元寶楓黃酮對肉雞免疫機能的影響

趙素君 謝晶 林毅 楊曉梅 李興玉 湯華釗 廖黨金

黃酮類化合物廣泛存在于植物體中，是自然界分布較廣泛的一類次生代謝產物，是藥用植物中主要的活性成分之一[1]，在畜牧業生產中的研究應用發現，該化合物能提高飼料轉化率，促進動物生長[2]；提高畜禽機體免疫力[3]，具有抗菌消炎、提高抗氧化應激能力和保健等作用[4－6]。

元寶楓是槭樹科落葉喬木，元寶楓樹葉、果仁、果殼等均具有較高的經濟開發價值[7]。元寶楓葉中含有糖、氨基酸、蛋白質、黃酮、有機酸、強心甙和酚等各類化學成分，其中黃酮類含量較高，一年中，8月份葉中黃酮含量最高；就不同樹齡而言，5年生植株葉中黃酮含量最高(7.26%)[8]。研究表明，元寶楓葉黃酮同銀杏葉黃酮成分、藥理相類似，可廣泛用于食品、醫藥、保健品行業。本文研究元寶楓黃酮對肉雞免疫器官發育、T淋巴細胞轉化率和新城疫抗體效價的影響，旨在探討其對肉雞的免疫調節作用，為其在生產中的應用提供依據。

1 材料與方法

1.1 試驗動物選擇與試驗設計

試驗選用1日齡艾維茵商品代肉仔公雞375只，試驗開始時采用隨機分組的方法，各組體重差異不顯著（P＞0.05）。試驗共分 5個處理，1組為空白對照，2、3、4、5 組分別在基礎日糧中添加 5、10、20、40 mg/kg元寶楓黃酮，每個處理3個重復，每個重復25只雞。

1.2 試驗日糧

試驗采用如下方法制備黃酮：稱取元寶楓干葉50 g,粉碎,置于 1000 ml燒杯中,加水 450 ml，攪拌下加入石灰乳,調pH值8～9，傾出上清液，過濾；殘渣用450 ml水重復提取一次,棄去殘渣,合并濾液,放冷；用稀鹽酸調節pH值4～5，靜置過夜，過濾，干燥，粉碎，得黃酮粗品；計算提取率,并測定提取物中黃酮的含量。分別稱取不同劑量的黃酮，加入少量基礎日糧混勻作為預混料，然后逐級放大，混勻于備用的基礎日糧中。基礎日糧以玉米、豆粕為主，參照肉雞的營養標準配制，基礎日糧組成及營養水平見表1。

表1 基礎日糧組成及營養水平

2 試驗方法

2.1 飼養管理

采用籠養。第1周每日喂料8次，第2周6次，第3周以后每日喂料4次，自由飲水；光照前3 d為24 h，以后每天23 h，強度隨雞日齡增加而遞減；每天記錄雞舍內溫、濕度，觀察雞群健康狀況并記錄發病死亡情況；試驗期間定期進行飲水消毒；7日齡、21日齡滴鼻、點眼免疫新支二聯苗，14日齡、28日齡口服免疫傳染性法氏囊中等毒力活疫苗。

2.2 檢測指標及測定方法

在21、35和49日齡時，每個重復隨機抽取兩只雞，無菌心臟采血12 ml，其中2 ml肝素抗凝，剩余10 ml進行離心制備血清。2 ml抗凝血采用微量全血培養法測定淋巴細胞轉化率[9]，血清用于測定新城疫HI抗體效價。采用口腔屠宰法致死，解剖分離胸腺、脾臟和法氏囊，用濾紙吸凈組織表面血液后稱重，計算免疫器官與體重的相對重量（免疫器官指數）。

2.3 數據處理與統計分析

試驗數據分析采用SPSS13.0進行處理。采用Oneway ANOVA進行方差分析，LSD法進行組間比較。

3 結果與討論

3.1 對免疫器官發育的影響(見表2)

免疫器官稱重法是目前研究機體免疫狀況的方法之一。一般認為，免疫器官重量降低為免疫抑制所致，而免疫器官重量增加則為免疫增強的表現[2]。由表2可看出，元寶楓黃酮對胸腺發育的影響，在3周齡時除了試驗2組外，胸腺指數均極顯著高于對照組（P＜0.01），并且隨劑量增加呈現顯著增長的趨勢；當到第5周齡時，所有試驗組仍然極顯著高于對照組（P＜0.01），其中中等添加劑量對胸腺發育促進作用明顯；7周齡時各試驗組間差異不顯著，但都極顯著高于對照組(P＜0.01)。對法氏囊發育的影響表明，3周齡時試驗3、5組極顯著高于對照組和其它試驗組 (P＜0.01)，5周齡時試驗2、3組法氏囊指數極顯著高于其它組(P＜0.01)，到了7周齡時試驗4組極顯著高于對照組和其它試驗組(P＜0.01)，不同添加劑量的黃酮對不同時期法氏囊發育存在不同程度的影響。對于脾臟的影響，除了5周齡時試驗5組的脾臟指數與對照組相比差異極顯著外，其他不同添加量對肉公雞脾臟發育影響不大。

表2 肉雞免疫器官指數變化

3.2 對T淋巴細胞轉化率的影響(見表3)

表3 元寶楓黃酮對肉雞T淋巴細胞轉化率的影響

在第3、5、7周齡，與對照組相比，各試驗組都極顯著提高了T淋巴細胞的轉化率（P＜0.01），并且在3周齡時高劑量組優勢較明顯，5周齡時第4組(20 mg/kg)能較顯著地提高T淋巴細胞轉化率，到了第7周齡，添加量的多少對T淋巴細胞轉化率的影響不顯著。

3.3 對新城疫免疫后抗體效價的影響(見表4)

表4 元寶楓黃酮對肉雞新城疫HI抗體效價的影響

試驗發現，3周齡時試驗2、3組HI抗體效價低于對照組，4、5 組高于對照組，差異顯著(P＜0.05)；5 周齡時3、4組低于對照組，而2組明顯高于對照組，差異顯著(P＜0.05)，高劑量的5組與對照組相比差異不顯著 (P＞0.05)；7周齡時試驗組與對照組相比差異不顯著。結果表明，肉公雞在生長前期添加高劑量的黃酮能有效促進體液免疫，而在生長中后期則以低劑量的添加效果較好。

胸腺是免疫系統的重要器官，參與機體的非特異性免疫功能，對細胞免疫及體液免疫也有重要調節作用，胸腺指數變化反應胸腺參與機體免疫、提高機體抗病能力。脾臟是體內產生抗體的重要器官，其指數增加對機體細胞免疫過程中致敏T細胞的產生和抗體的形成都有促進作用，只是本試驗中脾臟指數變化和T淋巴細胞轉化率之間似乎不存在這種促進關系，元寶楓黃酮在不提高脾臟指數的情況下仍可促進T淋巴細胞轉化率。法氏囊是禽類特有的中樞免疫器官，其重量增加可促進B細胞的誘導分化和成熟，促進機體的體液免疫，但是和新城疫抗體效價變化比較，ND－HI抗體效價并不隨法氏囊的發育增長而提高，元寶楓黃酮是通過什么方式影響ND－HI抗體效價還需要進一步研究討論。

綜上所述，元寶楓黃酮能夠不同程度地提高肉公雞的免疫機能，但是不同添加劑量對不同生長期的免疫機能的促進程度不同，如果從提高免疫機能方面進行飼料添加，還需根據不同生長期進行深入討論。

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[7]王蘭珍，馬希漢，王姝清.元寶楓研究進展[J].西北林學院學報，1998，13(1)：96－100.

[8]王蘭珍,馬希漢,王姝清,等.元寶楓葉有效成分動態變化的研究[J].西北林學院學報，1997，12(4)：68－71.

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