ETBE-EGTA-PEG-200混合溶石劑對(duì)動(dòng)物的局部和全身毒性研究

張建群，喬自勇

（河北省巨鹿縣醫(yī)院外一科，河北巨鹿055250）

ETBE-EGTA-PEG-200混合溶石劑對(duì)動(dòng)物的局部和全身毒性研究

張建群，喬自勇*

（河北省巨鹿縣醫(yī)院外一科，河北巨鹿055250）

目的為了評(píng)價(jià)乙基叔丁基醚（ethy1 tertbuty1 ether，ETBE）-乙二醇二乙醚二胺四乙酸［ethy1ene bis （oxgethy1eneitrio1）acid，EGTA］-聚乙二醇-200（PEG-200）的毒性作用，探討其在灌注溶解治療膽固醇結(jié)石的可能性。方法對(duì)比單獨(dú)使用ETBE對(duì)動(dòng)物的局部組織和全身毒性的作用。局部毒性實(shí)驗(yàn)是對(duì)大白兔膽囊進(jìn)行藥物灌注后，病理觀察組織變化。全身毒性實(shí)驗(yàn)是通過(guò)對(duì)小白鼠腹腔注射藥物的半數(shù)致死量（1etha1 dose 50，LD50）作對(duì)比。結(jié)果混合溶石劑的LD50比ETBE的LD50增加21.3%（混合溶石劑LD50=2.28mL/kg，95%可信區(qū)間=1.98～2.06mL/kg；ETBE LD50=1.88%mL/kg，95%可信區(qū)間=1.73～2.02mL/kg）。結(jié)論混合溶石劑對(duì)動(dòng)物局部組織和全身毒性作用比ETBE小，且對(duì)各類結(jié)石的溶石率均在90%～100%，是一種安全高效的溶石劑。

結(jié)石；毒性實(shí)驗(yàn)；動(dòng)物

甲基叔丁基醚（methy1 tertiary buty1 ether，MTBE）和乙基叔丁基醚（ethy1 tertbuty1 ether，ETBE）原本是新型的汽油添加劑，可代替四乙基鉛用作綠色環(huán)保防爆劑［1-2］。劉君等［3］進(jìn)行了ETBE和MTBE對(duì)動(dòng)物局部和全身毒性的對(duì)比實(shí)驗(yàn)研究，為進(jìn)一步了解MTBE、ETBE和機(jī)體的毒性，探討它們?cè)谂R床應(yīng)用的可能性。有作者曾對(duì)ETBE-乙二醇二乙醚二胺四乙酸［ethy1ene bis（oxgethy1eneitrio1）acid，EGTA］與5%氫氧化鈉溶合行體外溶石研究，對(duì)各類結(jié)石的溶石效率在90%～100%［4］。由于其中5%氫氧化鈉對(duì)動(dòng)物膽囊有一定的腐蝕性，所以在此基礎(chǔ)上，開發(fā)了ETBE-EGTA-聚乙二醇-200 （po1yethy1eneg1yco1-200，PEG-200）混合劑，其保持了原有融合劑的的體外溶石率90%～100%，但對(duì)動(dòng)物局部和全身毒性卻明顯降低，有望作為安全有效的溶石劑進(jìn)行臨床應(yīng)用。

1 材料與方法

1.1 材料：實(shí)驗(yàn)用結(jié)石，取自本院外科患者。根據(jù)結(jié)石成分分析，選擇膽固醇型（固醇含量＞60%）、色素型（膽紅素鈣含量＞60%）、混合型（固醇及膽紅素含量各占50%左右）。ETEB-EGTA-PEG-200為自制混合溶石劑，分別將3種分析純?cè)噭┌匆欢ū壤湮椋粚?shí)驗(yàn)用大白兔和大白鼠為購(gòu)買飼養(yǎng)。微量注射器為上海醫(yī)用激光儀器廠產(chǎn)品。

1.2 混合溶石的體外溶合實(shí)驗(yàn)：按文獻(xiàn)［4］方法，將混合劑中ETBE、EGTA分別單獨(dú)對(duì)3種膽結(jié)石進(jìn)行體外溶石實(shí)驗(yàn)，觀察ETBE、EGTA的主要作用和溶石率。

1.3 溶石劑灌注膽囊的局部毒性實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)按文獻(xiàn)［3］方法進(jìn)行。大白兔20只，雌性，體質(zhì)量2.2～2.6kg，平均2.4kg。用戊巴比妥鈉靜脈麻醉，開腹后用細(xì)針頭在膽囊底部穿刺，將膽囊抽空，注射混合溶劑0.8mL。關(guān)腹前檢查有無(wú)溶石劑外滲和膽囊壁出血。術(shù)后8、24、72h，7d分別在2組中各取2只動(dòng)物，采用放血法處死動(dòng)物。尸檢觀察動(dòng)物腹部和膽囊的情況，并取膽囊、膽總管、十二指腸、肝腎臟和雙肺送病理檢查。最后將混合溶劑與文獻(xiàn)［3］報(bào)道的ETBE結(jié)果比對(duì)。

1.4 腹腔內(nèi)注射半數(shù)致死量（1etha1 dose 50，LD50）實(shí)驗(yàn)：小白鼠50只，雄性，體質(zhì)量19～24g，平均21g。分5組，每組10只，分別注射混合溶石劑。以2周內(nèi)死亡數(shù)計(jì)算病死率。為了進(jìn)一步了解溶石劑的毒性作用，解剖死亡小鼠，并送肝、腎臟和雙肺病理檢查。

2 結(jié) 果

2.1 混合溶石劑中各組分的溶石效果及毒性分析：①使用ETBE分別對(duì)膽固醇型、色素型、混合型結(jié)石進(jìn)行溶石實(shí)驗(yàn)，4h內(nèi)溶石率分別為固醇型90%～100%，混合型60%～70%，色素型20%～30%。表明ETBE是固醇型結(jié)石的良好溶劑；因?yàn)楣檀夹湍懡Y(jié)石中固醇含量＞60%，而ETBE是一種極性很弱的脂溶性溶劑，根據(jù)相似相容原則，適合溶解極性類似的膽固醇。②EGTA對(duì)各類結(jié)石進(jìn)行溶石實(shí)驗(yàn)，4h內(nèi)溶合率分別為固醇型5%～10%，混合型20%～30%，色素型80%～90%。表明EDTA是色素型結(jié)石的良好溶劑；因其色素型結(jié)石中膽紅素鈣含量＞60%，而EGTA能有效地溶解其中的鈣質(zhì)，它可以在Mg2+存在下與Ca2+絡(luò)合，比乙二胺四乙酸或其二鈉鹽對(duì)鈣的絡(luò)合效果更好。③PEG-200為非離子型或脂型表面活性劑，產(chǎn)品無(wú)毒、無(wú)刺激性，水溶性，且與許多組分有良好的相容性。將PEG-200與其他2種組分組成ETBE-EGTAPEG-200混合溶石劑，分別對(duì)3種膽結(jié)石進(jìn)行溶石實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明，各類結(jié)石體外溶石率均高達(dá)90%～100%。這說(shuō)明PEG-200充分發(fā)揮了表面活性劑的作用，可將極性弱的ETBE溶解固醇型和極性較強(qiáng)的EGTA溶解色素型的組分間具有相互增溶的作用，能充分發(fā)揮各組分的協(xié)同作用。

2.2 溶石劑灌注膽囊的局部毒性實(shí)驗(yàn)：大白兔膽囊及機(jī)體其他重要臟器毒性同等劑量混合溶石劑較ETBE明顯減少，在所劑量下，幾乎不會(huì)引起大白兔局部或全身毒性。說(shuō)明混合溶石劑中的EGTA和PEG-200與ETBE的協(xié)同作用可大大降低ETBE的毒性。見表1。

表1 不同溶石劑的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.3 腹腔內(nèi)溶石劑LD50實(shí)驗(yàn)：腹腔內(nèi)注射ETBE后，小鼠均即刻表現(xiàn)奔跑、亂跳和不斷抓腹部，約5min后轉(zhuǎn)平靜，繼而呈神經(jīng)系統(tǒng)抑制狀態(tài)，全身肌張力下降，呼吸急促，約1h恢復(fù)正常。如果1h內(nèi)不能恢復(fù)，動(dòng)物存活的可能性小。所致死的動(dòng)物絕大多數(shù)在注射后2h內(nèi)死亡。ETBE的腹腔注射LD50= 1.88mL/kg，其95%的可信區(qū)間=1.73～2.02 mL/kg。對(duì)死亡小鼠尸解和有關(guān)臟器病理檢查發(fā)現(xiàn)，動(dòng)物腹腔內(nèi)都無(wú)出血和腹水，也無(wú)血腫；肝臟有瘀血斑和不同程度的壞死；雙肺明顯出血損害；腎臟和心臟正常。ETBE致死情況，見表2。

表2 小白鼠腹腔注射ETBE后結(jié)果

腹腔內(nèi)注射混合溶石劑后，小鼠均奔跑加快，略有不適感，2min后轉(zhuǎn)平靜，對(duì)神經(jīng)系幾乎無(wú)抑制，全身肌張力下降不明顯，呼吸略有加快，20min恢復(fù)正常。混合溶石劑的腹腔注射LD50=2.28mL/kg，其95%的可信區(qū)間=1.98～2.06mL/kg。對(duì)死亡小鼠尸解和有關(guān)臟器病理檢查發(fā)現(xiàn)，動(dòng)物腹腔內(nèi)都無(wú)出血和腹腔，也無(wú)血腫；肝臟略有淡色出血點(diǎn)，幾乎無(wú)壞死斑點(diǎn)；雙肺略顯出血損害；腎臟和心臟正常。混合溶石劑致死情況，見表3。

表3 小白鼠腹腔注射混合溶石劑后結(jié)果

對(duì)比混合溶石劑和ETBE的腹腔注射LD50，混合溶石劑要比ETBE增加21.3%。表明混合溶石劑的全身毒性要比ETBE小得多。

3 討 論

灌注溶石是直接把ETBE-EGTA-PEG-200混合溶石劑注入膽囊或膽總管內(nèi)，直接溶石。本研究為混合溶石劑，由于添加了其他2種無(wú)毒組分，與ETBE具有協(xié)調(diào)作用，所以這種混合溶石劑較單獨(dú)使用ETBE的毒性小得多。EGTA在實(shí)驗(yàn)中對(duì)色系型結(jié)石溶石率可達(dá)80%～90%，它的毒性反應(yīng)是EGTA與Ca2+絡(luò)合后，尤其是與中樞神經(jīng)中的Ca2+絡(luò)合后，降低下丘腦神經(jīng)細(xì)胞中的Ca2+，導(dǎo)致下丘腦環(huán)磷酸腺苷的增高引起EGTA性發(fā)熱。同樣ETBE-EGTA-PEG-200混合后，這種發(fā)熱也降低，但仍有引起發(fā)熱的例數(shù)。PEG-200可作為多種制劑的載體。

本研究混合溶石劑對(duì)大白兔膽囊灌注實(shí)驗(yàn)的毒性影響極小；對(duì)小白鼠的全身實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，混合溶石劑的LD50=2.28mL/kg，其95%可信區(qū)間= 1.98～2.06mL/kg，ETBE的LD50=1.88mL/kg，其95%可信區(qū)間=1.75～2.02mL/kg，混合溶石劑的LD50比ETBE增加21.3%。進(jìn)一步說(shuō)明其毒性小，有望成為一種溶解各類膽結(jié)石的安全有效的溶石劑，從而解除患者的痛苦。

［1］ BELPOGGI F，SOFFRITTI M，MALTONI C.Methy1-tertiatybuty1 ether（MTBE）-a gaso1ine additive-causes testicu1ar and 1ympho-haematopoietic cancer in cats［J］.Toxico1 Ind Heath，1995，11（2）：119-149.

［2］ PEINE CJ.Ga11stone disso1ving agents［J］.Gastroentero1 C1in North Am，1992，21（3）：715-741.

［3］ 劉君，蔡端，張俊華，等.乙基叔丁基醚對(duì)動(dòng)物局部和全身毒性研究［J］.上海醫(yī)學(xué)，1997，20（5）：270-272

［4］ 張煒平，梁彩云，張慧靈，等.合用苦參堿對(duì)3，15-二乙酰苯甲酰烏頭寧鎮(zhèn)痛作用及毒性的影響［J］.包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1995，11（2）：12-14.

（本文編輯：劉斯靜）

R994.13

B

1007-3205（2012）10-1191-03

2011-11-29；

2012-05-21

張建群（1954-），男，河北巨鹿人，河北省巨鹿縣醫(yī)院主治醫(yī)師，從事肝膽外科疾病診治研究。

*通訊作者

10.3969/j.issn.1007-3205.2012.10.031