VEGF-C mRNA在結直腸癌中的表達及其與腫瘤發展的關系

裴永彬，賀新奇，孟麗敏，劉 云，趙增仁

（河北醫科大學第一醫院普外科，河北石家莊050031）

VEGF-C mRNA在結直腸癌中的表達及其與腫瘤發展的關系

裴永彬，賀新奇，孟麗敏，劉 云，趙增仁*

（河北醫科大學第一醫院普外科，河北石家莊050031）

目的檢測結直腸癌中血管內皮生長因子-C（vascular endothelial growth factor-C，VEGF-C）mRNA水平的表達，探討其與腫瘤發展的關系及臨床意義。方法選取臨床及病理資料完整的結直腸癌患者42例，采用逆轉錄-聚合酶鏈反應法檢測手術切除的結直腸癌標本及配對的正常結直腸黏膜組織中VEGF-C mRNA的表達，分析其與各臨床病理參數之間的關系。結果在42例配對結腸癌標本中，癌與對應正常黏膜VEGF-C mRNA的相對表達量分別為0.545±0.273、0.494±0.330，在癌組織中輕度高表達，但二者差異無統計學意義（P＞0.05）；Duke分期C及D期患者VEGF-C mRNA水平明顯高于A和B期（0.724±0.210 vs 0.445±0.257，P＜0.05）；TNM分期Ⅲ+Ⅳ期較Ⅰ+Ⅱ期VEGF-C mRNA有升高趨勢，但差異無統計學意義（0.660±0.230 vs 0.401±0.317，P＞0.05）；淋巴結轉移組VEGF-C mRNA也呈高表達狀態（0.773±0.159 vs 0.473±0.264，P＜0.05）；VEGF-C mRNA在腫瘤浸潤超過漿膜層的患者表達水平高（P＜0.05）；VEGF-C mRNA在不同性別、年齡、腫瘤位置及分化程度分組中差異無統計學意義（P＞0.05）。結論結直腸癌組織中VEGF-C mRNA表達與淋巴結轉移、侵襲有關，可作為一個獨立的預后因子應用于結直腸癌患者的病情監測和預后判斷。

結直腸腫瘤；血管內皮生長因子；免疫組織化學

血管和淋巴管是腫瘤微環境的重要組成部分。它們是受腫瘤細胞表達的促血管、淋巴管生成因子刺激而形成的。腫瘤細胞營造了一個適合腫瘤生長（包括血管、淋巴管生成）的間質微環境；這個微環境除了與腫瘤細胞相互作用的間質細胞，還包括一個復雜的細胞因子網絡［1］。血管內皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）家族中的分子是其中目前研究最火熱的細胞因子，特別是VEGF-C［2-3］和VEGF-D。免疫組織化學研究提示VEGF-C和VEGF-D在結直腸癌侵襲的邊緣，并且與淋巴轉移這個臨床特征有關，但是關于兩者mRNA水平的表達一直存在爭議［4］。本文就VEGF-C在結直腸癌中的mRNA水平進行了研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料：2007—2009年河北醫科大學第一醫院經病理診斷證實的結直腸癌患者42例，男性25例，女性17例，年齡31～90歲，平均（61.00± 3.75）歲。收集手術切除結直腸癌標本及配對的正常結直腸黏膜組織。癌標本取材于瘤體的邊緣，而正常組織取材遠離癌標本達5cm以上。所有標本在離體后15min內放入液氮，然后轉入-80℃冰箱保存備用。

1.2 VEGF-C mRNA檢測方法：采用逆轉錄-聚合酶鏈反應法。取新鮮組織50mg置于無RNA酶的勻漿器中，快速加入Trizol 1mL勻漿，按Trizol試劑盒說明書提取總RNA。分光光度計檢測其吸光度，其OD260/280值為1.8～2.0，經1%瓊脂糖［含溴化乙烷（ethidium bromide，EB）0.5mg/mL］電泳可見28S、18S兩條亮帶并且亮度呈2∶1關系，說明總RNA無降解。取2μg總RNA逆轉錄合成cDNA，用primer 5軟件設計VEGF-C的引物序列，以管家基因β-actin作為內參照。反應條件，95℃30s，54℃30s，72℃30s，30個循環。PCR擴增產物經1.5%瓊脂糖凝膠電泳（100V，1h），置紫外燈下拍照后進行面積灰度掃描。計算目的基因產物與β-actin基因RT-PCR產物吸光度容積之比值作為目的基因mRNA的相對含量。

1.3 統計學方法：應用SPSS16.0統計軟件進行數據分析。計量資料以±s表示，組間比較采用兩獨立樣本的t檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

在42例配對結腸癌標本中，癌與正常組織的VEGF-C相對表達量分別為0.545±0.273、0.494±0.330，癌組織中VEGF-C輕度高表達，但差異無統計學意義（P＞0.05）；Duke分期C+D期患者mRNA水平明顯高于A+B期（0.724±0.210 vs 0.445±0.257，P＜0.05）；淋巴結轉移組VEGFC表達也呈高表達狀態（0.773±0.159 vs 0.473± 0.264，P＜0.05）；TNM分期Ⅲ+Ⅳ期的VEGF-C有升高趨勢（0.660±0.230 vs 0.401±0.317，P＞0.05）；VEGF-C在浸潤超過漿膜層的患者表達水平高（0.653±0.268 vs 0.427±0.247，P＜0.05）。VEGF-C mRNA表達水平在不同性別、年齡、腫瘤位置及分化程度分組中差異無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 VEGF-C mRNA在腫瘤組織中表達量與臨床病理參數之間的關系Table 1 Correlation of VEGF-C mRNA expression with clinicopathologic features in colorectal tumor（±s）

表1 VEGF-C mRNA在腫瘤組織中表達量與臨床病理參數之間的關系Table 1 Correlation of VEGF-C mRNA expression with clinicopathologic features in colorectal tumor（±s）

ParametersnVEGF-C mRNA tP Sex Male Female 25 17 0.576±0.278 0.450±0.2720.6730.508 Age＞61 years≤61 years 20 22 0.608±0.297 0.487±0.2451.1140.277 Duke A+B C+D 27 15 0.445±0.257 0.724±0.2102.7810.011 Tumor location Dectum Colon 20 22 0.600±0.286 0.486±0.2561.0500.304 Depth of invasion Exceeding serosa Not exceeding serosa 22 20 0.653±0.268 0.427±0.2472.1320.045 Lymph node metastasis No Yes 26 16 0.473±0.264 0.773±0.1592.6100.016 TNMⅠ+ⅡⅢ+Ⅳ26 16 0.401±0.317 0.660±0.2301.8500.075 Differentiation Low High 11 31 0.562±0.278 0.547±0.2740.1040.920

3 討 論

眾所周知，結直腸癌最常見的轉移方式是淋巴轉移，并且是否發生淋巴轉移是預測結直腸癌患者預后的關鍵因素。盡管目前人們普遍認為結直腸癌淋巴管生成在轉移過程中發揮作用，但在淋巴管密度與腫瘤轉移的關系問題上仍未達成一致。Furudoi等［5］認為腫瘤表面的VEGF-C表達與結直腸癌臨床病理特征無明顯關系。Hanrahan等［6］研究發現VEGF-C表達與淋巴結轉移無關。還有研究顯示結直腸腫瘤中VEGF-C表達水平沒有升高［7］。本研究檢測了42例結直腸癌組織及其配對正常黏膜組織VEGF-C mRNA的表達，發現在癌組織中其表達水平有升高的趨勢，這可能與取材靠近腫瘤邊緣有關。研究顯示VEGF-C表達在腫瘤邊緣明顯增高［8］。多種體內模型顯示過表達VEGFC和VEGF-D可以促進腫瘤侵襲及淋巴結轉移，而這個作用會被游離VEGFR-3或VEGF-D單克隆抗體以及作用于VEGF-C的siRNA抑制［9］。免疫組織化學研究顯示VEGF-C的高表達與淋巴管密度、TNM分期、腫瘤轉移等臨床特征有關［10-13］。我們發現TNM分期較低者（Ⅰ+Ⅱ）VEGF-C表達較低，而侵襲深度超過漿膜層患者其表達水平明顯升高。

Zhang等［14］研究發現VEGF-C與胰島素樣生長因子受體同時高表達與淋巴結轉移有很強的的相關性，而且在表達胰島素樣生長因子受體的結直腸癌細胞中，胰島素樣生長因子刺激能導致VEGF-C mRNA表達的升高。Du等［10］研究顯示VEGF-C與高轉移相關蛋白表達上調與淋巴結轉移及Duke分期有關。本研究顯示在Duke C+D期VEGF mRNA水平明顯升高，而且與淋巴結轉移有關。

大腸癌的淋巴轉移是個復雜的過程，盡管其分子機制尚未完全闡明，但VEGF-C在促進大腸癌淋巴管生成和腫瘤轉移中發揮著重要作用。臨床分析顯示VEGF-C與結直腸癌淋巴結轉移、侵襲有關，可以作為一個獨立的預后因子應用于大腸癌患者的病情監測和預后判斷。這些研究的深入將為大腸癌轉移的預防和治療提供新的方向和思路。

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（本文編輯：趙麗潔）

RELATIONSHIP BETWEEN THE EXPRESSION OF VEGF-C mRNA AND TUMOR EVOLUTION IN COLORECTAL CANCER

PEI Yongbin，HE Xinqi，MENG Limin，LIU Yun，ZHAO Zengren*
（Department of General Surgery，the First Hospital of Hebei Medical University，Shijiazhuang 050031，China）

ObjectiveTo investigate the relationship between the expression of vascular endothelial growth factor-C（VEGF-C）mRNA and tumor evolution in colorectal cancer.MethodsForty-two colorectal cancer tissues and normal tissues were selected randomly，reverse transcriptionpolymerase chain reaction（RT-PCR）was used to detect the expression of VEGF-C mRNA.All specimens had complete clinicopathologic data.ResultsRT-PCR showed the expression of VEGF-C mRNA in colorectal cancer and normal tissue were 0.545±0.273 and 0.494±0.330，respectively. However，VEGF-C mRNA was mildly high expressed in adenoma tissues，but there was no significance compared with the normal tissues（P＞0.05）.The expression of VEGF-C mRNA in Dukes C+D were significantly higher than Dukes A+B（0.724±0.210 vs 0.445±0.257，P＜0.05）.There was an increasing tendency of VEGF-C mRNA expression in TNM stageⅢ+Ⅳ（0.660±0.230 vs 0.401± 0.317，P=0.075），and high expression in lymph node metastasis group（0.773±0.159 vs 0.473± 0.264，P＜0.05）.The expression of VEGF-C mRNA were closely correlated with lymph node metastasis（P＜0.05），but not with patient's sex，age，differentiation degree and tumor location（P＞0.05）.ConclusionThis study suggests that the expression of VEGF-C mRNA in CRC is associatedwith lymph node metastasis and invasion depth，and it may be used as an independent factor for disease surveillance and prognosis assessment.

colorectal neoplasms；vascular endothelial growth factor C；immunohistochemistry

R735.3

A

1007-3205（2012）12-1396-03

2012-06-04；

2012-11-23

河北省衛生廳青年科技課題（20100263）

裴永彬（1977-），男，河北邯鄲人，河北醫科大學第一醫院主治醫師，醫學碩士，從事普外科疾病診治研究。

*通訊作者

10.3969/j.issn.1007-3205.2012.12.012