地反映魚類營養狀況的好壞。血清中脂類只占全身的脂肪含量極少的一部分，但代謝上卻非常活躍。腸道吸收的外源性食物脂類、肝臟合成的內源性脂類及脂肪組織的動用都須先經血液再到其它組織，而且魚類脂肪的運輸，主要借助于血清。因此，血脂水平可以反映全身脂類代謝狀況，血液中70%～80%的膽固醇來自肝臟，其余來自消化道，如肝細胞功能障礙和結構損害，則血清膽固醇可迅速升高[17]。低密度脂蛋白和高密度脂蛋白在動物體內都有重要作用：低密度脂蛋白把膽固醇從肝臟運送到全身組織，高密度脂蛋白將各組織的膽固醇送回肝臟代謝。當低密度脂蛋白過量時，它攜帶的膽固醇便積存在動脈壁上，久了容易引起動脈硬化。高密度脂蛋白與低密度脂蛋白的比值在一定程度上能夠反映機體的脂類代謝情況。

飼料中不同的脂肪來源會直接影響動物血液相關的生化指標[16]。其主要原因是不同的脂肪酸可直接或間接作用于與脂類代謝相關酶從而調節脂類的代謝[18]。特別是n－3 PUFA對降低血液中TG含量有明顯作用，但對TC的作用程度不一，總體是效果沒有對TG的降低明顯[19]。本研究發現，飼料中不同的油脂來源對各血清中除TC濃度無明顯影響外，對TG、HDL、LDL以及二者比值均產生明顯影響。

飼料中不同的油脂來源以及不同種類的魚有不同的結果。高露姣等[20]在自配的基礎飼料中分別添加豬油、葵花籽油、魚油、豆油、混合油(魚油：豆油：豬油=1：1.2：0.8)和氧化魚油飼喂施氏鱘幼魚。試驗結果顯示：各組間幼魚的血液幾項指標均有較大差異。從該試驗看來，豬油組、葵花籽油組和氧化魚油組幼魚的血清TG和TC都高于魚油組、混合油組，而其高密度脂蛋白膽固醇含量顯著低于魚油組。吉紅等[21]通過在鯽魚飼料中分別添加豆油、菜油及混合油（二者1：1的比例）發現對鯽魚血清中的TC和TG均無明顯影響。本研究表明，魚油和茶油可明顯提高羅非魚血液中HDL的濃度，同時茶油也可提高血液中LDL的濃度，但從二者比值看，魚油和茶油更有利于奧尼羅非魚體內的脂類代謝。

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