國產氟哌噻噸美利曲辛人體生物等效性研究

張鈺哲，孟慶芳，程遠國*

（1.大理學院基礎醫學院，云南大理 671000；2.軍事醫學科學院微生物流行病研究所，北京 100071）

國產氟哌噻噸美利曲辛人體生物等效性研究

張鈺哲1，孟慶芳2，程遠國2*

（1.大理學院基礎醫學院，云南大理 671000；2.軍事醫學科學院微生物流行病研究所，北京 100071）

目的：研究單劑量口服國產和進口氟哌噻噸美利曲辛片在健康受試者體內的藥動學特征，評價其是否具有生物等效性。方法：采用隨機、雙交叉試驗設計。22名健康男性受試者分別單次口服氟哌噻噸美利曲辛片10 mg（2片）后血漿中氟哌塞噸和美利曲辛的濃度采用LC-MS/MS法檢測，藥動學參數用SigmaPLot 2001和Orign 6.0軟件程序計算。結果：國產和進口制劑中氟哌噻噸峰濃度Cmax分別為164.8±55.2和161.5±51.9 pg·mL-1；達峰時間Tmax分別為9.0±4.5和9.6±3.9 h，AUC0→t分別為5 622±2 243和5 412±1 677 pg·h-1；美利曲辛Cmax分別為10.9±6.2和9.6±4.4 ng·mL-1；Tmax分別為4.7±0.9和4.4±1.1 h。AUC0→t分別為312±155和291± 139 ng·h-1；國產及進口制劑的Cmax、AUC0→120h、AUC0→∞等藥動學參數經對數轉換后的統計學處理（方差分析及雙單側t檢驗），國產與進口制劑藥物間差異均無統計學意義（P＞0.05）。國產制劑的相對生物利用度氟哌噻噸為103.2±19.9%，美利曲辛為107.1± 14.5%（n=22）。結論：國產與進口氟哌噻噸美利曲辛片具有生物等效性。

氟哌塞噸；美利曲辛；LC-MS/MS法；藥動學；生物等效性

氟哌噻噸美利曲辛是由兩種非常有效的化合物組成的合劑。氟哌噻噸是一種神經阻滯劑，小劑量具有抗焦慮和抗抑郁作用；美利曲辛是一種雙相抗抑郁劑，低劑量應用時具有興奮性。兩種成份的合劑具有抗抑郁、抗焦慮和興奮性〔1〕。臨床上主要用于治療輕、中型焦慮、神經衰弱、心因性抑郁、抑郁性神經官能癥、隱匿性抑郁、心身疾病伴焦慮和情感淡漠，更年期抑郁、嗜酒及藥癮者的焦躁不安及抑郁。與同類型的其他藥物相比，該藥具有毒副作用小、療效好的特點。本試驗研究了國產氟哌噻噸美利曲辛片與進口氟哌噻噸美利曲辛片的人體相對生物利用度，并評價兩者的生物等效性，為國產藥臨床合理用藥提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 藥品及試劑國產氟哌噻噸美利曲辛片，湖南華納大藥廠有限公司生產，批號20080411，規格：美利曲辛10 mg/片，氟哌噻噸0.5 mg/片。參比試劑：進口氟哌噻噸美利曲辛片，丹麥靈北制藥公司生產，批號1056，規格：美利曲辛10 mg/片，氟哌噻噸0.5 mg/片。莫沙必利（內標），沈陽藥科大學藥物制劑教研室提供，含量99.5%。甲醇、乙腈為色譜純，購自美國Sigma公司；甲酸為色譜純，購自美國Tedia公司；其他試劑為分析純。

1.2 儀器AgiLent 1100型高效液相色譜儀（美國安捷倫公司），API4000三重四級桿串聯質譜儀，配有電噴霧離子源（ESI），AgiLentRXC8（2.1 mm×150 mm，5μm），TDL5M臺式大容量冷凍離心機。

1.3 色譜條件液相條件：分析柱為AgiLent RXC8柱（2.1 mm×150 mm，5μm），流動相為乙腈-水-甲酸=60∶40∶0.1（V∶V∶V），流速為0.20 min-1；柱溫25℃。進樣體積20μL，分析時間4 min。質譜條件：離子源為電噴霧離子源，正離子掃描；碰撞氣（coLLision gas）壓力5 p.s.i.；氣簾氣（curtain gas）壓力10 p.s.i.；源內氣體1（GS1，N2）流速65 p.s.i.；源內氣體2（GS2 N2）流速65 p.s.i.；離子源噴霧電壓（ion spray voltage），4 500 V；離子源溫度650℃。Q1、Q3分辨率均設置為unit。用于定量分析的離子通道分別為氟哌噻噸435.3/305.1，美利曲辛292.2/247.2，莫沙必利422.2/198.1。

1.4 試驗設計本研究采用隨機、開放、交叉的設計〔2〕。22名男性健康受試者，年齡（24.9±1.3）歲；身高（173.56±5.23）cm；體重（65.96±6.33）kg，體重偏差不超過中國人標準體重的10%，體質指數（BMI）為（21.9±1.3）kg·m-2。體格檢查和實驗室檢查（ECG、臨床血、尿常規和血生化）均屬正常。所有受試者試驗前在自愿的基礎上簽署知情同意書。受試者在試驗前2周內未服用任何其他藥物，試驗期間禁煙、酒、茶及含咖啡因的飲料。

本研究為單次劑量給藥試驗，采用兩制劑隨機雙交叉試驗設計。受試者隨機分為2組，第1周期I組服試驗制劑1片（含美利曲辛10 mg，氟哌噻噸0.5 mg），II組服參比制劑1片（美利曲辛10 mg/片，氟哌噻噸0.5 mg）；經14 d清洗期后，I、II兩組交換服藥品種進行第2周期試驗。服藥前（0 h）及服用后0.5、1、2、3、4、5、6、8、11、15、24、36、48、72、96、120 h由肘靜脈采血3 mL，血樣置于肝素化試管中，立即離心（3 000 r·min-1，15 min）取血漿置于-70℃保存備測，采血和血漿分離時注意避光。

1.5 血樣的預處理取被測血漿0.5 mL，加入內標工作液40μL，0.2 M的磷酸鈉200μL，混勻，加入3 mL乙醚旋渦混合3 min，離心10 min（3000 rpm），轉上清液入玻璃試管，重復提取一次，合并上清，氮氣揮干，殘渣用200μL流動相溶解，進LC-MS/MS，進樣量為50μL，由藥物峰面積與內標的峰面積比在各自的標準曲線上求得氟哌噻噸和美利曲辛濃度〔3〕（注：樣品濃縮2.5倍）。

1.6 統計學處理Cmax和Tmax用實測值表示；AUC0→t用梯形法計算，AUC0→∞=AUC0→t+Ctn/λz，其中，tn是最后一次可測濃度的取樣時間，Ctn是測定的最后一點的血藥濃度，λz是末端消除速度常數。試驗數據用表示，AUC0→t，AUC0→∞和Cmax經對數轉換后進行方差分析（Sigma PLot 2001，Orign 6.0軟件）和雙單側t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義，評價2種制劑的生物等效性。經對數轉換后的（122α）置信區間分析結果AUC0→t和Cmax的90%可信限如分別在80%~ 125%和70%~143%之內，則可認定受試制劑與參比制劑生物等效〔4〕。

2 結果

2.1 測定方法認證

2.1.1色譜系統適應性 上述色譜條件下測得的對照品、服藥前空白血漿和受試者樣品的色譜圖見圖1。本法分離良好，保留時間：氟哌噻噸約1.15 min，美利曲辛約1.59 min，內標約1.04 min，無內源性物質干擾〔5〕（見圖1）。

圖1 氟哌噻噸和美利曲辛色譜圖（A：空白血漿；B：空白血漿加入標準品（1μg·L-1）；C：血漿樣品）

2.1.2標準曲線及線性范圍 取空白血漿0.5 mL共10份，分別加入不同濃度的標準工作液，使氟哌噻噸和美利曲辛的血漿濃度分別為0.015 6和0.313 ng· mL-1，0.031 3和0.625 ng·mL-1，0.062 5和1.25 ng·mL-1，0.125和2.5 ng·mL-1，0.25和5 ng·mL-1，0.5和10 ng· mL-1，1和20 ng·mL-1，5和100 ng·mL-1，按“血漿樣品的處理”項下同法操作，每一濃度進行雙樣本分析，進樣20μL，記錄色譜圖；以氟哌噻噸和內標莫沙必利面積比（Y）與氟哌噻噸濃度和內標莫沙必利濃度比（X）進行線性回歸，得回歸方程為：Y=0.0211X+ 0.001 04（r=0.997 9），權重因子為1/x。血漿中氟哌噻噸線性范圍在0.0156～5 ng·mL-1濃度范圍內與峰面積比線性良好，所以血漿中氟哌噻噸最低定量濃度為15.6 pg·mL-1。以美利曲辛和莫沙必利內標面積比（Y）和內標莫沙必利濃度比（X）進行線性回歸，得回歸方程為：Y=0.925X+0.072 4（r=0.998 7），權重因子為1/x，本法測定血漿中美利曲辛線性范圍在0.313~ 100 ng·mL-1濃度范圍內與峰面積比線性良好，所以血漿中美利曲辛最低定量濃度為0.313 ng·mL-1。

2.1.3精密度和回收率 取空白血漿100μL，制備含氟哌噻噸濃度和美利曲辛低、中、高3個濃度（分別為0.031 3和0.625 ng·mL-1、0.25和5 ng·mL-1、5和100 ng·mL-1）的質量控制樣品，按“1.5”項下操作，每一濃度進行6個平行樣本分析，連續測定3 d，根據當天的標準曲線，計算QC樣品的測得濃度，根據QC樣品結果計算本法的準確度與精密度。同時，另配制含氟哌噻噸濃度和美利曲辛濃度分別為0.031 3和0.625 ng·mL-1、0.25和5 ng·mL-1、5和100 ng·mL-1的流動相溶解樣品各6份，N2吹干，殘渣用200μL流動相溶解，進樣50μL，記錄氟哌噻噸和內標峰面積，及美利曲辛和內標峰面積。以血漿樣品峰面積與流動相溶解樣品峰面積的比值計算提取回收率，結果見表1和表2。

表1 氟哌噻噸的精密度和回收率（n=6）

表2 美利曲辛的精密度和回收率（n=6）

2.2 血藥濃度-時間曲線和藥動學參數

2.2.1血藥濃度-時間曲線 22名健康志愿者口服氟哌噻噸美利曲辛試驗制劑和參比制劑后，平均血藥濃度-時間曲線，見圖2、3。

圖2 單劑量給予氟哌噻噸2種制劑后的平均藥-時曲線

圖3 單劑量給予美利曲辛2種制劑后的平均藥-時曲線

2.2.2藥動學參數 22名健康志愿者口服氟哌噻噸美利曲辛試驗制劑與參比制劑后主要藥動學參數，見表3。

表3 22名健康受試者口服試驗或參比氟哌噻噸美利曲辛片主要藥動學參數

2.3 生物等效性評價將單次口服試驗制劑和參比制劑氟哌噻噸美利曲辛（T）2片（氟哌噻噸0.5 mg/片，美利曲辛10 mg/片）后的AUC（0～120h）、AUC（0～∞）、Cmax等參數對數轉換后進行方差分析，再采用雙單側t檢驗比較兩種劑型的生物等效性。結果顯示：AUC（0～120h）、AUC（0～∞）、Cmax在劑型間和周期間的F值均小于F（1-0.05）的臨界值，即P＞0.05，表明AUC（0～120h）、AUC（0～∞）、Cmax在劑型間和周期間無明顯差異。其中氟哌噻噸AUC（0～120h）、AUC（0～∞）的90%置信區間分別為98.6%、105.4%和92.9%、112.8%，雙單側t檢驗二者的t1、t2均大于t（1-0.05）；美利曲辛AUC（0～120h）、AUC（0～∞）的90%置信區間分別為88.4%、122.8%和90.7%、123.4%，雙單側t檢驗二者的t1、t2均大于t（1-0.05）。氟哌噻噸和美利曲辛的AUC（0～120h）、AUC（0～∞）、Cmax在個體間的F值均大于F（1-0.05）的臨界值，表明AUC（0～120h）、AUC（0～∞）、Cmax在個體間差異有統計學意義（P＜0.05）。兩種劑型間的Tmax差異無統計學意義（P＞0.05）。從以上結果統計分析表明：試驗試劑與參比試劑在全身暴露水平（AUC與Cmax）上生物等效。

2.4 不良事件參加本實驗的22名健康受試者在整個試驗過程中未發現任何不良事件。

3 討論

我們采用LC-MS/MS法測定氟哌噻噸和美利曲辛的血漿濃度，與傳統研究方法〔6〕相比分析周期短、成本低、靈敏度高，能達到良好的分離效果，血漿中內源性雜質對氟哌噻噸、美利曲辛及內標均無干擾，適合于藥動學和生物利用度研究。對氟哌噻噸和美利曲辛的藥動學研究表明：氟哌噻噸美利曲辛片口服后吸收較慢，平均Tmax分別為9.0±4.5 h和9.6±3.9 h，Cmax分別為164.8±55.2 pg·mL-1和10.9± 6.2 ng·mL-1與文獻〔7〕報道的差別較大，有待進一步研究。此外，對于此文中的國產和進口兩種制劑從以上統計數據分析來看在全身暴露水平上生物等效。由于氟哌噻噸美利曲辛是兩種成份的合劑，具有抗抑郁、抗焦慮和興奮性，故建議臨床使用該類藥物時，應根據患者的具體情況調整給藥劑量，以保障臨床用藥的安全性和有效性。

〔1〕張強.黛力新在臨床應用中的注意事項〔J〕.中國實用醫藥，2010，5（19）：225.

〔2〕國家食品藥品監督管理局.化學藥物臨床藥代動力學研究技術指導原則〔M〕.上海：上海科學技術出版社，2005：140-159.

〔3〕金春暉，鮑立曾，孫成春.國產與進口苯磺酸氨氯地平片的人體生物等效性研究〔J〕.中華實用醫藥雜志，2007，7（9）：779-781.

〔4〕李雪寧，許劍安，陳偉力，等.國產和進口雷米普利片的藥動學和生物等效性研究〔J〕.中國臨床藥學雜志，2009，18（1）：9-13.

〔5〕Che J，Meng Q，Chen Z，et al.VaLidation of a sensitive LC/ MS/MS method forsimultaneous quantitation of flupentixol and melitracene in human plasma〔J〕.J.Pharmbiomed Anal.2007，45（5）：785-792.

〔6〕宋一，劉艷.HPLC測定氟哌噻噸美利曲辛片的含量及有關物質〔J〕.中國藥事，2007，21（11）：894-896.

〔7〕王凱.仿制氟哌噻噸美利曲辛片與原研制劑人體內藥動學比較研究〔D〕.長沙：中南大學，2010：140-159.

（責任編輯 毛本勇）

Human Bioequivalence Study of Domestic and Imported Flupentixol and Melitracen Tablets

ZHANG Yuzhe1,MENG Qingfang2,CHENG Yuanguo2*
（1.Pre-clinical College,Dali University,Dali,Yunnan 671000,China; 2.Institute of Microbiology and Epidemiology,Academy of Military Medical Sciences,Beijing 100071,China）

Objective:To study the pharmacokinetics and bioequivalence of domestic and imported Flupentixol and Melitracen tablets in healthy subjects.Methods:Twenty-two healthy male subjects in a randomized crossover design were given a single oral dose of 10 mg domestic and imported Flupentixol and Melitracen tablets.Plasma concentrations of the subjects were determined by liquid chromatography-tandem mass spectrometry（LC-MS/MS）.The pharmacokinetic parameters were calculated applied SigmaPLot 2001 and Origin 6.0 software.Results:The main pharmacokinetic parameters of domestic and imported Flupentixol and Melitracen were as follows.Flupentixol:Cmaxwere 164.8±55.2 and 161.5±51.9 pg·mL-1;Tmaxwere 9.0±4.5 and 9.6±3.9 h;AUC0→t were 5 622±2 243 and 5 412±1 677 pg·h-1,respectively.Melitracen:Cmaxwere 10.9±6.2 and 9.6±4.4 ng·mL-1;Tmaxwere 4.7±0.9 and 4.4±1.1 h;AUC0→t were 312±155 and 291±139 ng·h-1,respectively.The statistic analysis of two formulations was conducted by analysis of variance,two one-sided tests and confidence intervals,which demonstrated that there were no significant differences between domestic and imported formulations in main pharmacokinetic parameters（P>0.05）.The mean relative bioavailability of domestic formulation of Flupentixol was 105.42±22.23%,and Melitracen was 107.29±20.40% （n=24）.Conclusion:The domestic Flupentixol and Melitracen are bioequivalent to the imported formulation.

Flupentixol;melitracen;LC-MS/MS;pharmacokinetics;bioequivalence

R977.3

A

1672-2345（2012）06-0001-04

2012-01-19

2012-03-20

張鈺哲，助教.主要從事臨床前藥代動力學研究. *通信作者：程遠國，博士生導師、研究員.